HPLC法測定芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量

薛孟姝

（哈高科白天鵝藥業）

摘 要：本文采用高校液相測定了芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動相，檢測波長為265nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。鹽酸小檗堿在5～50μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。鹽酸小檗堿的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%（n=6）；此方法簡便、準確、重現性好，可用于芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量測定。

關鍵詞：芪黃顆粒；鹽酸小檗堿；含量

芪黃顆粒主要用于治療鼻咽癌癌前病變之氣虛郁熱等癥，具有益氣解毒、生津利咽等作用。鹽酸小檗堿對溶血性鏈球菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌、腦膜炎球菌、金葡菌、霍亂弧菌、志賀痢疾桿菌、傷寒桿菌、白喉桿菌等有較強的抑制作用，對阿米巴原蟲、流感病毒、鉤端螺旋體也有一定抑制作用。臨床鹽酸小檗堿主要用于治療胃腸炎、細菌性痢疾等腸道感染、眼結膜炎、口舌生瘡、燒燙傷、心率失常、高血壓、糖尿病、化膿性中耳炎等[1-2]。高效液相色譜法又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等，已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。本文采用高校液相測定了芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量。

1 儀器與試藥

HH-601超級恒溫水浴（江蘇金壇市億通電子有限公司）；CC-304Bvpc單加熱型高溫不銹鋼槽（北京賽美思儀器設備有限公司）；Dura 12/24超純水系統（上海和泰儀器有限公司）；屹譜儀器U-1810準雙光束紫外可見分光光度計（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；SCQ-7201E雙頻加熱型超聲波清洗機（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；FR224CN奧豪斯電子天平（上海書培實驗設備有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）。鹽酸小檗堿對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（山東浩中化工科技有限公司）、乙醇（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、磷酸（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、甲醇（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（濟南英出化工科技有限公司）、磷酸氫二鈉（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、十二烷基硫酸鈉（山東浩中化工科技有限公司）、磷酸二氫鉀（山東浩中化工科技有限公司）、三乙胺（山東浩中化工科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規格為（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動相；檢測波長為265nm。理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取芪黃顆粒，研細，精密稱取，加60毫升50%乙醇溶液超聲處理0.5小時，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用50%乙醇溶液分次洗滌容器和殘渣，洗液濾人同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品約5mg，用流動相溶解并稀釋成每1ml中含20μg的溶液，作為對照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除黃連外等藥材和輔料，按樣品制備工藝制成陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測定，結果在鹽酸小檗堿出峰處陰性液無色譜峰，結果陰性試驗沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A（μg）為橫坐標，進樣量為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，鹽酸小檗堿對照品在5～50μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液10μL重復進樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.81%。結果表明，本實驗精密度良好。

2.7 重現性試驗

稱取同一批的芪黃顆粒樣品6份，按測定方法項下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計算樣品的RSD值，結果RSD為0.73%，結果表明此方法的重現性良好。

2.8 穩定性試驗

依照2.2項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進樣測定，供試品鹽酸小檗堿峰面積積分值的RSD為0.75%。結果表明鹽酸小檗堿至少在4小時內穩定。

2.9 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的鹽酸小檗堿對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%。

2.10 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定芪黃顆粒三批樣品中鹽酸小檗堿的含量，含量為15.2mg/g、15.6mg/g、15.2mg/g。

3 討論

分別考察乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g），乙腈-0.05mol.L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調節pH值至2.0）（30∶70），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調pH至3.0）（40：60），磷酸鹽緩沖液一甲醇（70：30）不同比例的流動相，結果以乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-0.1磷酸溶液（53∶47）（每1000mL加十二烷基硫酸鈉0.1g）為流動相。此方法簡便、準確、重現性好，可用于芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量測定。芪黃顆粒中鹽酸小檗堿的含量應不少于15mg/g。

參考文獻

[1]伍兆鋒，溫敏杰，賴越元，夏金堂，蔡文松，徐波，李書華.鹽酸小檗堿對血管平滑肌細胞增殖的干預研究[J].廣州醫學院學報，2013（04）.

[2]魏敬，蔣建東，吳錦丹，王書奎，王自正，潘淮寧，戴蘇泉.鹽酸小檗堿的調脂作用的研究[J].中華糖尿病雜志，2005（01）.

[3]高鵬，王曉南，韋霞.高效液相色譜法測定一清顆粒中鹽酸小檗堿的含量[J].白求恩軍醫學院學報，2008（03）.

[4]梁海春，石書江，李一圣，譚麗容，賴正權，蘇子仁，曾惠芳.HPLC法測定加味胃炎消片中野黃芩苷、鹽酸小檗堿的含量[J].中藥新藥與臨床藥理，2011（01）.

[5]蔡清宇，張沂，郝特，仝會娟，康琛，李曼玲.HPLC法測定舒利通顆粒中巴馬丁和小檗堿的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2010（02）.