高效液相色譜法測(cè)定感冒疏風(fēng)片中升麻素苷及5-O-基維斯阿米醇苷含量

姜雪敏，楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江雞西158100）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

高效液相色譜法測(cè)定感冒疏風(fēng)片中升麻素苷及5-O-基維斯阿米醇苷含量

姜雪敏，楊立志

（黑龍江省雞西市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，黑龍江雞西158100）

目的建立測(cè)定感冒疏風(fēng)片中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Agilent Extend－C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇－水(37∶63)，流速1.0 m L／min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。結(jié)果升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷進(jìn)樣量線(xiàn)性范圍分別為0.064 6～1.292 0 g和0.061 4～1.227 4 g，r均為1.000 0；平均回收率分別為97.56%和97.57%，RSD分別為0.40%和0.48%（n＝6)。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為感冒疏風(fēng)片質(zhì)量的控制方法。

感冒疏風(fēng)片；升麻素苷；5－O－甲基維斯阿米醇苷；高效液相色譜法

感冒疏風(fēng)片由麻黃絨、苦杏仁、桂枝、白芍、紫蘇葉、防風(fēng)、桔梗、獨(dú)活、甘草、大棗、生姜、谷芽組方[1]，具有辛溫解表、宣肺和中功效，用于風(fēng)寒感冒、發(fā)熱咳嗽、頭痛怕冷、鼻流清涕、骨節(jié)酸痛、四肢疲倦。目前，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對(duì)方中無(wú)定性或定量測(cè)定項(xiàng)，無(wú)法有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量和療效。本研究中參考文獻(xiàn)[2－13]，建立了測(cè)定感冒疏風(fēng)片中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量的高效液相色譜（HPLC）法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；AG285型電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)；KQ－400KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。升麻素苷對(duì)照品(批號(hào)為111522－201008，純度為93.9%），5－O－甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品（批號(hào)為111523－101007，純度為96.5%），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；感冒疏風(fēng)片（昆明中藥廠(chǎng)有限公司，批號(hào)為540557；云南騰藥制藥股份有限公司，批號(hào)為150602，150801）；水為屈臣氏蒸餾水，乙腈（色譜純，Merck公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend－C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水（37∶63）；流速：1.0m L／min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。理論板數(shù)按升麻素苷峰計(jì)算均不低于4 000。

2.2 溶液制備

稱(chēng)取升麻素苷對(duì)照品12.92mg，精密稱(chēng)定，5－O－甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品12.28mg，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解并稀釋?zhuān)瞥少|(zhì)量濃度分別為1.292 g／L和1.228 g／L的對(duì)照品貯備液。再分別量取對(duì)照品貯備液各1m L，置20mL容量瓶里，制成每1mL含升麻素苷64.6μg和5－O－甲基維斯阿米醇苷61.374μg的混合對(duì)照品溶液。

取樣品適量，研細(xì)，稱(chēng)取1.337 3 g（平均片重為0.444 1 g），精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇10m L，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理30 min（功率400 W，頻率40 Hz），放冷至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，作為供試品溶液。

按照感冒疏風(fēng)片處方工藝制成不含防風(fēng)的空白樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：精密吸取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：分別精密吸取升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品混合溶液1，2，5，10，15，20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X，μg）、峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析。回歸方程為升麻素苷Y＝2.1000×106X－2.728 7×103，r＝1.000 0(n＝6)；5－O－甲基維斯阿米醇苷Y＝2.300 0×106X－3.034×103，r＝1.000 0(n＝6)。結(jié)果表明，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷進(jìn)樣量分別在0.064 6～1.292 0μg和0.061 4～1.227 4μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取混合對(duì)照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷的平均峰面積值分別為692 518和707 398，RSD分別為0.92%和0.87%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，8，12，24 h后，分別進(jìn)樣5μL，記錄峰面積。結(jié)果升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷峰面積的平均值分別為694 537和710 119，RSD分別為0.96%和0.76%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：稱(chēng)取同一批（批號(hào)為540557）樣品6份，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定含量和每片樣品升麻素苷和5－O－甲基維斯阿米醇苷平均含量為0.150 mg和0.145 mg，RSD分別為0.79%和0.96%（n＝6）。表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：稱(chēng)取已知含量的同批（批號(hào)為540557，每片含升麻素苷0.150mg，5－O－甲基維斯阿米醇苷0.145mg）樣品約0.65 g共6份，精密稱(chēng)定，分別置錐形瓶中，分別精密加入升麻素苷對(duì)照品溶液(220.0μg／mL)和5－O－甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液(210.0μg／mL)各0.8，1.0，1.2m L，甲醇稀釋按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取市售感冒疏風(fēng)片3批，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定樣品中升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg，n＝6）

3 討論

經(jīng)檢測(cè)，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷最大紫外吸收波長(zhǎng)均在（254±2）nm處，比較發(fā)現(xiàn)，254 nm時(shí)兩種被測(cè)成分均有較大的吸收。

參照2015年版《中國(guó)藥典（一部）》對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)整，發(fā)現(xiàn)甲醇－水（37∶63）時(shí)分離度更好。

方中防風(fēng)為主藥，升麻素苷、5－O－甲基維斯阿米醇苷是其主要成分，含量高，易于測(cè)定，故采用測(cè)定處方中防風(fēng)的成分含量以控制該制劑的質(zhì)量。

分別考察以50%甲醇、甲醇、乙酸乙酯作為溶劑，結(jié)果表明，甲醇提取效果較好，故以甲醇為提取溶劑。

用甲醇分別提取20，30，60 min，結(jié)果表明，20 min提取含量低于提取30 min和60 min，且提取30 min和60min含量基本相同，故確定提取時(shí)間為30min。

[1]WS3－B－2251－96，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十一冊(cè))[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015:149－150.

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Content Determ inating of Prim－O－G lucasylcim ifogin and 5－O－M ethylvisamm iosode in Ganm aoshufeng Tab lets by HPLC

Jiang Xuemin,Yang Lizhi

(Jixi Inspection and Testing Center for Food and Drug,Jixi,Heilongjiang,China 158100)

Objective To establish an HPLC method for content determination of prim－O－glucasylcimifoginand 5－O－methylvisammiosodein in Ganmaoshufeng Tablets.M ethods The separation was performed on a Agilent Extend－C18column(250 mm×4.6 mm,5μm) with methanol－water solution(37∶63),the flow rate was 1.0 mL／min,the detection wave length was 254 nm.Resu lts The linear ranges of prim－O－glucasylcimifogin and 5－O－methylvisammiosode were 0.064 6－1.292 0μg(r＝1.000 0)and 0.061 4－1.227 4μg (r＝1.000 0),respectively,the average recoveries were 97.56%and 97.57%,respectively,the RSDs were 0.40%and 0.48%,respectively(n＝6).Conclusion The method is simple,reproducidle and accurate,which can be used for the quality contorl of Ganmaoshufeng Tablets.

Ganmaoshufeng Tablets;prim－O－glucasylcimifogin;5－O－methylvisammiosode;HPLC

R284.1

A

1006－4931(2017)11－0022－03

2017－03－15)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.11.007

姜雪敏（1979－），女，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)工作，（電子信箱）jiangxuemin88＠163.com。