塊菌與板栗培育菌根苗技術探討*

李向梅，劉瓊波，白宏芬，劉增軍，楊彝華

（楚雄州林業科學研究所，云南 楚雄 675005）

塊菌與板栗培育菌根苗技術探討*

李向梅，劉瓊波，白宏芬，劉增軍，楊彝華**

（楚雄州林業科學研究所，云南 楚雄 675005）

印度塊菌（Tuber indicum Vittadini）、夏塊菌（Tuber aestivum Vittadini） 和白塊菌（Tuber panzhihuanense Deng&Wang）是經濟價值較高的菌根食用菌。通過對印度塊菌、夏塊菌和白塊菌與板栗（Castanea mollissima Blume）合成菌根苗的技術進行探討，結果表明使用印度塊菌、夏塊菌和白塊菌孢子液接種板栗樹苗，10個月后均能形成大量外生菌根。菌根苗移栽后，接種夏塊菌的板栗苗苗高最高，與接種白塊菌和印度塊菌的板栗苗相比高差異顯著，但接種白塊菌的板栗苗與接種印度塊菌的板栗苗相比苗高差異不顯著。接種夏塊菌的板栗苗與接種白塊菌板栗苗間地徑差異不顯著，二者與接種印度塊菌的板栗苗間地徑差異均顯著。

印度塊菌；夏塊菌；白塊菌；板栗樹；無菌苗；共生真菌

印度塊菌 （Tuber indicum Vittadini）、夏塊菌（T.aestivum Vittadini） 和白塊菌 （T.panzhihuanense） 均屬于子囊菌綱 （Ascomycets） 塊菌目（Tubrales） 塊菌科（Tuberaceae） 塊菌屬（Tuber），是一類經濟價值和食用價值都較高的菌根食用菌，成熟時香味很濃，具有廣闊的開發前景[1]。塊菌能與多種樹木共生，在森林生態系統中占據重要地位，因其生長的特殊性，以及采挖時對菌塘及生態環境的嚴重破壞，造成產量急劇下降，僅靠野生生產，產量已不能滿足市場需求[2]。通過合成菌根苗造林來實現塊菌半人工栽培，是塊菌培育的有效措施。目前已有一些研究報道[3-7]，蘇開美等[5]報道使用印度塊菌、夏塊菌孢子液接種化香樹苗（Platycarya strobilacea Sieb．et Zucc．），第3個月發現已形成根尖淡乳色，基部淡黃色、黃褐色的外生菌根。張小雷等[6]報道使用印度塊菌孢子液接種園葉楊樹苗（Populus bonatii Levl） 后，第1個月至第2個月可形成淡黃色、黃褐色外生菌根。

楚雄州是野生塊菌主產區之一，為保護塊菌資源，促進產業發展，我們借鑒國內外人工培育塊菌技術的成功經驗，進行塊菌的仿生態栽培研究，探討印度塊菌、夏塊菌、白塊菌與板栗的共生關系，培育塊菌菌根苗，以期為塊菌菌根苗的培育技術提供指導。

1 材料與方法

1.1 半無菌苗的培育

1．1．1 共生樹種選擇

選擇與塊菌具有共生關系的板栗（Castanea mollissima Blume）進行接種試驗。

1．1．2 基質準備

將蛭石、草炭以體積比為1:1混合拌勻，加入適量水拌潮濕，含水量約28%，即基質捏起成團，松手后散開為宜，高溫高壓（121℃、110 kPa）滅菌2 h，冷卻備用。

1．1．3 育苗盤和盆缽消毒

育苗盤和盆缽均用5‰高錳酸鉀溶液浸泡40 min，取出后用無菌水沖洗3次。

1．1．4 育苗

2010年9月至10月，板栗種子采用水選法除去空癟種子后放入30%雙氧水中滅菌30 min，撈起用無菌水沖洗后播入盛有滅菌基質的盆缽或育苗盤中，使用冷卻后的開水或蒸餾水澆灌，置于溫室中培育。2011年開春，當幼苗主根系長5 cm～10 cm，側根發達后開始接種。

1.2 接種前準備

1．2．1 材料準備

印度塊菌 （Tuber indicum）、夏塊菌 （Tuber aestivum）和白塊菌（Tuber panzhihuanense） 成熟子實體，酒精燈1盞，小刀2把，剪刀2把，塑膠片，乳膠手套10雙，30倍放大鏡1個。

1．2．2 接種液的配制

果汁機用75%酒精擦拭后，無菌水沖洗，反復3次。成熟塊菌用自來水洗凈后，再用75%酒精擦拭干凈，無菌解剖刀切成小塊，放入準備好的果汁機中，加入適量無菌水，開啟果汁機攪碎，加無菌水稀釋成10%懸浮液，倒入已滅菌的瓶中，密封，置4℃冰箱保存備用。

1．2．3 接種基質配制

經過滅菌的基質中加入適量水拌潮濕，加石灰調pH7～7．5，使基質捏起成團，松手后散開為好。

1．2．4 膠片和育苗盤準備

根據育苗盤穴的大小，將透明膠片剪成適合的大小，置入雙氧水中滅菌40 min，取出，滅菌水沖洗干凈備用。育苗盤消毒同1．1．3。

1.3 接種

將配制好的基質平鋪于經過滅菌的膠片上，取出半無菌苗，根部置于基質中部，使根充分伸展開。

用吸管吸取10 mL的孢子懸浮液，淋于根上包好膠片，膠片松緊適合，使基質不會散落。

依次放入準備好的育苗盤內，澆適量的蒸餾水，置于溫室內培養。注意水不能澆太多，否則會沖走塊菌孢子。

1.4 接種后管理

接種后的管理主要是控制基質濕度，適當通風、透氣，保持一定的溫度和空氣濕度。

1．4．1 澆水

培養期間使用冷開水或蒸餾水澆灌，保持基質濕潤。

1．4．2 溫度

夏季需遮陰處理，溫室內保持平均溫度18℃，最高溫度不超過32℃，最低不低于1℃。

1．4．3 濕度

溫室內平均濕度64%，最大濕度不超過96%，最小濕度不低于34%。

1.5 菌根檢驗

1．5．1 菌根檢驗時間

苗木接種后1個月～2個月開始進行檢查，每隔1個月檢查1次。

1．5．2 菌根檢驗步驟

75%酒精擦拭雙手3次，一手捂緊包裹苗的膠片輕輕轉動，取出膠片包裹的菌根苗置于另一手內，膠片松開，用30倍放大鏡觀察外露根系的菌根發育和形態，感染其他雜菌的菌根苗需立即移除，以免擴大污染。

1．5．3 菌根苗出栽

菌根苗于2013年7月種植于昆明小哨，栽植密度4 m×4 m。

1.6 菌根拍照和數據分析

將典型的外生菌根用無菌小鑷子取下，在顯微鏡下用毛刷刷掉泥土，蒸餾水清洗干凈，將根系直接放在體式顯微鏡下觀察菌根形態，在80倍下觀察外延菌絲，記錄其特征并照相。菌根苗數據采用SPSS 17．0軟件進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 菌根特征

2011年4月接種白塊菌190株，接種夏塊菌94株，接種印度塊菌1 400株。于當年7月白塊菌檢測到菌根，印度塊菌檢測到少量菌根，夏塊菌未檢測到。2012年2月，印度塊菌、夏塊菌、白塊菌均檢測到大量菌根。解剖鏡下拍攝的菌根形態，印度塊菌與板栗形成具剛毛的菌根（圖1A），夏塊菌與板栗形成梳子狀的菌根（圖1B），白塊菌與板栗形成頂端膨大如蝴蝶觸角狀的菌根（圖1C）。

2.2 菌根苗出栽

2015年11月，分別觀測3種塊菌各48株菌根苗苗高（cm）、地徑（mm），觀測結果見表1。

圖1 3種塊菌與板栗形成的菌根形態Fig．1 Mophology of mycorrizal seeding of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

表1 3種塊菌與板栗合成菌根苗參數Tab．1 Parameters of mycorrizal seedling of Castanea mollissima with 3 kinds of Tuber

從表1中可看出，3種塊菌與板栗合成菌根苗單因素方差分析結果顯示，板栗苗苗高差異顯著（F= 5．14，df=2 138，P＜0．001），板栗地徑差異顯著（F= 4．56，df=2 138，P＜0．05）。接種夏塊菌的板栗苗苗高最高為117．50 cm，接種白塊菌的板栗苗居中為99．60 cm，接種印度塊菌的板栗苗最矮為94．04 cm；接種夏塊菌的板栗苗與接種白塊菌和印度塊菌的板栗苗苗高差異顯著（P＜0．05），但接種白塊菌的板栗苗與接種印度塊菌的板栗苗相比平均苗高差異不顯著（P＞0．05）。接種夏塊菌的板栗苗平均地徑最大為25．59 mm，接種白塊菌板栗苗平均地徑次之為25．57 mm，二者差異不顯著，接種夏塊菌和白塊菌的板栗苗平均地徑與接種印度塊菌的板栗苗平均地徑間差異均顯著（P＜0．05）。因此，3種塊菌均可用于與板栗苗合成外生菌根苗。

3 結論

據報道，塊菌可以與化香樹、圓葉楊樹等形成外生菌根[3-7]。本研究結果表明，塊菌可以與板栗形成較好的外生菌根。板栗屬殼斗科（Fagaceae）栗屬（Castanea Mill．）植物，作為印度塊菌、夏塊菌和白塊菌的寄主，在塊菌栽培研究中具有一定的應用價值。

[1]胡弘道．塊菌（松露）之培育與食譜[M]．臺北：華香園出版社，2010．

[2]蘇開美．云南永仁縣萬馬鄉塊菌生態環境調查研究[J]．中國食用菌，2005，24（4）：12-13．

[3]胡弘道，蘇開美，柴紅梅，等．夏塊菌與青剛櫟形成外生菌根形態的研究[J]．云南植物研究，2011，32（6）：489-494．

[4]胡弘道．塊菇與林木共生關系之研究(II)4號塊菇之特征及其與夏塊菇之菌根合成[J]．臺大實驗林研究報告，1987，1（3）：17-26．

[5]蘇開美，李樹紅，楊麗芬，等．印度塊菌、夏塊菌與化香樹合成菌根苗技術初探[J]．中國食用菌，2012，31（3）：10-12．

[6]張小雷，李樹紅，蘇開美，等．印度塊菌與圓葉楊合成菌根苗技術初探[J]．中國食用菌，2011，30（6）：18-20．

[7]GENG Li-ying,WANG Xiang-Hua,YU Fu-Qiang,et al．Successful mycorrhizal synthesis of Tuber indicum with two indigenous hosts and their recognition[J]．Acta Botanica Yunnanica,2009,Suppl(XVI):29-36．

Techniques for the Synethesis of Mycorrizal Seeding of Castanea mollissima with Tuber

LI Xiang-mei,LIU Qiong-bo,BAI Hong-fen,LIU Zeng-jun,YANG Yi-hua
(Forest Institute of Chuxiong Prefecture,Chuxiong 675005,China)

Tuber indicum,T.aestivum and T．sp．are mycorrizal mushrooms with high economic value．In this paper,the production technique for the mycorrhizal seedling of Castanea mollissima with T.indicum,T.aestivum and T．sp．was studied．The results showed that T.indicum,T.aestivum and T．sp．formed large number of mycorrizal seedlings on the chestnut seedlings after ten months inoculated．After transplanting seedlings,the seedling inculated with T.aestivum was the higest,there was significant difference with the seedlings inculated with T.indicum and T．sp．,but there was no significant difference with the seedlings inculated with T．sp．and T.indicum．It had no significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.aestivum and T．sp．,but they had significant difference on ground diameter with the seedlings inculated with T.indicum．

Tuber indicum;Tuber aestivum;Tuber sp．;Castanea mollissima;semi-aseptic seedling;symbiotic fungi

S646.9

A

1003-8310（2017）04-0032-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．008

國家林業局科技推廣示范項目項目（2009TQYN004）。

李向梅（1974-），女，本科，林業工程師，主要從事野生食用菌保育及規范采收實用技術研究及推廣示范。E-mail: 1344421460＠qq．com

**通信作者：楊彝華（1969-），女，碩士，正高級工程師，主要從事野生食用菌為主的林下資源開發利用研究及技術推廣示范。E-mail: yangyh_009＠163．com

2017-05-11