李明遠斷病手跡（七十九）鑒定菊花菌核病

李明遠+陳東亮+李雪梅+王玲玲+黃叢林

2017年3月15日上午，我去了一趟位于北京市順義區的某菊花基地，查看越冬菊花的生長情況。

此時種植在日光溫室里觀賞大菊的母株一般都長出30 cm左右的腳芽，每個品種一般有4株。由于每株都長出了許多腳芽，看上去綠油油的一片。但是，仔細觀察可以發現也有少數長的不大好的母株，這些母株除了新發出的腳芽小而黃外，還有些死株。對我來講更關注的是那些死了的腳芽（圖1），應當搞清它們死的原因。

一開始我拔了1枝藏在腳芽中的枯枝，發現僅在莖基的幾個葉片為黃褐色，上面的葉子多呈青枯狀，像是近期突然枯死的病株。從莖部看基部呈灰褐色至褐色（圖2），表面還有些發濕，似乎有些霉狀物；用手捏捏有些發軟，折斷后，可看到莖部中空，里面還有一些白色的菌絲（圖3）。看來有可能是一種真菌病害。我將它裝入塑料袋中后繼續調查，結果在一個大約7分地（約466.7 m2）的日光溫室里，發現了8株類似的病株。這8株發病的程度不同，之前那株是發病最輕的。多數病株往往有多個腳芽同時發??；少數病株發芽后因老根腐爛，造成整株枯死；埋在土中的病部，有時上面還覆蓋著一些白霉（圖4）?？上У氖俏覜]有查看那些沒有發芽就死掉的植株，有可能也屬于這類病害。所以這種病害，發生的相當嚴重。

這到底是什么病害呢？據我所知，可在根及莖部長出白霉的植物病害較多，例如根腐病、疫病、菌核病等，因此僅從當前的癥狀，還不能確定到底是什么病害，需要回到實驗室通過試驗與分析才能做出結論。

回到實驗室的那天下午，我將大部分病樣存入冰箱里，取出少量的病樣先用誘發疫病的方法，將病組織接種在消毒的黃瓜上保濕。4天后并沒有反應，因此排除疫病的可能。當我從冰箱里取出病株再次觀察時，發現有的病樣長出了許多白霉（圖5）。在這么低的溫度下，還能生長的真菌不多，有可能是菌核病所致。但是此時沒有見到有菌核長出，仍然不好作結論。

因為我此前曾研究過菌核病，知道將菌核病菌放在PDA培養基上培養一段時間，就會在菌落的邊緣產生出許多菌核。有了菌核就可證明這里發生的就是菌核病。如果再通過人工接種，證明它可以侵染菊花，那就肯定是菊花菌核病。

分離病原菌比較常用的方法有2種，一是組織分離法，即在無菌的條件下，切取帶有病原的組織塊，放在培養基上，讓它生長；二是在無菌的條件下，從病組織上挑取病原。因為我們保存在冰箱里的病枝上見到了白霉，所以我決定從病組織上挑取病原。這樣做比較省事兒，但是也有風險。就是容易被細菌污染，使分離工作失敗。需要使用酸性培養基會抑制細菌的生長，于是我在6 cm直徑的PDA培養基上加了1滴25%滅過菌的乳酸，用涂布玻棒攤平后，挑入菊花莖部長出的白霉，在25℃的培養箱中培養。3天后有新的菌絲長出，但是非常稀疏，我又將其轉回不加入酸的PDA平板上。這時它長的很快，長出的菌落有點發灰，第4天就在皿邊長出了菌核，證明了它是菌核?。▓D6）。

為了證明它的侵染性，我使用了離體葉法對菊花進行了人工接種。接種使用的寄主是一種夏菊，分別采下它的嫩芽和葉片，在芽的基部斜削一刀，造成一個較大的斜面；再準備3個底部襯有3張濾紙的直徑為9 cm的消毒培養皿，將芽和葉置入其中，加入少許無菌水后，再從培養菌核病菌的PDA平板上挑兩塊帶菌的基物，貼在病葉及嫩芽的切面上。用未貼病菌而貼脫脂棉的作對照。3天后接種的芽的莖部腐爛，變為灰褐色，上面有許多菌絲；接種葉的葉柄也腐爛，變成了灰褐色，同時病菌還擴展到葉片的基部，使其變為灰褐色。第5天接種的嫩芽上長出了菌核（圖7），而對照毫無變化（圖8），由此證明了病菌對菊花的侵染性。

與此同時，我們利用分子病理學的手段對該菌種進行了驗證。利用通用引物ITS1/ITS4對病菌ITS序列進行了擴增，擴增產物純化后送到“上海生工”測序，序列經NCBI BLAST比對，與已報道的Sclerotinia sclerotiorum的ITS序列一致性最高，達到100%（NCBI登錄號：FJ810516）。進一步利用MEGA 4.0軟件，Neighbor joining方法構建了基于ITS序列的Sclerotinia屬菌種的進化樹（圖9），結果待試菌種與S. sclerotiorum緊密聚合，表明該病原菌為S. sclerotiorum。

這時我還發現保存在2℃冰箱里從田間采回的病秧子上也長出了菌核。從幾個方面證明了我們3月15日在那個菊花基地采到的死秧就是菊花菌核病[Sclerotinia sclerotiorum（Lib.）de Bary]。

實際上我們對菊花菌核病并不陌生，記得近幾年我在溫室里拍攝大菊的花朵時就見過零星的病株。當時發病的部位主要是在花上，造成花瓣腐爛，同時還生出大量的白霉，在霉層里往往夾雜著黑色的菌核（圖10）。但當時我們認為隨著植株的清理，就不會再發生，所以并沒有十分介意。通過這次調查才感到問題的嚴重，原來這個病害更大的為害是在春天，會造成菊花的母株大量死亡。另外菊花種植溫室的連作情況十分普遍，而菌核病會以菌核越夏，而得到不斷的積累。久而久之，病害越來越重。例如去年（2016年）我們就聽虹美花卉科技有限公司的陳總說過，他冬季種在海南的切花菊常因菌核病嚴重而造成很大的損失。此外，在北京市平谷區西柏店的食用菊，因收花期多在每年的11月以后，也常受到菌核病的發生，損失嚴重。看來菊花菌核病應當是菊花上的一個重要病害。

關于菌核病的防治，有關的報道很多，但是有些方法并不適合防治菊花菌核病，例如在防治菌核病推薦的方法中多數都提到“合理輪作”，實際上菌核病的寄主較廣，可與它輪作的作物種類極其有限。特別是對菊園來說，因為是專門種植菊花的場所，幾乎沒有可能輪作。此外，使用化學農藥施在土里，殺死病菌也是常用的方法。但是要將它都殺死，也是件難事兒。我們認為比較現實的防治方法有5個方面：

（1）及時地清除病殘。發病初摘除病葉、老葉，即盡量在菌核形成之前，將病株拔除，切不可隨處亂扔，做到及時地徹底銷毀。

（2）合理密植，避免澆大水，避免偏施氮肥，多施磷鉀肥。實際上菊花不耐澇，大水不僅降低植株的抗病性，還會增加環境的相對濕度，有利病害的發生。

（3）利用夏季的高溫殺滅土中越夏的病原菌。依據菊花栽培的特點，可以在取完扦插苗后（一般在5～7月份）清除母株，對棚室做一次高溫消毒。具體的方法是：①清掉用過的母株；②施入麥秸段或草粉（250 kg/667 m2），再施入消石灰粉（100 kg/667 m2）旋耕后，做成壟距為0.8～1.0 m

的大壟，蓋上塑料膜，膜下澆足水；③將棚膜扣嚴，處理7～10天，期間至少應當經過1個晴天的過程，然后再定植新一茬菊花；

（4）種植菊花田一般應深耕，將菌核深埋土中；定植前地面使用地膜覆蓋，或施入10 cm厚的塘泥，阻擋病菌產生的子囊盤出土。

（5）在發現有子囊盤出土時，使用10%的腐霉利煙劑或45%百菌清煙劑熏棚。或噴灑50%乙烯菌核利可濕性粉劑1000～1500倍液、50%腐霉利可濕性粉劑1000～1500倍液，50%咪鮮胺猛鹽可濕性粉劑1000～2000倍液、50%異菌脲可濕性粉劑800倍液等，每周1次，連續2～3次預防子囊孢子的傳播。

因此只要認真的對待，菊花菌核病還是可以得到控制的。