不同品種長壽花試管苗再生體系的建立

任改婷++張桂芳++張黎

摘要：以5個(gè)品種長壽花的葉片和莖段為試驗(yàn)材料，開展長壽花試管苗繁育研究，探討光照強(qiáng)度及不同植物激素組合對(duì)愈傷誘導(dǎo)率、叢芽誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)等方面的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同品種之間存在差異，月桂、節(jié)日、霍恩愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；西倫的為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA；紫繽的為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。月桂、西倫叢芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，節(jié)日的為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，紫繽、霍恩的為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA。月桂增殖最佳培養(yǎng)基為MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L ZT+0.3 mg/L NAA，節(jié)日為MS+0.4 mg/L ZT+0.3 mg/L NAA，西倫、霍恩的為MS+0.4 mg/L 6-BA+0.4 mg/L ZT+0.2 mg/L NAA，紫繽的為MS+0.4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA。花泥作為載體進(jìn)行瓶外生根，生根率達(dá)90%以上，最佳光照度為2 500 lx。

關(guān)鍵詞：長壽花；試管苗；品種差異；再生體系

中圖分類號(hào)： S682.390.4+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2017）09-0027-03

長壽花（Kalanchoe blossfeldiana）是景天科伽藍(lán)菜屬肉質(zhì)草本花卉，原產(chǎn)馬達(dá)加斯加，別稱矮生伽藍(lán)菜、壽星花、假川蓮，因其花葉可觀，花期長、耐干旱、栽培容易、裝飾效果好，是國際花卉市場中發(fā)展最快的盆花之一[1-2]。隨著品種不斷推陳出新，市場品種越來越多。目前，國內(nèi)有關(guān)長壽花組織培養(yǎng)差異性研究較少和缺乏系統(tǒng)的研究，且不同研究者的結(jié)果差異較大[3]。本試驗(yàn)以5個(gè)品種長壽花為材料，比較其試管苗愈傷誘導(dǎo)、叢芽誘導(dǎo)、叢芽增殖、生根差異，研究品種差異性及影響長壽花試管育苗玻璃化、徒長的主要因子，為提高試管育苗成活率提供科學(xué)依據(jù)，并為研究不同品種長壽花試管苗再生體系的建立奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

試驗(yàn)材料取自寧夏園藝產(chǎn)業(yè)園花藝館，為長壽花月桂（Loren）、節(jié)日（Fiesta）、西倫（Theron）、紫繽（Leonardo）、霍恩（Hawn）品種的葉片和莖段。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1不同品種長壽花啟動(dòng)培養(yǎng)基篩選

啟動(dòng)培養(yǎng)基成分：MS+不同濃度6-BA和NAA（表1），附加30 g/L蔗糖、6 g/L 瓊脂，pH值為5.8。試驗(yàn)材料用洗潔精清洗3 min，流水沖洗 15 min 后，置于超凈工作臺(tái)上，將葉片用0.1% Hgcl2滅菌 8 min，莖段滅菌10 min，再用無菌水沖洗3遍。外植體經(jīng)過滅菌處理后，將葉片切成1.5 cm×1.5 cm大小，莖段切成1.5～2.0 cm小段，接種于初代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為（24±2） ℃。每瓶接種3個(gè)外植體，每個(gè)處理10瓶，試驗(yàn)重復(fù)3次，30 d后統(tǒng)計(jì)愈傷誘導(dǎo)率和叢芽誘導(dǎo)率。

1.2.2不同品種長壽花繼代培養(yǎng)基篩選

試驗(yàn)采取L9（34）正交設(shè)計(jì)，選擇6-BA、ZT、NAA等3種激素，共9個(gè)處理（表2）。切取初代培養(yǎng)的無菌苗接種到不同激素配比的增殖培養(yǎng)基，每處理接種10瓶，重復(fù)3次，培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)增殖后的總芽數(shù)，計(jì)算增殖系數(shù)、玻璃化率。

1.2.3光照度對(duì)長壽花生長的影響

將5個(gè)品種初代培養(yǎng)的無菌苗轉(zhuǎn)接于對(duì)應(yīng)的繼代增殖最佳培養(yǎng)基上，設(shè)光照度分別為1 500、2 000、2 500 lx，培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計(jì)節(jié)數(shù)、節(jié)間長度。

1.2.4長壽花瓶外生根

選取繼代培養(yǎng)中生長健壯、高（45±0.3） cm、具2對(duì)葉的無菌苗，作為瓶外生根的植株，煉苗后插入填有花泥（用牙簽戳洞）和草炭，并添加不同濃度NAA處理的穴盤內(nèi)，每穴1株，插入深度為1.5～2 cm，30 d后，統(tǒng)計(jì)生根率。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采用DPS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較。

愈傷誘導(dǎo)率=出現(xiàn)愈傷的外植體數(shù)/未污染的外植體數(shù)×100%；

叢芽誘導(dǎo)率=萌生叢芽的外植體數(shù)/未污染的外植體數(shù)×100%；

增值系數(shù)=增殖后的總芽數(shù)/接種的芽數(shù)；

玻璃化率=玻璃化的總苗數(shù)/接種的總苗數(shù)×100%；

生根率=生根株數(shù)/培養(yǎng)株數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不同品種長壽花初代培養(yǎng)

2.1.1不同品種長壽花葉片愈傷誘導(dǎo)差異性比較

研究發(fā)現(xiàn)，不同處理間長壽花葉片愈傷誘導(dǎo)率存在差異，其中A1為月桂、節(jié)日、霍恩3個(gè)品種最佳愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基，該處理中的愈傷誘導(dǎo)率顯著高于其他5個(gè)處理。西倫的愈傷誘導(dǎo)率在A1和A6間無顯著差異，但兩者與A2、A3、A4、A5差異極顯著；由于A6愈傷生長狀況優(yōu)于A1，因此A6為西倫愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基。紫繽的愈傷誘導(dǎo)率在A2和A4間無顯著差異，兩者與A1、A3、A5、A6之間差異極顯著；由于A4愈傷生長狀況優(yōu)于A2，因此A4為紫繽愈傷誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基（表3、表4）。

2.2.2不同品種長壽花莖段叢芽誘導(dǎo)差異性比較

研究發(fā)現(xiàn)，A6為月桂最佳叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中月桂莖段叢芽誘導(dǎo)率極顯著高于A1、A2、A3、A4、A5處理。A2為節(jié)日最佳叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中節(jié)日莖段叢芽誘導(dǎo)率與A1、A3、A4、A5、A6之間差異極顯著。A6為西倫最佳叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中莖段叢芽誘導(dǎo)率與A1、A2、A3、A4、A5之間差異極顯著。紫繽芽誘導(dǎo)率在A1和A2之間無顯著差異，但兩者與A3、A4、A5、A6差異極顯著；由于在A1培養(yǎng)基中叢芽生長狀況優(yōu)于A2培養(yǎng)基，因此A1為最佳叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基。A1為霍恩最佳叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在該培養(yǎng)基中其莖段叢芽誘導(dǎo)率與A1、A2、A3、A4、A5之間差異極顯著（表5、表6）。