NK細胞治療對原發性肝癌患者免疫功能及肝功能的影響

杜 波，張 鵬

NK細胞治療對原發性肝癌患者免疫功能及肝功能的影響

杜 波，張 鵬

目的 探討NK細胞治療對原發性肝癌患者免疫功能及肝功能的影響。方法 選取2015年1月—2016年1月我院收治的行NK細胞治療的原發性肝癌86例，在規范化治療結束后行NK細胞治療，比較治療前后免疫功能和肝功能指標，并評估近期預后。結果 NK細胞治療后，患者免疫功能指標CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均高于治療前，CD8+降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；γ-谷氨酰轉移酶、丙氨酸轉氨酶、總膽紅素、天冬氨酸轉氨酶均低于治療前，差異均有統計學意義(P<0.05)。隨訪9～20個月， 患者1年生存率為88.37%(76/86)。結論 NK細胞治療可以在規范化治療的基礎上，改善原發性肝癌患者的免疫功能、肝功能及短期預后。

殺傷細胞,天然；肝腫瘤；免疫功能；肝功能

近年來，隨著社會的飛速發展，環境惡化及生活方式的改變，原發性肝癌的發病率日益升高[1]。由于原發性肝癌早期發現率低，發現時患者一般已經處于中晚期[2]，此時患者免疫功能極其低下，依靠單一的治療手段會給患者帶來難以預測的不良后果[3]。近年免疫治療成為腫瘤治療的一種重要手段[4]。NK細胞治療具有明顯的抗腫瘤作用，能夠非特異性殺傷腫瘤細胞，在臨床抗腫瘤治療中逐漸得到認可[5]。本研究對NK細胞治療原發性肝癌患者免疫功能及肝功能的效果進行觀察，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 納入及排除標準 納入標準：①經組織病理學檢查證實為原發性肝癌[6]；②均接受過根治性手術、放療、化療和(或)介入等規范化治療，且距末次規范化治療至少2個月；③預期生存期超過3個月；④治療前行為狀態量表(KPS)評分≥60分；⑤均未合并嚴重的細菌、病毒感染；⑥患者及家屬簽署知情同意書。排除標準：①尚處在規范化治療期內者；②妊娠期、哺乳期婦女；③合并其他惡性腫瘤或患有傳染性疾病者；④對生物制劑有過敏現象者。本研究經醫院倫理委員會審批通過。

1.2 研究對象 選取2015年1月—2016年1月我院符合上述納入及排除標準的原發性肝癌86例，男73例，女13例；年齡(50.45±13.55)歲；病程(5.50±2.50)個月；TNM分期：Ⅲ B期52例，Ⅳ期34例；肝細胞癌44例，肝內膽管癌42例。

1.3 治療方法 在末次規范化治療結束時，采集患者抗凝全血35 ml，進行NK細胞體外培養，采用刺激活化的外周血單個核細胞進行NK細胞擴增，在第4日、第8日及第11日分別置入新鮮培養基中進行培養，并進行細菌、真菌檢測，第14日可獲得NK細胞，分別在第14日、第15日通過靜脈回輸NK細胞，回輸細胞總量為(5～10)×109個，連續2次為1個療程，共2個療程，每個療程治療間隔2周。

1.4 觀察指標 分別于NK細胞治療前(末次規范化治療結束時)、NK細胞治療結束14 d分別抽取清晨空腹靜脈血各5 ml。采用FACS Vantage(日本)流式細胞檢測儀測定CD3+、CD4+、CD8+，采用美國BECKMAN COULTER (IMMAGE 800)特定蛋白儀，應用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)；采用全自動電化學發光儀(德國羅氏E170)利用酶聯免疫法檢測血清γ-谷氨酰轉移酶(γ-GGT)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、天冬氨酸轉氨酶(AST)。對患者進行電話、門診隨訪，隨訪截止時間為2017年4月或死亡，評估短期預后。

2 結果

2.1 免疫功能指標比較 較NK細胞治療前，治療后免疫功能指標CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 86例原發性肝癌NK細胞治療前后免疫功能指標比較

注：與治療前比較，aP<0.05

2.2 肝功能指標比較 NK細胞治療后，患者γ-GGT、ALT、TBIL、AST均低于治療前，差異有統計學差異(P均<0.05)。見表2。

表2 86例原發性肝癌患者NK細胞治療前后肝功能指標比較

注：γ-GGT為γ-谷氨酰轉移酶，ALT為丙氨酸轉氨酶，TBIL為總膽紅素，AST為天冬氨酸轉氨酶；與治療前比較，aP<0.05

2.3 近期預后 NK細胞治療后，3例出現39℃以上的高熱，經對癥治療，8 h內體溫均恢復正常。所有患者均完成足療程NK細胞治療，無因不良反應而終止治療者。隨訪9～20個月，中位隨訪時間為15個月，患者1年生存率為88.37%(76/86)。

3 討論

NK細胞具有抗腫瘤的作用，對肝癌患者進行NK細胞治療，即向其體內進行NK細胞回輸，不僅不會損傷機體正常的免疫功能，而且在殺傷惡性腫瘤細胞的基礎上，還可以提高機體的免疫功能，從而增強患者手術、放療及化療療效，減輕放療及化療不良反應，改善患者生活質量，延長生存時間[7-9]。

免疫功能降低是惡性腫瘤存在和發展的一個重要原因，而淋巴細胞浸潤、免疫球蛋白升高是肝癌患者預后較好的重要標志。T淋巴細胞亞群、免疫球蛋白均是機體免疫系統的重要組成部分[10-12]，前者可反映機體的免疫調節功能，后者發揮對致病病原體的識別、清除作用，從而維護機體正常的生理功能[13]。本研究對86例原發性肝癌NK細胞治療前后免疫功能指標進行比較，結果發現CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，與Adair等[14]的研究結果一致，提示NK細胞治療可以顯著改善肝癌患者的免疫功能。

γ-GGT、ALT、TBIL、AST均是反映肝臟功能的重要指標[15]。肝癌患者多數合并不同程度的肝硬化，而且由于惡性腫瘤對肝臟組織的破壞，手術、放療及化療等規范化治療均會導致肝功能異常[16]。本研究觀察原發性肝癌患者NK細胞治療前后肝功能指標的變化，結果發現治療后γ-GGT、ALT、TBIL、AST均較治療前降低，提示NK細胞治療能夠顯著改善肝癌患者的肝臟功能。

綜上所述，NK細胞治療可以顯著改善原發性肝癌患者的免疫功能、肝功能及近期預后。

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Effects of NK Cell Therapy on Immune Function and Liver Function of Patients with Primary Liver Cancer

DU Bo, ZHANG Peng

(Department of Hepatobiliary Surgery, People's Hospital of Kaizhou District of Chongqing, Chongqing 405400, China)

Objective To investigate effects of nature killer (NK) cell therapy on immune function and liver function of patients with primary liver cancer. Methods A total of 86 patients with primary liver cancer undergoing NK cell therapy during January 2015 and January 2016 were recruited in this study. All patients underwent NK cell therapy after standardized treatment. Immune function and liver function before and after treatment were compared, and short-term prognosis was evaluated. Results After NK cell therapy, immune function indexes such as CD3+, CD4+, IgG, IgM and IgA levels were significantly higher than those before treatment (P<0.05), while CD8 level was significantly lower than that that before treatment (P<0.05); liver function indexes such as γ-glutamyl transferase (γ-GT), alanine transarninase (ALT), total bilirubin (TBIL) and aspartate transaminase (AST) were significantly lower than those before treatment (P<0.05). The 1 year survival rate was 88.37% (76/86) with 9-20 months of follow-up. Conclusion On the basis of standardized treatment, NK cell therapy can improve immune function, liver function and short-term prognosis of patients with primary liver cancer.

Killer cells, natural; Liver neoplasms; Immune function; Liver function

重慶市衛生局基金資助項目(2015-981)

405400 重慶，重慶市開州區人民醫院肝膽外科

張鵬，E-mail:zhangpeng33877123@163.com

R392.12；R735.7

A

1002-3429(2017)07-0088-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.07.027

2017-04-13 修回時間：2017-05-10)