狗舌草的化學成分研究

唐雨，劉艷霞，張宏偉

（中國人民解放軍第三軍醫大學藥學院生藥學與天然藥物化學教研室，重慶400038）

狗舌草的化學成分研究

唐雨，劉艷霞，張宏偉

（中國人民解放軍第三軍醫大學藥學院生藥學與天然藥物化學教研室，重慶400038）

目的探討狗舌草的化學成分。方法采用硅膠，RP－C18，Sephadex LH－20和高效液相色譜法等色譜方法對狗舌草進行分離、純化，根據化合物的理化性質和波譜學方法對狗舌草化學成分進行結構鑒定。結果從狗舌草中分離得到6個化合物，分別鑒定為白楊素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合歡素(acacetin，4)，異鼠李素－3－O－ －D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－ －D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)。結論6個化合物均為首次從狗舌草屬中分離得到。

狗舌草；化學成分；成分分離；結構鑒定

狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.為菊科狗舌草屬植物，具有清熱、解毒、活血消腫等功效[1]，臨床用于治療發熱、貧血、出血、肝脾和淋巴結腫大[2]。國內外關于狗舌草化學成分的報道主要集中于生物堿，尤其是吡咯里西啶類生物堿（PAs）[3－4]。目前，對狗舌草黃酮類成分的研究僅局限于其所含黃酮的類型、總黃酮的提取工藝以及藥理作用等[5－8]。筆者對狗舌草的黃酮類化合物進行了系統的研究，從乙酸乙酯部位中分離得到了5個黃酮類化合物，另外還分離到1個酯類化合物，依據理化性質與譜學數據，分別鑒定為白楊素(chrysin，1)，芹菜素(apigenin，2)，山柰酚(kaempferol，3)，金合歡素(acacetin，4)，異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside，5)，咖啡酸乙酯(caffeic acid ethyl ester，6)，所有化合物均為首次從狗舌草屬中分離得到。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100型半制備高效液相色譜儀；SQ Detecter電噴霧電離質譜（美國Waters公司）；AgilentAV－600MHz核磁共振光譜儀(Agilent公司)；ZX98－1旋轉蒸發儀（上海魯伊工貿有限公司）；ZF－7 TLC紫外檢測儀（上海嘉鵬科技有限公司）；CPA225D電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；酶標儀（Bio－Rad）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純，上海），石油醚，乙酸乙酯，二氯甲烷，甲醇等(分析純，成都科龍化工有限公司），氘代試劑；薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠，德國默克公司），薄層色譜硅膠H，GF254和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；十八烷基硅膠鍵合相柱色譜材料（RP－C18，北京京京科技公司，50μm，70μm）；羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH－20，瑞士Pharmacia公司）。狗舌草藥材購于河南藥材市場，由重慶醫科大學中藥學院何先元副教授鑒定為狗舌草屬植物狗舌草Tephroseriskirilowii(Turcz.)Holub.的干燥地上部分。

2 方法與結果

2.1 提取分離

取干燥、粉碎的狗舌草藥材10 kg，用體積分數為95%的乙醇回流提取3次，每次3 h。合并提取液并在60℃減壓濃縮，得粗提物浸膏1 545.6 g。

粗提物浸膏混懸于適量水中，依次用石油醚（30～60℃）、氯仿、乙酸乙酯及正丁醇各萃取3次。合并萃取液并分別回收溶劑后，得到石油醚萃取部分346.8 g，氯仿萃取部位105.2 g，乙酸乙酯萃取部位152.5 g，正丁醇萃取部位404.2 g。

取乙酸乙酯部位（60 g）經大孔樹脂柱色譜，以不同體積分數的乙醇進行梯度洗脫，所得組分根據薄層色譜檢測得Fr.1～Fr.6共6個組分。其中Fr.3經反復硅膠柱色譜（石油醚－乙酸乙醋）分離及半制備HPLC(甲醇－水)純化得到化合物3（15 mg）、化合物5（21 mg）。Fr.4經反復硅膠柱色譜（石油醚－乙酸乙醋）分離及半制備HPLC(甲醇－水)純化得到化合物1（30mg）、化合物2（12 mg）、化合物4（22mg）、化合物6（25 mg）。化合物化學結構見圖1。

2.2 結構鑒定

2.2.1 化合物1

黃色針晶（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應陽性。

圖1 化合物1－6化學結構

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.93(1H，s，H－3)，6.18(1H，d，J＝1.8 Hz，H－6)，6.49(1H，d，J＝1.8 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝7.3 Hz，H－2′，6′)，7.54(2H，m，H－3′，5′)，7.56(1H，m，H－4′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.5(C－2)，105.6(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.6(C－6)，165.3(C－7)，94.6(C－8)，157.9(C－9)，104.3 (C－10)，131.2(C－1′)，126.8(C－2′)，129.6(C－3′)，132.4(C－4′)，129.6(C－5′)，126.8(C－6′)。

以上數據與文獻[9]報道的白楊素譜學數據對照基本一致，鑒定化合物1為白楊素(chrysin)。

2.2.2 化合物2

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.74(1H，s，H－3)，6.15(1H，d，J＝1.6 Hz，H－6)，6.44(1H，d，J＝1.6 Hz，H－8)，7.89(2H，d，J＝8.5 Hz，H－2′，6′)，6.90(2H，d，J＝8.5 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ164.1(C－2)，103.2(C－3)，182.1(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.5(C－7)，94.4(C－8)，157.8(C－9)，104.0 (C－10)，121.6(C－1′)，128.9(C－2′)，116.4(C－3′)，161.7(C－4′)，116.4(C－5′)，128.9(C－6′)。

以上數據與文獻[10]報道的芹菜素譜學數據對照基本一致，鑒定化合物2為芹菜素(apigenin)。

2.2.3 化合物3

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，d，J＝1.7 Hz，H－6)，6.40(1H，d，J＝1.7 Hz，H－8)，8.01 (2H，d，J＝8.8 Hz，H－2′，6′)，6.89(2H，d，J＝8.8 Hz，H－3′，5′)，12.45(1H，s，5－OH)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ147.2(C－2)，136.1(C－3)，176.3(C－4)，161.1(C－5)，98.6(C－6)，164.3(C－7)，93.9(C－8)，156.6(C－9)，103.5(C－10)，122.1(C－1′)，129.9(C－2′)，115.9(C－3′)，159.6(C－4′)，115.9(C－5′)，129.9(C－6′)。

以上數據與文獻[11]報道的山柰酚譜學數據對照基本一致，鑒定化合物3為山柰酚(kaempferol)。

2.2.4 化合物4

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.84(1H，s，H－3)，6.17(1H，d，J＝1.5 Hz，H－6)，6.48(1H，d，J＝1.5 Hz，H－8)，8.01(2H，d，J＝8.7 Hz，H－2′，6′)，7.08(2H，d，J＝8.7 Hz，H－3′，5′)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ163.7(C－2)，104.0(C－3)，182.2(C－4)，161.9(C－5)，99.4(C－6)，164.9(C－7)，94.5(C－8)，157.8(C－9)，104.1 (C－10)，123.3(C－1′)，128.8(C－2′)，115.0(C－3′)，162.7(C－4′)，115.0(C－5′)，128.8(C－6′)，56.0 (4′－OMe)。

以上數據與文獻[11]報道的金合歡素譜學數據對照基本一致，鑒定化合物4為金合歡素(acacetin)。

2.2.5 化合物5

黃色粉末（甲醇）。鹽酸－鎂粉反應及Molish反應均為陽性。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ6.16(1H，s，H－6)，6.44(1H，s，H－8)，7.72(1H，s，H－2′)，6.90 (1H，d，J＝7.6 Hz，H－5′)，7.65(1H，d，J＝7.6 Hz，H－6′)，12.43(1H，s，5－OH)，5.54(1H，d，J＝7.2 Hz，H－1′′)，3.81(3H，s，3′－OMe)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ156.9(C－2)，133.3(C－3)，177.8(C－4)，161.6(C－5)，99.2(C－6)，164.7(C－7)，94.1(C－8)，156.7(C－9)，103.3 (C－10)，122.4(C－1′)，113.9(C－2′)，147.3(C－3′)，149.8(C－4′)，115.6(C－5′)，121.5(C－6′)，101.0(C－1′′)，74.7(C－2′′)，76.8(C－3′′)，70.2(C－4′′)，77.9 (C－5′′)，61.0(C－6′′)，56.1(3′－OMe)。

以上數據與文獻[12]報道的異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷譜學數據對照基本一致，鑒定化合物5為異鼠李素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside)。

2.2.6 化合物6

白色針晶（甲醇）。三氯化鐵顯藍色。

1H－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ7.01(1H，d，J＝1.6 Hz，H－2)，6.73(1H，d，J＝8.2 Hz，H－5)，6.97 (1H，dd，J＝8.2，1.6Hz，H－6)，7.44(1H，d，J＝15.9Hz，H－7)，6.22(1H，d，J＝15.9 Hz，H－8)，4.12(2H，q， J＝7.1 Hz，CH2)，1.20(3H，t，J＝7.1 Hz，CH3)。

13C－NMR(600 MHz，DMSO－d6)：δ125.9(C－1)，114.5(C－2)，146.0(C－3)，148.8(C－4)，116.5(C－5)，121.8(C－6)，145.4(C－7)，116.1(C－8)，167.0 (C－9)，60.1(CH2)，14.7(CH3)。

以上數據與文獻[13]報道的咖啡酸乙酯譜學數據對照基本一致，鑒定化合物6為咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester)。

3 討論

有關狗舌草化學成分的研究已有不少報道，但多集中在生物堿類化學成分，且多為PAs生物堿，對黃酮類化合物的研究卻很少。本研究中就狗舌草黃酮類化合物的提取、分離及鑒定進行了系統研究，初步得到了6個化合物，均為首次從狗舌草屬植物中發現。本研究結果可為進一步闡明狗舌草化學成分與藥理活性的相關性研究提供參考。

[1]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編[M].北京：人民衛生出版社，1973：557.

[2]李揚漢.中國雜草志[M].北京：中國農業出版社，1998：359.

[3]Buckmaster GW.Pyrrolizidine alkaloid posioning in rats:protective effect of dietary cysteine[J].JAniSci，1976，3(2)：464－473.

[4]王建華，王躍虎，司紅麗.狗舌草生物堿成分分析[J].西北農林科技大學學報：自然科學版，2004，32（1）：93－95.

[5]司紅麗，王建華，王躍虎.狗舌草總黃酮的提取及其毒性試驗[J].畜牧與獸醫，2003，35(7)：9－10.

[6]邱燕燕，牛泱平.狗舌草中總黃酮的提取工藝研究[J].浙江化工，2009，40(10)：5－7.

[7]王建娜，司紅麗.狗舌草總黃酮對L1210細胞的體外作用研究[J].遼寧中醫雜志，2010，37(9)：1788－1790.

[8]司紅麗，王建娜，王躍虎，等.狗舌草黃酮類化合物對3種腫瘤細胞的藥物敏感試驗[J].藥物生物技術，2003，10(4)：229－231.

[9]侯蕾，呂秀香，謝彬彬，等.中藥益智的化學成分研究[J].天然產物研究與開發，2013，25(7):878－881.

[10]Mitsuo Miyazawa，Masayoshi Hisama.Antimutagenic Activity of Flavonoids from Chrysanthemum morifolium[J].Biosci Biotechnol Biochem，2003，67(10)：2091－2099.

[11]雷軍，陳屏，許旭東，等.短梗五加莖的化學成分研究[J].中國藥學雜志，2014，49(18)：1595－1598.

[12]Petler A，Ward R，Lansgray T.The carbon－13 nuclearmagnetic resonance spectra of flavonoids and related compounds[J].J Chem Soc，Perkin Trans，1976，23：2475－2483.

[13]成軍，白焱晶，程鐵明，等.杜仲葉苯丙素類化學成分的研究[J].中國中藥雜志，2002，27(1)：38－40.

Study on Chem ical Constituents of Tephroseris Kirilowii

Tang Yu,Liu Yanxia,Zhang Hongwei

(Teaching and Research Section of Pharmacognosy and Natural Pharmaceutical Chemistry in College of Pharmacy,3rd Military Medical University, Chongqing,China 400038)

Ob jective To study the chemical constituents of Tephroseris Kirilowii.M ethods The silica gel,RP－C18,Sephadex LH－20 and HPLC methods were adopted to isolate and purify the Tephroseris Kirilowii,and thechemical constituents were elucidated by the physicochemical properties and spectral analysis.Results 6 kinds of compounds were obtained and identified aschrysin(1),apigenin(2), kaempferol(3),acacetin(4),isorhamnetin－3－O－β－D－glucopyranoside(5),caffeic acid ethyl ester(6).Conclusion The 6 kinds of compounds are isolated from Tephroseris Kirilowii for the first time.

Tephroseris Kirilowii;chemical constituents;constituent isolation;structural identification

R284.2；R282.6

A

1006－4931(2017)11－0016－03

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.005

國家青年自然科學基金項目[81202869]。

唐雨（1986－），女，碩士研究生，助教，主要從事天然藥物化學及其藥理作用研究，（電子信箱）tangyuflower＠163.com。

張宏偉（1977－），男，碩士研究生，副教授，主要從事天然藥物化學及其藥理作用研究，（電子信箱）zhwqz＠hotmail.com。