巨細胞病毒IgM抗體自制室內質控血清的應用及評價

戴薇，李世云，劉聰，肖德俊，余路虎

(贛州市人民醫院檢驗科，江西贛州341000)

巨細胞病毒IgM抗體自制室內質控血清的應用及評價

戴薇，李世云，劉聰，肖德俊，余路虎

(贛州市人民醫院檢驗科，江西贛州341000)

目的自制巨細胞病毒IgM抗體（HCMV-IgM）弱陽性外部對照質控血清，評價其臨床應用的可行性。方法收集我院HCMV-IgM抗體陽性血清分別與健康人血清混合進行倍比稀釋，選擇S/CO在1.5～3之間稀釋度制備室內質控血清，連續檢測20批次，采用“即刻法”分析檢測結果，20批次后結果繪制Levey-Jennings質控圖，監測室內質控動態。結果自制HCMV-IgM質控血清與北京貝爾有限公司提供的質控血清，兩者結果進行對比，CV值比較無統計學差異（P＞0.05），自制HCMV-IgM質控血清變異系數（CV）均小于20%，穩定性符合國家質控物要求。結論自制HCMV-IgM質控血清有很好的穩定性和精密度，可作為實驗室檢測HCMV-IgM抗體的室內質控血清。

巨細胞病毒IgM抗體；自制室內質控血清；ELISA法

人巨細胞病毒（HCMV）又稱巨細胞包涵體病毒，是人類病毒性疾病的常見病原體之一。妊娠婦女感染HCMV可通過胎盤感染胎兒，引起流產、早產、死胎、胎兒宮內發育遲緩，胎兒畸形等[1]。器官移植患者、艾滋病患者、淋巴惡性增生患者或癌癥患者，HCMV感染會因為病毒擴散或侵入內臟產生嚴重的癥狀，如脾大、肺炎、溶血性貧血癥、心肌炎和腦炎。HCMV感染對這類患者可能是致命的[2]。現階段各地市縣級醫院檢測HCMV-IgM抗體大多都是采用酶聯免疫吸咐試驗（ELISA）。為了保證實驗結果的準確性，實驗室室內質量控制是保證檢驗質量的一個重要環節[3]。目前，臨檢中心尚無提供商品化的HCMV-IgM室內質控血清，通過其他途徑獲得不僅十分困難且價格昂貴，本研究通過自制HCMV-IgM弱陽性質控血清與北京貝爾HCMV-IgM質控血清進行比較，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源收集贛州市人民醫院住院和門診患者，HCMV-IgM抗體陽性血清，以及篩選部分陰性健康體檢者血清（無脂血、溶血、黃疸、無污染且肝炎標志物、HIV、梅毒抗體均陰性），分別將上述血清充分混勻，經3000×g離心15min去除蛋白質沉淀，56℃加熱30min滅活處理備用。用處理后的健康體檢者血清對HCMV-IgM抗體陽性血清進行倍比稀釋，測定吸光度值（OD）并計算S/CO值。根據ELISA方法學的要求，質控血清S/CO值應在1.5～3.0范圍之間[4]，以S/CO值介于1.5～3.0之間對應的濃度作為室內質控血清的最佳稀釋濃度進行稀釋配制，高壓滅菌，加入0.1‰硫柳汞防腐[5，6]，按每份200μl用量分裝標記至冷凍管內，-20℃保存。

1.2 儀器與試劑安圖Anthos 2010酶標儀；鄭州基波JB－1全自動快速立式洗板機；四川諾亞NY/ MMJ酶聯免疫反應加速儀；HCMV-IgM質控血清和ELISA試劑均由北京貝爾生物工程有限公司提供。

1.3 檢測方法嚴格按照SOP文件及試劑說明書操作，試驗前從冰箱取出試劑及質控血清，放置恢復室溫，將自制室內質控血清與北京貝爾質控血清連同患者標本一同試驗，剩余質控血清放置2～8℃冰箱冷藏，使用一周。

1.3.1 “即刻法”質控分析[7]連續測定HCMV-IgM自制質控血清及北京貝爾質控血清3次，計算出檢測結果的平均值(x)和標準差（s），并按照公式計算SI上限和SI下限。

將SI上限和SI下限與對應SI值進行比較，若SI上限和SI下限均≤n2s值，表明結果在控；若SI上限或SI下限在n2s和n3s之間，表明結果處于“告警”狀態；若SI上限或SI下限≥n3s值，表明結果失控。如測定結果在告警和失控狀態都應棄去。

1.3.2Levey-Jennings質控圖的繪制[8]計算HCMV-IgM自制質控血清20個批次檢測結果的均值(x)和標準差（s），輸入東軟LIS作質控圖，依據Westgard多規則質控方法以±2s為警戒限，±3s為失控限。

1.4 統計學方法利用SPSS 21.0統計軟件對數據進行分析，計量資料以均值±標準差（x±s）表示，多均數比較采用方差分析，若有差異，利用Dunnett-t檢驗再進行兩者間比較，定檢驗水準ɑ=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 連續檢測20批次的自制HCMV-IgM弱陽性質控血清S/CO均值(x)為2.1，CV值為13.61%；北京貝爾HCMV-IgM質控血清S/CO均值(x)為2.95，CV值為14.6%；兩者CV值比較無統計學差異（P＞0.05）。見表1。

表1 兩種質控血清即刻法結果比較

2.2 自制質控血清穩定性和精密度“即刻法”20批次結果（S/CO值）計算出的x、s輸入東軟LIS Levey-Jennings質控圖中，當月結束后匯集前面所有在控結果，計算累積x、s作為下個月的x、s，以次類推，我室連續8個月測定的自制HCMV-IgM弱陽性質控血清結果（S/CO值）CV值均＜20%，符合室內質控要求，每月與第1個月的檢測結果比較均無統計學差異(P＞0.05)。見表2。

3 討論

臨床實驗室質量管理的第一要素是選擇和執行適當的室內質量控制（IQC）程序，依據測定項目的質量要求和方法特點選擇統計學標準、控制規則和質控的數目，并嚴格執行IQC程序以提高IQC的質量[9]。實驗室室內質控的目的是為了提高該室的精密度水平，進而提高檢測結果的準確性[10]。室內質控品是臨床檢驗實驗室質量控制體系不可缺少的一部分，是臨床檢測質量保證的根源。

表2 自制質控血清穩定性和精密度觀察

現各醫院ELISA是免疫學檢測抗體中普遍應用的試驗，除了乙肝、梅毒、艾滋、丙肝，臨檢中心提供了室內質控品外，其它由于價格昂貴，獲得途徑難等原因，不能滿足臨床實驗室的檢測需求。ELISA由于其操作簡便、成本低、適合大批量檢查等優點，在整個操作過程中會受到許多因素的影響，如標本的處理，加樣、孵育的溫度和時間，洗板，洗液的配制濃度，顯色時間以及計算臨界值等，都會導致檢測結果出現較大偏差，為了保證檢測質量，試驗操作時除了試劑盒里配制的陰、陽性內部對照外，還應同時設立外部弱陽性對照，以監測試驗結果的準確性與穩定性。ELISA試劑盒內陽性對照多是合成的半成品或片段，一般不是從陽性標本中獲得[11]，不能用來制備質控品。質控樣本的基質須與待測標本一致，因此制備弱陽性質控血清時，我室是收集陽性病人血清，用健康人血清作為基質，稀釋陽性標本血清，排除基質效應。為保證蛋白質處于天然的濃度和狀態，最好不用生理鹽水或其他緩沖液稀釋。在分析全程的諸環節中，室內質控是比較重要的環節，對提高檢測質量起了一定的作用，因此建立室內質控非常重要[12]。

本研究采用“即刻法”質控方法對自制室內質控血清進行檢測。該方法通過Grubbs異常值取舍法，先以首批3個檢測結果確定SI上限值和下限值，之后可對每批次結果是否異常進行判斷并取舍，達到20次檢測結果后，再按照常規Levey-Jennings質控圖和Westgard多規則法確定質控界限和范圍進行常規室內質量控制[13]。變異系數（CV）是反應各次OD值相對于均值的離散程度的一個指標，可以用于衡量被檢標本檢測的重復性或精密度，進一步監控操作的一致性及試劑盒的批內差異和批間差異[14]。結果表明，各批次SI上限和SI下限均在控，CV值符合質控物要求，控制在20%以內[15-17]，說明質控效果和穩定性好。

由此可見，自制HCMV-IgM質控血清有很好的穩定性、精密度，方便臨床進行室內質量控制和質量評價，且成本低廉，制備簡單，方便易行。可作為實驗室檢測HCMV-IgM抗體的室內質控血清。

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The application and evaluation of the self-made anti-HCMV quality control serums

DAI Wei，LI Shiyu，LIU Cong，XIAO Dejun，YU Luhu.
Department of Clinical Laboratory；Ganzhou People's Hospital，Ganzhou Jiangxi 341000，China.

Objective To investigate the clinical feasibility of the anti-HCMV weakly positive serum as correlated external quality control(QC).Methods The anti-HCMV positive serums from the HCMV-infected patients in our hospital were collected and mixed with serums from healthy controls.Then the mixtures were serially diluted and detected for their S/CO value.Under the dilution ratio，corresponding to the S/CO value between 1.5 and 3.0，the diluted serum was selected as the standard for extracting the internal QC serums.The prepared QC serums were used to detect 20 batches of samples and the results were analyzed by using the instant method.Finally，the Levey-Jennings quality control chart was drawn to monitor the dynamic of the internal quality control.Results The CV(coefficient of variation)values of the self-made anti-HCMV QC serums were compared with the QC serums supplied by Beijing Bell Company.There was no significant difference between them(P＞0.05).All the CV values of the self-made anti-HCMV QC serums were less than 20%and the stability was in accordance with the request of national quality content.Conclusion The self-made anti-HCMV QC serums have good stability and high degree of precision.It may be used as the internal QC serums for the laboratory examination HCMV-IgM antibody.

∶CMV-IgM antibody；Self-made quality control serum；ELISA

R446.62，R373.9

A

1674-1129(2017)03-0344-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.03.015

江西省贛州市科技計劃項目（GZ2015ZSF105）

戴薇，女，1982年生，學士，主管技師，醫學檢驗，研究方向免疫學，郵箱：13576692530@163.com