鹽酸西替利嗪巴布膏劑的藥動學和生物利用度研究

韓 璐，原永芳

·藥學研究·

鹽酸西替利嗪巴布膏劑的藥動學和生物利用度研究

韓 璐，原永芳

目的 研究鹽酸西替利嗪巴布膏劑在大鼠體內(nèi)的藥代動力學特征，并與口服給藥的藥動學進行比較，考察生物利用度。方法 選用SD大鼠，分為巴布膏劑組和口服給藥組，采用高效液相色譜法測定血藥濃度；并剝?nèi)∈Ｓ嗟奈魈胬喊筒几鄤瑴y定剩余藥量。結果 西替利嗪巴布膏劑組的Tmax為2.35 h，Cmax為2.68 μg/mL，AUC為21.01 μg·h/mL，MRT為23.26 h；西替利嗪口服組的Tmax為1.11 h，Cmax為11.65 μg/mL，AUC為35.62 μg·h/mL，MRT為12.13 h。扣除巴布膏劑中的剩余藥量，按照實際進入皮膚的劑量計算得西替利嗪巴布膏劑相當于片劑的生物利用度為30.81%；不扣除巴布膏劑中的剩余藥量，西替利嗪巴布膏劑相當于片劑的生物利用度為14.75%。結論 西替利嗪巴布膏劑的血藥濃度平穩(wěn)而持久，具有緩釋的特征。

西替利嗪；巴布膏劑；藥動學；生物利用度

0 引言

鹽酸西替利嗪(Cetirizine hydrocloride，CET)是一種高選擇性的H1受體拮抗劑，用于治療過敏性疾病。與其他抗組胺藥相比，CET中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活性雖然較低，但仍有嗜睡、頭暈等不良反應[1]。其具有一個獨特的藥理作用，即除在過敏反應早期阻斷H1受體外，還對過敏反應后期起重要作用的嗜酸性粒細胞有強大的抑制作用。目前常用的CET多為口服制劑，研究表明，其在給藥24 h后血藥濃度已經(jīng)很低，但仍具有較好的抗皮膚過敏的效果，并維持較長時間[2]。因此，筆者將其開發(fā)成西替利嗪巴布膏劑[3]，以水溶性高分子材料為基質(zhì)，載藥量大，對皮膚無刺激，且透皮效果好；不僅能保持良好的治療效果，還可以降低中樞抑制作用[4]。CET巴布膏劑的藥動學研究選用SD大鼠，通過眼眥靜脈叢采血方式，進行體內(nèi)血藥濃度的測定，并與CET口服給藥組進行對比，考察生物利用度和藥動學參數(shù)。

1 儀器和材料

SHIMADZU LC-10A高效液相色譜儀(日本島津公司)；低速離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠)；TGL-16G型高速離心機(上海安亭科學儀器廠)；渦旋混合器(上海琪特分析儀器有限公司)。

枸櫞酸鈉、枸櫞酸、乙酸乙酯、磷酸、磷酸二氫鈉、三乙胺、十二烷基硫酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鈉，以上試劑均為分析純，購于上海化學試劑公司。西替利嗪原料藥(江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司)；乙腈(英國MERCK)，色譜純；CET巴布膏劑(自制)；脫毛膏(日本Kanebo)。

SD大鼠(西普爾-必凱動物有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK滬2008-0016，使用許可證號：SYXK滬2008-0050)。

2 方法和結果

2.1 大鼠血樣中CET含量測定方法的建立

2.1.1 血漿樣品的預處理 精密量取大鼠血漿0.5 mL于10 mL具塞離心管中，加入pH 5.5的枸櫞酸緩沖液0.5 mL，渦旋振蕩0.5 min后，精密加入乙酸乙酯5 mL，渦旋振蕩3 min后，3 000 r/min離心10 min，精密吸取上層乙酸乙酯4 mL于另一具塞離心管中，再加入乙酸乙酯5 mL提取1次，合并乙酸乙酯液，在乙酸乙酯液中加入1.7%磷酸溶液100 μL反提后，渦旋3 min，3 000 r/min離心5 min，棄去乙酸乙酯層，取磷酸溶液20 μL進樣。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Hypersil ODS C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.02 mol/L NaH2PO4-三乙胺(50∶50∶0.15)，pH=3.1±0.1，內(nèi)含SDS 0.007 mol/L；流速：1.0 mL/min；檢測波長：231 nm；柱溫：室溫；靈敏度：0.01 AUFS；進樣量：20 μL。

2.1.3 標準曲線 精密稱取CET原料藥0.100 9 g于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度定容，得到1.009 mg/mL的CET儲備液。

精密量取上述儲備液0.02、0.1、0.2、1、2、4 mL，分別于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度定容，得到濃度為0.201 8、1.009、2.018、10.09、20.18、40.36 μg/mL的CET標準溶液。

分別于0.5 mL大鼠空白血漿中加入上述CET標準溶液0.5 mL，得到終濃度為0.100 9、0.504 5、1.009、5.045、10.09、20.18 μg/mL的標準血漿樣品系列。并按照血漿樣品預處理步驟和HPLC測定方法進行操作，典型圖譜見圖1。以測得的血漿中CET的濃度C為縱坐標、相應的峰面積A為橫坐標，得標準曲線C=6×10-5A+0.023 6(r2=0.999 8)。當信噪比(S/N)=3時，最低檢測限為0.5 ng。

圖1 CET大鼠血漿樣品色譜圖

2.1.4 方法回收率 按照“2.1.3”項下的操作方法配成低、中、高濃度的CET標準血漿樣品，并按照血漿樣品預處理步驟和HPLC測定方法進行操作，所得的測定結果代入標準曲線方程得出理論濃度，與實際濃度比較，計算方法回收率，見表1。

表1 血漿樣品中CET測定的方法回收率(n=5)

2.1.5 絕對回收率 從上述1.009 mg/mL的CET儲備液中精密量取0.01、0.1、1 mL分別于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度定容，得到濃度為0.100 9、1.009、10.09 μg/mL的CET標準溶液，直接通過HPLC進行測定，得出相應的峰面積。并與“2.1.3”項下的上述3個濃度的峰面積進行比較，即得CET在血樣提取中的絕對回收率，見表2。

表2 CET在血樣提取中的絕對回收率(n=5)

2.1.6 精密度實驗 按照“2.1.3”項下的操作方法配成低、中、高濃度的CET標準血漿樣品，分別于日內(nèi)4、6、8 h和日間1、2、3 d測定其濃度，根據(jù)標準曲線計算理論濃度和變異系數(shù)，得出平均日內(nèi)RSD為4.59%，平均日間RSD為5.88%，見表3。

表3 血漿樣品中CET測定的方法精密度(n=5)

2.2 實驗設計和樣本采集

2.2.1 實驗設計 CET巴布膏劑組：SD大鼠60只，雌雄各半，體重(200±20) g，隨機分為12組，每組5只。實驗前禁食飼養(yǎng)1 d，腹部用脫毛膏脫毛，溫水洗凈，飼養(yǎng)過夜。在腹部貼自制的CET巴布膏劑1貼，4 cm×4 cm，劑量為40 mg/kg，用紗布及膠布纏繞固定。于給藥后0.5、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24、48 h眼眥靜脈叢取血于預先肝素化的離心管中，6 000 r/min離心10 min后，取上層血清置于-20 ℃冰箱中儲存?zhèn)錅y。每個取血點采用1組，即5只大鼠，取血后直接處死，并剝?nèi)∈Ｓ喟筒几鄤瑴y定其中CET含量。

CET口服組：SD大鼠60只，雌雄各半，體重(200±20) g，隨機分為12組，每組5只。口服灌胃給予CET水溶液，劑量為10 mg/kg，于給藥后15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、48 h眼眥靜脈叢取血于預先肝素化的離心管中，并采用6 000 r/min離心10 min后，取上層血清置于-20 ℃冰箱中儲存?zhèn)錅y。每個取血點采用1組，即5只大鼠，取血后直接處死。

2.2.2 血藥濃度的測定 按照血漿樣品預處理步驟和HPLC測定方法進行操作，并根據(jù)血藥濃度測定的標準曲線計算血漿樣品中CET的含量。

2.2.3 CET巴布膏劑中剩余藥量的測定 將剝?nèi)〉氖Ｓ郈ET巴布膏劑(4 cm×4 cm)剪碎，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度定容，超聲30 min，浸泡過夜，并進行適當稀釋，3 000 r/min離心后進HPLC。按照含量測定標準曲線計算CET的含量。

2.3 實驗結果

2.3.1 藥時曲線 大鼠的血藥濃度為縱坐標、相應的取樣時間為橫坐標，繪制藥時曲線，見圖2。

圖2 CET巴布膏劑組與口服組的藥時曲線(n=5)

2.3.2 藥動學參數(shù) 巴布膏劑組藥動學數(shù)據(jù)采用非參數(shù)法計算，口服組藥動學數(shù)據(jù)用3P97軟件處理，藥動學參數(shù)見表4。

CET口服給藥后平均1.11 h達到峰值，Cmax為11.65 μg/mL，MRT為12.13 h，體內(nèi)藥動學行為符合一級吸收二室模型。CET巴布膏劑組的Tmax為2.35 h，Cmax為2.68 μg/mL，較口服組明顯減少，在達到藥效的同時，可減輕中樞抑制作用，MRT為23.26 h，比口服組顯著延長，血藥濃度在24 h仍可以測到，說明該貼劑具有緩釋的特點。

表4 CET藥動學參數(shù)(n=5)

2.3.3 巴布膏劑中剩余藥量 將巴布膏劑中的剩余藥量對時間作圖，見圖3。

圖3 CET巴布膏劑中剩余藥量與給藥時間的關系(n=5)

從圖中可以看出，2 h前巴布膏劑的剩余藥量呈遞減趨勢，2 h后逐步趨于穩(wěn)定。

2.3.4 巴布膏劑的相對生物利用度 扣除巴布膏劑中的剩余藥量，按照實際進入皮膚的劑量計算得CET巴布膏劑相當于片劑的生物利用度為30.81%；不扣除巴布膏劑中的剩余藥量，CET巴布膏劑相當于片劑的生物利用度為14.75%。

3 討論

3.1 血漿樣品的處理及流動相中的添加劑 血漿樣品的預處理用乙醚提取雖然較為干凈，但是提取率較低，用乙酸乙酯提取率較高但是蛋白等雜質(zhì)較多，因此采用稀磷酸溶液反提，在保證提取回收率的前提下，使體內(nèi)樣品提取色譜干擾減少，并在強洗脫流動相條件下使血漿樣品中的西替利嗪組分快速出峰[5]。

對于堿性藥物的高效液相色譜測定，離子對反相高效液相色譜是常用的方法[6]。在西替利嗪血藥濃度測定方法中，文獻采用短鏈昂貴的離子對試劑辛烷磺酸鈉，基于對分析成本的考慮和血漿樣品的復雜性，本實驗選擇國產(chǎn)SDS作為離子對試劑，較好地實現(xiàn)了血漿樣品中西替利嗪的分離分析，而且SDS具有的蛋白增溶作用，使反相色譜柱的壽命大大提高[7]。

西替利嗪的叔胺結構存在與固定相表面游離硅醇基之間的離子交換或氫鍵作用，使西替利嗪的色譜峰拖尾，保留時間延長甚至于柱內(nèi)滯留。在流動相中加入一定比例的有機胺掃尾劑，可以競爭、抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基活性，使堿性藥物易于出峰，改善峰形[8]。經(jīng)優(yōu)化考察，三乙胺是較理想的掃尾劑，且以0.007mol/L濃度為宜。

3.2 藥動學試驗采血及給藥劑量的確定 本試驗采用SD大鼠作為實驗動物，考慮到大鼠的血量有限，不能反復采集；因此每只大鼠只采血1次，每個時間點采用一組大鼠，取血后直接處死。

藥動學實驗中巴布膏劑組的給藥劑量是根據(jù)藥效實驗的結果得出的[4]。藥效試驗中，巴布膏劑高劑量組的抑制率最明顯，因此，選擇高劑量作為藥動試驗的巴布膏劑組給藥劑量。口服組的給藥劑量根據(jù)藥理學實驗方法中人與大鼠的劑量換算得出。

3.3 巴布膏劑的剩余藥量及生物利用度 每個時間點的大鼠處死后，剝離巴布膏劑測定剩余含藥量，結果表明，2h后巴布膏劑的剩余藥量比較穩(wěn)定。藥動學參數(shù)也顯示，巴布膏劑的Tmax約為2h，因此，我們認為體內(nèi)血藥濃度達峰后，巴布膏劑以穩(wěn)定的透皮速率進入體內(nèi)，因為其中的含藥量遠遠大于血中的藥量，可以保證用藥時間內(nèi)的濃度梯度，以維持一定的釋藥速度。

由于經(jīng)皮給藥制劑是一類吸收不完全的產(chǎn)品，即在規(guī)定的用藥時間內(nèi)僅有部分藥量被吸收，因此在計算生物利用度時，將巴布膏劑中的剩余藥量扣除來計算，與口服相比的生物利用度為30.81%，平均藥物吸收百分比為47.88%；如果不扣除其中的剩余藥量，與口服相比的生物利用度為14.75%。

CET巴布膏劑使藥物的吸收和消除都較口服緩慢而持久，血藥濃度平穩(wěn)，但生物利用度較低，這主要是由藥物在巴布膏劑中的被動擴散滲透機制所決定的。敷貼于皮膚表面時，藥物從基質(zhì)中釋放出來的速率越慢，透過皮膚進入血循環(huán)的藥物量就越少，需要增加巴布膏劑中藥物的劑量來進行補償以保證有效的血藥濃度，透皮給藥的生物利用度低于口服給藥。因此，深入研究貼劑中藥物基質(zhì)控釋系統(tǒng)的處方組成，減少貼劑中藥物劑量，使藥物起效迅速，有望提高藥物的相對生物利用度。

[1]KappA,WediB.Chronicurticaria:clinicalaspectsandfocusonanewantihistamine,levocetirizine[J].JDrugsDermatol,2004,3(6):632-639.

[2]DayJH,EllisAK,RafeiroE.Levocetirizine:anewselectiveH1receptorantagonistforuseinallergicdisorders[J].DrugsToday(Barc),2004,40(5):415-421.

[3] 韓璐,華拯敏,俞曉艷,等.西替利嗪巴布膏劑的制備及體外評價[J].中國藥物與臨床,2012,12(9):1151-1153.

[4] 韓璐,原永芳.西替利嗪巴布膏劑被動皮膚過敏反應的實驗研究[J].中南藥學,2015,10(13):1045-1047.

[6] García-Alvarez-Coque MC,Ruiz-Angel MJ,Berthod A,et al.On the use of ionic liquids as mobile phase additives in high-performance liquid chromatography.A review[J].Anal Chim Acta,2015,883:1-21.

[7] Freiser HH,Newlan MP,Gooding DL,et al.Reversed phase high performance liquid chromatography of basic drugs on a silanol deactivated supported[J].J Lip Chromatogr,1998,12(5):827.

[8] Kiel JS,Morgan SL.Computer-assisted optimization of a high performance liquid chromatographic separation for chlorpromazine and thirteen metabolites[J].J Chromatogr,1998,485(1):827.

Research on the pharmacokinetics and bioavailability of cetirizine cataplasm

HAN Lu,YUAN Yong-fang

(Department of Pharmacy,No.9 People′s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University of Medicine,Shanghai 201999,China)

Objective To study the pharmacokinetics and bioavailability of cetirizine (CET) cataplasm.Methods SD rats were divided into CET cataplasm group and CET oral group.The content of CET in the rat plasma and the content in the CET cataplasm were detected using HPLC.Results Pharmacokinetic parameters of CET cataplasm group were as follows:Tmax2.35 h,Cmax2.68 μg/mL,AUC 21.01 μg·h/mL,MRT 23.26 h;while the pharmacokinetic parameters of CET oral group were as follows:Tmax1.11 h,Cmax11.65 μg/mL,AUC 35.62 μg·h/mL,MRT 12.13 h.The relative bioavailability was 30.81%.Conclusion Blood drug concentration of CET cataplasm was stable and lasting,and CET cataplasm has the characteristics of slow release.

Cetirizine;Cataplasm;Pharmacokinetics;Bioavailability

2016-09-14

上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院藥劑科，上海 201999

上海高校選拔培養(yǎng)優(yōu)秀青年教師科研專項基金(jdy-09070)

10.14053/j.cnki.ppcr.201706022