RP-HPLC法測定洛索洛芬鈉片的含量及有關物質

袁浩宇，王 鵬，易 紅，俞 瑜（核工業四一六醫院，成都 610051）

RP-HPLC法測定洛索洛芬鈉片的含量及有關物質

袁浩宇＊，王 鵬，易 紅#，俞 瑜（核工業四一六醫院，成都 610051）

目的：改進測定洛索洛芬鈉片中主成分含量及有關物質的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為迪馬Inspire C18，流動相為乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調節pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V），流速為1.0m L/ min，柱溫為40℃，檢測波長為221 nm，進樣量為20μL。結果：洛索洛芬鈉峰與相鄰雜質峰達到良好分離（分離度＞1.5）；洛索洛芬鈉檢測質量濃度線性范圍為30.0～90.0μg/m L（r＝0.999 8）；洛索洛芬鈉檢測限為0.3μg/m L；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜1.0%；回收率為99.00%～99.87%，RSD＝0.33%（n＝9）。結論：該方法準確、簡便、快速，適用于洛索洛芬鈉片的質量控制。

反相高效液相色譜法；洛索洛芬鈉片；含量；有關物質

洛索洛芬鈉（Loxoprofen sodium），化學名為2-[4-（2-氧代環戊烷-1-基甲基）苯基]丙酸鈉二水合物，為前列腺素（PG）合成酶抑制劑，具有解熱、鎮痛及抗炎作用，臨床上廣泛用于類風濕性關節炎，腰痛，肩周炎，頸肩腕綜合征，急性上呼吸道炎癥，手術、外傷后及拔牙后的鎮痛消炎，與同類藥物相比具有起效更快、臨床效果更好、副作用更小等特點[1]。為了保證用藥安全、有效，筆者改進了以反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測定洛索洛芬鈉片中主成分含量及有關物質的方法，現報道如下。

1 材料

1.1 儀器

1100型HPLC儀，包括紫外檢測器及ChemStation色譜工作站等（美國Agilent公司）；FE20K型酸度計（瑞士Metter-Toledo公司）；BS224S型萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

洛索洛芬鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100638-200407，純度：99.0%，供含量測定用）；洛索洛芬鈉片（四川省人民醫院制劑室自制，批號：110110、110111、110112，規格：60mg）；乙腈（色譜純，美國Fisher公司）；其他試劑均為分析純，水為自制超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：迪馬Inspire C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調節pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V）；流速：1.0m L/min；檢測波長：221 nm；柱溫：40℃；進樣量：20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取樣品10片（批號：110110），精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），置于50m L量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5m L，置于50m L量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取洛索洛芬鈉對照品15 mg，置于25m L量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5m L，置于50m L量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1m L中含洛索洛芬鈉60.0μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液 按樣品處方精密稱取除洛索洛芬鈉外的空白輔料適量，再按“2.2.1”項下方法進行制備，即得空白輔料溶液。

2.3 系統適用性與專屬性試驗

2.3.1 系統適用性試驗 精密量取“2.2”項下供試品溶液、對照品溶液和空白輔料溶液各20μL，分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。結果表明，理論板數按照洛索洛芬鈉峰計算≥4 000，洛索洛芬鈉峰的保留時間約為8.1min，與相鄰雜質峰的分離度＞1.5。

圖1 系統適用性試驗高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogramsof system suitability tests

2.3.2 專屬性試驗 取樣品10片（批號：110110），精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），加20m L的0.1mol/m L鹽酸溶液，室溫放置2 h后，用0.1mol/m L氫氧化鈉溶液中和至中性，以流動相定容至50m L，作為酸破壞溶液；精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），加20m L的0.1mol/m L氫氧化鈉溶液，室溫放置2 h后，用0.1mol/m L鹽酸溶液中和至中性，以流動相定容至50m L，作為堿破壞溶液；精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），加3%雙氧水溶液10m L，室溫放置4 h后，以流動相定容至50m L，作為氧化破壞溶液；精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），在60℃下放置5 d，以流動相定容至50 m L，作為熱破壞溶液；精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30mg），在（4 500±500）lx強光下照射5 d，以流動相定容至50m L，作為光破壞溶液。取上述各破壞試驗溶液適量，分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖2。結果表明，雖經破壞后各雜質峰面積有一定增加，但洛索洛芬鈉峰與相鄰雜質峰之間、各雜質峰之間均能達到基線分離。

2.4 線性關系考察

圖2 專屬性試驗高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatogramsofspecificity tests

取洛索洛芬鈉對照品30mg，精密稱定，置于50m L量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為線性工作對照品貯備液。分別精密量取上述貯備液適量，用流動相稀釋制成質量濃度為30.0、48.0、60.0、72.0、90.0μg/m L的系列線性工作對照品溶液，分別精密量取20μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以洛索洛芬鈉峰面積（y）為縱坐標、質量濃度（x，μg/m L）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程y＝50 891x+3 043.5（r＝0.999 8）。結果表明，洛索洛芬鈉檢測質量濃度線性范圍為30.0～90.0μg/m L。

2.5 檢測限

精密稱取洛索洛芬鈉對照品適量，用流動相制成每1m L中含0.3μg的溶液，精密量取20μL注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，此時信噪比約為3∶1，計算得到洛索洛芬鈉的檢測限為0.3μg/m L。

2.6 精密度試驗

精密量取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，洛索洛芬鈉峰面積的RSD＝0.74%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.1”項下供試品溶液（批號：110110）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，洛索洛芬鈉峰面積的RSD＝0.62%（n＝6），表明供試品溶液室溫下放置10 h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品（批號：110110）適量，精密稱定，分別按“2.2.1”項下方法平行制備6份供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算洛索洛芬鈉含量。結果，洛索洛芬鈉的平均標示百分含量為99.48%，RSD＝0.57%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 回收率試驗

按樣品處方精密稱取空白輔料適量，共9份，每3份一組，分別精密加入低、中、高不同質量的洛索洛芬鈉對照品，分別按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，并計算洛索洛芬鈉的回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.10 樣品含量及有關物質測定

2.1 0.1 樣品含量測定 取3批樣品各適量，分別按“2.2”項下方法制備對照品溶液和供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，采用外標法以峰面積計算洛索洛芬鈉含量，結果見表2。

表2 樣品含量及有關物質測定結果（n＝3）Tab 2 Resultsof contentsand related substancesdeterm ination of samples（n＝3）

2.1 0.2 樣品有關物質測定 每批樣品取10片，精密稱定，研細，精密稱取細粉適量（約相當于洛索洛芬鈉30 mg），置于100m L量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為有關物質測定用供試品溶液；精密量取上述有關物質測定用供試品溶液適量，加流動相稀釋制成每1m L中含洛索洛芬鈉3μg的溶液，作為有關物質測定用對照溶液。按“2.1”項下色譜條件，取有關物質測定用對照溶液20μL注入HPLC儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的25%；再取有關物質測定用供試品溶液20μL注入HPLC儀，記錄色譜至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如顯現除空白輔料峰外的雜質峰，則各雜質峰面積的總和不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%）。3批樣品有關物質測定結果見表2。

3 討論

洛索洛芬鈉是第一個丙酸類前體型非甾體抗炎藥，由日本三共株式會社首研，是目前日本銷量第一的非甾體抗炎藥。其經消化道吸收后迅速轉化為trans-OH活性代謝物，通過抑制PG的生物合成而發揮作用，可明顯減少胃腸道不良反應，且其鎮痛效果比酮洛芬、吲哚美辛、萘普生強10～20倍。因此，該藥具有較大的市場潛力。除了片劑，國內還曾見該藥其他劑型如凝膠劑、貼劑等的研究。當前已有關于該藥含量及有關物質測定、溶出度測定、生物利用度研究等方面的文獻報道。《日本藥局方》（第15版）[2-3]收錄了洛索洛芬鈉原料藥和洛索洛芬鈉片，采用液相色譜法（LC）對洛索洛芬鈉的含量進行測定，采用薄層色譜法（TLC）對洛索洛芬鈉的有關物質進行測定。此次筆者對自制的洛索洛芬鈉片的含量及有關物質的測定進行了深入研究和改進，意在更全面地控制該制劑的質量。

以往文獻報道的測定洛索洛芬鈉含量的方法主要有紫外分光光度法[4]、HPLC法[5-6]和LC-質譜聯用法（LCMS）[7]，測定洛索洛芬鈉有關物質的方法主要有RPHPLC法[8]。筆者在參考《日本藥局方》（第15版）[主要色譜條件：流動相為甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（60∶40∶0.1∶0.1，V/V/V/V），波長222 nm，柱溫40℃]和原國家食品藥品監督管理局國家藥品標準[9]的基礎上，改進了測定洛索洛芬鈉含量及有關物質的RP-HPLC法。其中，經200～400 nm全波長范圍內的紫外掃描考察，將測定波長調整為221 nm；同時，考慮到洛索洛芬鈉呈弱堿性，流動相pH值和三乙胺濃度對其峰形和保留時間影響較大，通過對流動相不同組成、不同pH值、不同三乙胺濃度進行篩查，發現采用乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調節pH至3.0±0.1）（62∶38，V/V）作為流動相時，洛索洛芬鈉的保留時間合適，且與其他相鄰雜質峰的分離度符合要求，故確定將該流動相用于其含量及有關物質測定。

綜上所述，本方法準確、簡便、快速，適用于洛索洛芬鈉片的質量控制。

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[2] The Society of Japanese Pharmacopoeia.The Japanese Pharmacopoeia[S].The fifteenth edition.Tokyo：Yakujinippo，Ltd.，2006：828.

[3] The Society of Japanese Pharmacopoeia.The Japanese Pharmacopoeia：SupplementⅡ[S].The fifteenth edition.Tokyo：Yakujinippo，Ltd.，2006：2713.

[4] 唐黎明，陳桂良.洛索洛芬鈉片溶出度測定及體內外相關性評價[J].中國醫藥工業雜志，2006，37（8）：550-552.

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（編輯：周 箐）

Determination of Contentsand Related Substances in Loxoprofen Sodium Tabletsby RP-HPLC

YUAN Haoyu，WANG Peng，YIHong，YU Yu（No.416 Hospital of Nuclear Industry，Chengdu 610051）

OBJECTIVE：To improve the determ ination method for the contents of main components and related substances in Loxoprofen sodium tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determ ination was performed on Inspire C18column w ith mobile phase consisted of acetonitile-0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate（containing 0.2%triethylamine，phosphoric acid adjusted to 3.0±0.1，62∶38，V/V）at the flow rate of 1.0 m L/m in.The column temperature was 40℃，and the detection wavelength was set at 221 nm.The sample size was 20μL.RESULTS：The peak of loxoprofen sodium was well separated w ith the peak of its related substances（R＞1.5）.The linear range of loxoprofen sodium ranged 30.0-90.0μg/m L（r＝0.999 8）.The detection lim it of loxoprofen was 0.3μg/m L.RSDs of precision，stability and repeatability tests were＜1.0%.The average recovery rates ranged 99.00%-99.87%（RSD＝0.33%，n＝9）.CONCLUSIONS：Thismethod is accurate，simple，rapid and suitable for the quality control of Loxoprofen sodium tablets.

RP-HPLC；Loxoprofen sodium tablets；Content；Related substances

R927

A

1001-0408（2017）15-2127-04

2016-05-31

2017-04-06）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：醫院藥學。E-mail：yhy416@ 126.com

#通信作者：副主任藥師。研究方向：醫院藥學。E-mail：yihon g0517@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.31