紅景天甙防治兔肝移植術(shù)后疲勞綜合征的實(shí)驗(yàn)研究

秦雪琴，陳悅，雷尚芳，陳德森

(1.十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院感染科，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室，湖北十堰442000)

·論著·

紅景天甙防治兔肝移植術(shù)后疲勞綜合征的實(shí)驗(yàn)研究

秦雪琴1，陳悅1，雷尚芳1，陳德森2

(1.十堰市太和醫(yī)院湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院感染科，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室，湖北十堰442000)

目的研究紅景天甙降低兔肝移植術(shù)后疲勞綜合征的機(jī)制。方法日本大耳白兔30只，采用隨機(jī)數(shù)表法分為假手術(shù)組、模型組、紅景天甙組，每組各10只，采用小腸切除-吻合術(shù)模擬術(shù)后疲勞綜合征動(dòng)物模型，造模10 d后進(jìn)行1/2減體積原位肝臟移植手術(shù)，術(shù)后紅景天甙組經(jīng)尾靜脈注射紅景天甙治療7 d。比較三組兔外周血傳出神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、垂體生長素(GH)，大腦皮層電位及肝功能谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽紅素(TBIL)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平。結(jié)果模型組造模10 d及治療7 d時(shí)5-HT[(9.93±0.22)ng/mL vs(16.23±0.52)ng/mL]、AST[(504.7±37.9)U/L vs(554.3±32.9)U/L]、TBIL[(54.87±3.21)μmol/L vs(76.87±4.22)μmol/L]、ALT[(181.6±18.3)U/L vs(312.3±34.5)U/L]明顯升高，GH[(0.71±0.03)pg/mL vs(0.53±0.05)pg/mL]明顯降低，大腦皮層放電[(459.23±48.08)mV vs(513.03± 50.28)mV]逐漸增強(qiáng)，與本組造模前及假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。紅景天甙組造模10 d時(shí)5-HT [(10.72±0.31)ng/mL]、AST[(484.7±20.1)U/L]、TBIL[(55.21±5.21)μmol/L]、ALT(186.2±19.2)U/L]明顯升高，GH [(0.75±0.02)pg/mL]明顯降低，大腦皮層放電[(451.71±45.58)mV]逐漸增強(qiáng)，與假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。治療7 d時(shí)，紅景天甙組兔5-HT[(10.21±0.31)ng/mL]、大腦皮層電位[(321.12±38.24)mV]、肝功能AST [(194.3±22.1)U/L]、TBIL[(24.07±1.25)μmol/L]、ALT[(112.2±23.1)U/L]明顯降低，GH[(2.67±0.11)pg/mL]明顯增高，與造模10 d及模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論紅景天甙可降低兔肝臟移植術(shù)后疲勞綜合征。

紅景天甙；術(shù)后疲勞綜合征；傳出神經(jīng)遞質(zhì)；垂體生長素；大腦皮層電位；肝功能

術(shù)后疲勞綜合征(postoperative fatigue syndrome，POFS)是各類中大型手術(shù)后最常見的并發(fā)癥[1]，臨床以出現(xiàn)食欲減退、睡眠延長、肌肉無力、精神極差等癥狀為主[2]。為研究POFS的形成機(jī)制，尋找高效、低毒的藥物以防治其發(fā)生，本實(shí)驗(yàn)于2016年8～9月設(shè)計(jì)了日本大耳白兔術(shù)后疲勞綜合征模型并進(jìn)行1/2原位肝臟移植手術(shù)，應(yīng)用中藥大花紅景天提取物紅景天甙干預(yù)POFS的發(fā)生與發(fā)展，試圖研究其對(duì)兔肝移植術(shù)后疲勞綜合征的防治機(jī)制，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通級(jí)健康日本大耳白兔30只，雄性，周齡19周，體質(zhì)量1.8～2.0 kg，動(dòng)物使用許可證為SCXK(鄂)2010-0008，由十堰市太和醫(yī)院動(dòng)物房提供，手術(shù)在動(dòng)物房手術(shù)室完成[設(shè)施證為SYXK(鄂) 2010-0031]。采用隨機(jī)數(shù)表法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為假手術(shù)組、模型組、紅景天甙組，每組10只。飼養(yǎng)應(yīng)滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利，單籠飼養(yǎng)，普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水，溫度：(20±1)℃，相對(duì)濕度：60%～80%，12 h交替光照。

1.2 儀器及藥品BL-420F系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司，型號(hào)：BL-420F)。紅景天甙分析標(biāo)準(zhǔn)品，HPLC≥98%(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20504)。戊巴比妥鈉(北京普博斯生物科技有限公司，批號(hào)：P3761)。頭孢哌酮鈉(哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號(hào)：H20043448)。

1.3 兔疲勞綜合征造模及肝臟移植術(shù)動(dòng)物術(shù)前禁食12 h，不禁水。用3%戊巴比妥鈉(0.1 mL/kg)腹腔注射麻醉，將兔頭固定于立體定位儀，先用刀片切開兔頭部皮膚，刮凈骨膜，在矢狀縫旁開3～5 mm，冠狀縫后5 mm，用電鉆鉆直徑為1～2 mm的微孔，將準(zhǔn)備好的銀絲(引導(dǎo)電極)消毒后放入腦膜，參考電極插入“人”字縫尖前10 mm處，地線接兔左后肢皮下，然后用牙科水泥固定以備監(jiān)測(cè)大腦皮層放電[3-4]。模型組及紅景天甙組參照文獻(xiàn)[5]，背位固定，腹部消毒，腹白線正中剖腹，找到小腸起始處，切除中段小腸70%。切除后將Treitz韌帶以下空腸與回盲瓣進(jìn)行吻合，吻合術(shù)后左右推擠吻合口兩端腸內(nèi)容物檢查有無腸瘺，假手術(shù)組剖腹后10 min后關(guān)閉腹腔，不切除小腸，不進(jìn)行吻合手術(shù)。造模10 d后參照何勇等[6]改良的同種異體減體積肝臟移植術(shù)的“4貫通、3結(jié)扎、2回折法”，對(duì)兔做1/2同種異體減體積原位交叉肝臟移植術(shù)。模型組10只兔在肝臟移植術(shù)手術(shù)前分3對(duì)(即供、受體各3只配對(duì)交叉進(jìn)行原位1/2肝移植手術(shù))，受體手術(shù)時(shí)取供體1/2供肝，采用4次貫通穿刺、3次結(jié)扎和2回折的肝臟縫扎方法移植供肝，然后將受體切下的1/2肝臟采用相同的手術(shù)方法移植到供體兔。這種配對(duì)交叉的方法可減少一半的動(dòng)物使用量，符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理要求[7]。紅景天甙組手術(shù)方法同模型組。術(shù)后分層關(guān)閉腹腔，碘伏消毒創(chuàng)面，用頭孢哌酮鈉0.1 g/kg肌肉注射抗菌治療3 d，防止術(shù)后感染。

1.4 兔治療方法及檢測(cè)指標(biāo)將紅景天甙用注射用水配制成1%溶液，紅景天甙組從尾靜脈注射1%紅景天甙2 mL/kg，假手術(shù)組及模型組按1 mL/kg尾靜脈注射生理鹽水，三組兔均1次/d，連續(xù)注射治療7 d。在治療前及治療結(jié)束時(shí)從兔眶靜脈各取靜脈血0.1 mL，檢測(cè)外周靜脈血5-HT、GH，肝功能中AST、TBIL及ALT水平。用BL-420F記錄大腦皮層電位，記錄時(shí)用記錄電極的正極接兔頭骨上的銀絲，負(fù)極接左前肢，參數(shù)設(shè)置：G=20 mV，T=0.01 s，F(xiàn)=50 Hz，然后分別記錄治療前后大腦皮層放電的電壓值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間的均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紅景天甙對(duì)兔5-HT及GH的影響假手術(shù)組兔外周血5-HT及GH檢測(cè)結(jié)果顯示，造模前、造模10 d及治療7 d均無明顯變化。模型組造模10 d及治療7 d時(shí)5-HT明顯升高，GH明顯降低，與本組造模前及假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。紅景天甙組治療7 d時(shí)5-HT明顯降低，GH明顯增高，與造模10 d及模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 紅景天甙對(duì)兔大腦皮層電位的影響假手術(shù)組造模前、造模10 d及治療7 d大腦皮層無異常增高的放電現(xiàn)象。模型組造模10 d及治療7 d時(shí)大腦皮層放電逐漸增強(qiáng)，與本組造模前及假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。紅景天甙組治療7 d時(shí)大腦皮層放電明顯降低并接近正常水平，與造模10 d及模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 紅景天甙對(duì)兔肝功能TBIL、ALT及AST的影響模型組造模10 d及治療7 d時(shí)ALT、AST、TBIL明顯升高，與本組造模前及假手術(shù)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。紅景天甙組治療7 d時(shí)ALT、AST、TBIL明顯降低，與造模10 d及模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表1 治療前后三組兔5-HT及GH比較(±s)

表1 治療前后三組兔5-HT及GH比較(±s)

注：與造模前比較，aP＜0.05；與假手術(shù)組比較，bP＜0.05;與模型組比較，cP＜0.05。

組別數(shù)量(只)GH(pg/mL)假手術(shù)組模型組紅景天甙組F值P值治療7 d 1.50±0.08 0.53±0.05ab2.67±0.11bc79.12 0.032 10 10 10造模前5.86±0.16 5.35±0.14 5.62±0.17 63.24 0.041造模10 d 5.31±0.15 9.93±0.22b10.72±0.31bc19.25 0.050治療7 d 6.02±0.17 16.23±0.52ab10.21±0.31bc91.72 0.039造模前1.62±0.07 1.45±0.05 1.53±0.06 54.27 0.046造模10 d 1.32±0.05 0.71±0.03ab0.75±0.02bc102.36 0.044

表2 治療前后三組兔大腦皮層電位比較(mV±s)

表2 治療前后三組兔大腦皮層電位比較(mV±s)

注：與造模前比較，aP＜0.05；與假手術(shù)組比較，bP＜0.05；與模型組比較，cP＜0.05。

數(shù)量(只)組別造模10 d造模前治療7 d 10 10 10假手術(shù)組模型組紅景天甙組F值P值326.08±37.70 459.23±48.08ab451.71±45.58ab56.31 0.044 321.37±36.50 319.40±30.74 315.30±32.07 92.07 0.039 317.83±32.90 513.03±50.28ab321.12±38.24bc47.68 0.035

表3 治療前后三組兔肝功能比較(±s)

表3 治療前后三組兔肝功能比較(±s)

注：與造模前比較，aP＜0.05；與假手術(shù)組比較，bP＜0.05；與模型組比較，cP＜0.05；治療7 d時(shí)，三組ALT差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=45.17，P= 0.041)，AST差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=106.38，P=0.026)，TBIL差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=74.25，P=0.049)。

組別時(shí)間數(shù)量(只) ALT (U/L) AST（U/L) TBIL (μmol/L)假手術(shù)組10模型組10紅景天甙組10造模前造模10 d治療7 d造模前造模10 d治療7 d造模前造模10 d治療7 d 80.3±10.5 81.2±7.1 83.2±9.1 83.6±9.5 181.6±18.3ab312.3±34.5ab81.6±9.5 186.2±19.2ab112.2±23.1bc141.5±13.2 149.2±11.5 144.5±10.2 147.1±20.1 504.7±37.9ab554.3±32.9ab143.6±21.2 484.7±20.1ab194.3±22.1bc4.32±0.09 5.02±0.10 4.93±0.12 4.75±0.18 54.87±3.21ab76.87±4.22ab4.81±0.15 55.21±5.21ab24.07±1.25bc

3 討論

研究表明，5-HT與疲勞感有聯(lián)動(dòng)關(guān)系，5-HT的前體色氨酸與睡眠及疲勞有聯(lián)動(dòng)關(guān)系，術(shù)后局部腦組織中血游離色氨酸水平升高會(huì)引發(fā)強(qiáng)烈睡眠感覺、術(shù)后疲勞程度加重[8-9]。紅景天甙是景天科植物大花紅景天的主要有效成分，由于其具有抗氧化、抗疲勞、提高機(jī)體免疫力的作用[10]。另有研究表明，紅景天甙能夠促進(jìn)兔術(shù)后下丘腦垂體生長素的合成，抑制5-HT等的合成與釋放，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成及脂肪分解，改善氮平衡以減輕手術(shù)應(yīng)激反應(yīng)造成的POFS[11]。

在本實(shí)驗(yàn)中，模型組兔卷曲少動(dòng)、瞇眼、幾無自潔行為、脫毛和豎毛、毛發(fā)無色澤，拒食或少量進(jìn)食，腹瀉，平均體重下降達(dá)39.25%，這些都是典型動(dòng)物POFS現(xiàn)象。兔外周血5-HT、大腦皮層電位及肝功能AST、TBIL、ALT造模10 d及治療7 d時(shí)明顯高于造模前，GH明顯降低，說明本實(shí)驗(yàn)通過造模型導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)生POFS是成功的。在對(duì)POFS的研究中，中醫(yī)學(xué)者認(rèn)為，POFS是肝脾不合、氣血損傷所致，大手術(shù)時(shí)正氣虧損導(dǎo)致氣、血兩虛，術(shù)后出現(xiàn)精神萎頓、情志異常等極度疲勞之象。如《金匱要略》日：“脾色必黃，瘀熱以行”[12]，《素問·太陰陽明論》曰“脾病而四肢不用”，意為肝脾通過對(duì)氣機(jī)、血液及情志的影響來調(diào)節(jié)機(jī)體代謝及應(yīng)激反應(yīng)。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，應(yīng)激反應(yīng)與傳出神經(jīng)遞質(zhì)5-HT等的合成與釋放密切相關(guān)[13]。故在治療POFS時(shí)，以調(diào)節(jié)氣、血為主，使機(jī)體代謝與應(yīng)激反應(yīng)處于正常平衡狀態(tài)。紅景天甙組治療7 d后，其外周血5-HT明顯降低，大腦皮層放電現(xiàn)象明顯減少，肝功能AST、TBIL、ALT治療7 d時(shí)也明顯降低，GH明顯增高，兔POFS現(xiàn)象明顯減輕。我們認(rèn)為，由于術(shù)后應(yīng)激反應(yīng)造成5-HT增多，兔大腦皮層在5-HT作用下，由過度興奮轉(zhuǎn)為抑制，大腦皮層出現(xiàn)異常放電現(xiàn)象。這與Zeiderman等[14]研究發(fā)現(xiàn)POFS時(shí)肌電圖電活動(dòng)增高相似。另外，裘益輝等[15]和McGuire等[16]研究發(fā)現(xiàn)，術(shù)后高代謝狀態(tài)會(huì)促進(jìn)游離色氨酸/支鏈氨基酸合成增高，而游離色氨酸/支鏈氨基酸又是合成5-HT的前身，5-HT在腦中合成增多會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)元產(chǎn)生抑制效應(yīng)，導(dǎo)致中樞疲勞感加重，此為產(chǎn)生POFS根本原因。中藥紅景天性寒、味甘澀，主歸脾、肺經(jīng)，《本草綱目》謂其"九死還生草"，紅景天甙是其主要成分，具有抗疲勞、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、清除自由基消除憂郁感及保護(hù)心血管等多種藥理作用[17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，紅景天甙降低了兔5-HT合成，抑制大腦皮層異常放電，POFS得以緩解。另一方面，紅景天甙還通過促進(jìn)兔術(shù)后下丘腦垂體生長素的合成，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成及脂肪分解，改善氮平衡從而減輕手術(shù)應(yīng)激反應(yīng)造成的POFS。由于紅景天甙具有調(diào)節(jié)氣血、活血化瘀的藥理特性，吸收后起到?jīng)鲅b、清熱解毒、活血化瘀、健脾固本的作用，這對(duì)促進(jìn)肝功能恢復(fù)有重要意義。另外，紅景天甙還具有抗肝纖維化及缺血再灌注損傷保護(hù)作用[18-19]。在本實(shí)驗(yàn)中，紅景天甙可能干擾細(xì)胞代謝，增加肝細(xì)胞微循環(huán)，擴(kuò)張手術(shù)吻合區(qū)微動(dòng)脈、增加血管通透性和組織供氧、降低術(shù)后缺血再灌注損傷而保護(hù)移植肝臟，在一定程度上也能減少POFS的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，紅景天甙可促進(jìn)肝功能恢復(fù)，對(duì)兔肝臟移植術(shù)后疲勞綜合征具有一定程度的防治作用，其機(jī)制可能與其促進(jìn)下丘腦GH分泌并影響5-HT合成，降低中樞神經(jīng)興奮性，抑制術(shù)后大腦皮層異常放電而降低疲勞感有關(guān)。

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Effect of salidroside on the prevention and treatment of fatigue syndrome after liver transplantation in rabbits.

QIN Xue-qin1,CHEN Yue1,LEI Shang-fang1,CHEN De-sen2.
1.Department of Infection,Taihe Hospital,the Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA;2.Function laboratory,Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,Hubei,CHINA

ObjectiveTo study the mechanism of salidroside in reducing fatigue syndrome after liver transplantation in rabbits.MethodsA total of 30 rabbits were randomly divided into the sham group,model group and salidroside group according to random number table,with 10 rats in each group.The animal model of postoperative fatigue syndrome was simulated by the by small bowel resection and anastomosis.After 10 days of modeling,1/2 reduced size orthotopic liver transplantation surgery was performed.After the surgery,the salidroside group was treated by tail intravenous injection of salidroside for 7 days.The levels of peripheral blood 5-efferent neurotransmitter serotonin(5-HT), pituitary growth hormone(GH),cerebral cortex potentials and liver function of aspartate aminotransferase(AST),bilirubin(TBIL),alanine aminotransferase(ALT)of the three groups were compared.ResultsThe levels of 5-HT,AST, TBIL and ALT in the model group after 7 days of treatment were respectively(9.93±0.22)ng/mL,(504.7±37.9)U/L, (54.87±3.21)μmol/L,(181.6±18.3)U/L,which were significantly higher than(16.23±0.52)ng/mL,(554.3±32.9)U/L, (76.87±4.22)μmol/L and(312.3±34.5)U/L after 10 days of modeling;while the level of GH in the model group after 7 days of treatment was(0.71±0.03)pg/mL,which was significantly lower than(0.53±0.05)pg/mL after 10 days of modeling;the cerebral cortex discharge increased gradually from(459.23±48.08)mV after 10 days of modeling to(513.03± 50.28)mV after 7 days of treatment;Compared with the model group before modeling and the sham group,the differences were statistically significant(P＜0.05).Compared with the sham group,the levels of 5-HT,AST,TBIL and ALT in the salidroside group after 10 days of modeling were respectively(10.72±0.31)ng/mL,(484.7±20.1)U/L,(55.21±5.21)mol/L, (186.2±19.2)U/L,which increased significantly(P＜0.05);GH was(0.75±0.02)pg/ml,which decreased significantly(P＜0.05);the cerebral cortex discharge was(451.71±45.58)mV,which gradually increased(P＜0.05).Compared with the salidroside group after 10 days of modeling and the model group,the levels of 5-HT,cerebral cortex discharge,AST of liver function,TBIL and ALT in the salidroside group after 7 days of treatment were respectively(10.21±0.31)ng/mL, (321.12±38.24)mV,(194.3±22.1)U/L,(24.07±1.25)mol/L,(112.2±23.1)U/L,which decreased significantly(P＜0.05);GH was(2.67±0.11)pg/mL,which increased obviously(P＜0.05).ConclusionSalidroside can reduce fatigue syndrome after liver transplantation in rabbits.

Salidroside;Postoperative fatigue syndrome;Efferent neurotransmitter;Pituitary growth hormone; Cortical potential;Liver function

R-322

A

1003—6350（2017）12—1893—04

2016-12-15)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.12.001