孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表達及意義

曹 鐘，魏建國，岑紅兵，袁曉露，夏丹萍，敖啟林

·短篇論著·

孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細胞瘤中STAT6、PAX8和CD34的表達及意義

曹 鐘1，魏建國2，岑紅兵1，袁曉露3，夏丹萍1，敖啟林4

目的 探討STAT6、PAX8和CD34在孤立性纖維性腫瘤(solitary fibrous tumor, SFT)/腦膜血管周細胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)中的表達及意義。方法 采用免疫組化法檢測26例M-HPC、22例神經鞘瘤、25例腦膜瘤以及10例腫瘤旁正常腦膜組織中STAT6(單/多克隆)、PAX8及CD34的表達。比較STAT6、PAX8和CD34在診斷M-HPC及其相似腫瘤中的價值。結果 不論單/多克隆抗體，26例M-HPC中STAT6均呈彌漫核強陽性，陽性率為100%(26/26)；57.7%(15/26)的SFT/腦膜HPC中PAX8呈核陽性；92.3%(24/26) 的M-HPC中CD34呈膜陽性；而在其他類型腫瘤及腦膜組織中所有抗體均陰性。相比PAX8和CD34，STAT6抗體具有較高的敏感性。結論 M-HPC是一種罕見的纖維母細胞軟組織腫瘤。特別是不典型病例，其形態學譜容易與其他間充質腫瘤混淆。相比PAX8和CD34，STAT6單/多克隆抗體免疫組化染色能夠更好地闡明M-HPC的免疫表型特征。

孤立性纖維性腫瘤/腦膜血管周細胞瘤；單克隆/多克隆抗體；STAT6；PAX8；CD34

孤立性纖維性腫瘤(solitary fibrous tumor, SFT)是一種少見的纖維母細胞軟組織腫瘤，WHO(2013)軟組織腫瘤分類認為其常發生于中年人，男女比例相當[1]。最初于1931年描述為發生在胸膜表面的來源于胸膜的纖維性腫瘤，隨后發現在全身許多部位均可發生。發生在腦膜的血管周細胞瘤(meningeal hemangiopericytoma, M-HPC)形態與SFT結構類似，具有相同的免疫表型。近年來，利用新一代的基因檢測技術表明：絕大多數SFT病例在12q13號染色體發生NAB2和STAT6基因融合，部分惡性和脂肪瘤樣SFT的腫瘤樣本中也可以檢測到NAB2-STAT6融合轉錄本[2]。PAX8基因是成對盒(paired box, PAX)轉錄因子家族成員，最近有報道提示部分SFT檢測出PAX8高表達。為此，本文檢測26例M-HPC中STAT6(單克隆/多克隆抗體)、PAX8以及CD34的表達，同時亦對22例神經鞘瘤、25例腦膜瘤及10例腫瘤旁正常的腦膜組織中的4種抗體進行檢測。比較4者對診斷M-HPC的敏感性。

1 材料與方法

1.1 材料 收集湖北省黃岡市中心醫院和浙江省紹興市人民醫院2004年8月～2014年6月期間手術切除的26例M-HPC、22例神經鞘瘤、25例腦膜瘤及10例腫瘤旁正常腦膜組織。26例M-HPC中，男性12例，女性14例，年齡27～70歲，中位數為45歲，腫瘤直徑4.2～12.5 cm，其中2例有復發病史，2例具有惡性特征。

1.2 方法 標本均經10%中性福爾馬林固定，常規脫水透明浸蠟切片，HE染色，同時行免疫組化染色。對所有標本進行免疫組化EnVision兩步法檢測，采用一抗包括：STAT6兔單克隆抗體(稀釋度1 ∶500，Abcam公司，)、STAT6兔多克隆抗體(稀釋度1 ∶1 000，購自美國Santa Crus公司)，PAX8兔單克隆抗體、CD34、vimentin、BCL-2、CD99均為工作液，購自北京中杉金橋公司，試劑盒購自福州邁新公司。STAT6、PAX8單克隆抗體經1 mmol/L EDTA(pH 9.0)緩沖液，STAT6多克隆抗體經10 mmol/L枸櫞酸(pH 6.0)緩沖液高壓抗原修復后，按照使用說明書進行操作，用已知的PAX8陽性的腎細胞癌作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判定 依據Schweizer等[3]對STAT6染色結果判定：染色強度進行半定量分級，根據腫瘤細胞核/質或膜中出現黃色或棕黃色信號，觀察每張切片中10個具有代表性的高倍視野，計算腫瘤細胞數，陽性結果評分分為3類，陰性：0～5%(-)；局部陽性：6%～50%(+)；彌漫陽性：≥51%()。PAX8、CD34、vimentin、BCL-2和CD99染色結果的判定也依據上述標準。

2 結果

2.1 鏡檢 鏡下見22例良性M-HPC腫瘤界限清，部分見假包膜。細胞形態善良，呈圓形、卵圓形或短梭形；組織呈隨意性生長模式，出現細胞密集區和疏松區，顯著的膠原間質，“血管外皮瘤”樣血管腔隙(圖1)，核分裂罕見。2例復發性M-HPC與良性者形態學相似，Ki-67增殖指數10%～20%。2例惡性M-HPC呈浸潤性生長，典型的“血管外皮瘤”樣外觀突然過渡到惡性區域，細胞核非典型性，核分裂象>4/10 HPF，部分區域可見凝固性壞死，細胞增殖指數均>20%。

2.2 免疫表型 26例M-HPC中，CD34陽性率為92.3%(24/26)、BCL-2陽性率為84.6%(22/26)、CD99陽性率為76.9%(20/26)、vimentin陽性率為100%(26/26)；上述標志物的陽性信號均位于細胞膜(圖2)；CD34在所有22例神經鞘瘤、25例腦膜瘤及10例正常腦膜組織中均不表達。26例M-HPC中，STAT6單/多克隆抗體的陽性信號均限于細胞核(圖3、4)，呈彌漫強陽性，其陽性率均為100%(26/26)，與患者年齡、性別、腫瘤大小、復發與否以及良惡性無關；所有其他類型的腫瘤及腦膜組織均未顯示STAT6陽性信號；其具有100%敏感性。在26例M-HPC中，PAX8陽性信號位于細胞核(圖5)，陽性信號強弱不等，其陽性率為57.7%(15/26)；所有其他類型的腫瘤及腦膜組織均未顯示PAX8陽性信號；其具有57.7%的敏感性。

3 討論

血管周細胞瘤，又稱血管外皮瘤。該病變包括了真性周細胞腫瘤、肌周細胞瘤和細胞變異型SFT。現今，SFT還包括了脂肪變異型、巨細胞血管纖維瘤型以及去分化/惡性變異型。SFT發病年齡譜系廣泛，無性別優勢，不僅可以發生在胸膜，是一種解剖學無處不在的成纖維細胞腫瘤，78%～88%歸為良性，12%～22%歸為惡性，其復發率和轉移率為5%～34%。良性SFT組織呈隨意性生長模式、出現細胞密集區和疏松區、顯著的膠原間質、“血管外皮瘤”樣的血管腔隙。在脂肪形成的SFT變異型(以前稱為脂肪瘤樣血管外皮瘤)中混雜有成熟的脂肪細胞，與經典的SFT免疫表型相同，但是需與梭形細胞脂肪瘤鑒別。當SFT出現散在的多核巨細胞時，與巨細胞血管纖維瘤在形態學上發生重疊，兩者免疫反應相似。極少數情況下，SFT發生大片的黏液樣變伴顯著的血管和隨機分布的一致性細胞的圖像與黏液樣/圓形細胞型脂肪肉瘤非常類似。細胞性SFT包含一致性小圓細胞需與尤因肉瘤鑒別。去分化變異型/惡性SFT呈現出經典的“血管外皮瘤”區域突然過渡到高級別肉瘤，細胞核分裂象>4/10 HPF伴細胞核非典型性、凝固性壞死、細胞增殖指數較高[4]。惡性SFT與單相型滑膜肉瘤、隆突皮膚纖維肉瘤、胃腸間質瘤、纖維肉瘤、多形性肉瘤等在形態上無法區分。M-HPC與纖維型腦膜瘤、神經鞘瘤的形態也極為類似。因此，對于SFT和上述相似病變的鑒別診斷顯得尤為重要。

以往認為CD34彌漫性細胞膜強陽性是SFT最重要的特征，但是后來發現其陽性率僅為81%～95%，少數病例可以是陰性或者局部陽性；BCL-2和CD99也是診斷SFT的重要標志物，陽性率分別為100%和75%；而且在許多與SFT形態相似的軟組織腫瘤中也可以檢測到上述標志物呈陽性[5]。在極少數情況下，SFT也可以表達EMA、SMA、S-100、CK、desmin。本組26例M-HPC中，CD34的陽性率為92.3%(24/26)、BCL-2的陽性率為84.6%(22/26)、CD99的陽性率為76.9%(20/26)、vimentin的陽性率為100%(26/26)。由于上述指標在許多與SFT相似的軟組織腫瘤中也有表達，因此CD34對于診斷M-HPC的特異性和敏感性不強。

近年來研究發現在良性和惡性SFT中普遍發生NAB2-STAT6基因融合，融合的部位位于NAB2中的與早期生長反應因子結合阻遏結構域的C-端和STAT6反式激活結構域，激活了EGR介導的前饋方式轉錄，導致其失平衡，從而發揮致瘤效應。NAB2-STAT6基因被認為是SFT的特異性基因，在部分SFT/M-HPC和胸腔內SFT中可以檢測到NAB2-STAT6基因融合[6-7]。NAB2-STAT6基因融合有多種變異型，最常發生融合的部位位于NAB2外顯子4與STAT6外顯子2/3之間，其次位于NAB2外顯子6與STAT6外顯子16/17之間[8]。但是，基因檢測價格比較昂貴并且效果不穩定。Schweizer等[3]提出利用免疫組化法檢測STAT6蛋白代替融合基因的檢測，NAB2與STAT6基因融合后使細胞質中的STAT6蛋白進入到細胞核中。因此通過免疫組化法檢測STAT6蛋白能反映出NAB2-STAT6融合基因的信息[9]。STAT6彌漫強陽性細胞核的表達對于診斷SFT和鑒別其他的軟組織腫瘤具有較高的敏感性和特異性。目前，STAT6有單克隆和多克隆兩種抗體，兩者對于診斷SFT具有不同的敏感性和特異性。對于STAT6多克隆抗體，研究顯示89%～98%的SFT和所謂的“M-HPC”中STAT6在細胞核免疫反應陽性[3,10]。Yoshida等[9]采用STAT6多克隆抗體檢測49例SFT及其159例相似腫瘤發現：在SFT中，不論其發生部位以及組織學形態，STAT6呈100%(49/49)核強陽性表達；相比而言，僅有(4/159)2.5%的非SFT腫瘤顯示核/質為弱陽性，其余155例未表達。Demicco等[11]檢測2 366例間充質腫瘤后發現：除了240例SFT中的206例檢測出STAT6表達外，還檢測出在高分化/去分化脂肪肉瘤(49/408)、未分類肉瘤(8/65)和纖維瘤病(14/184)中核/質呈陽性表達。在其他的軟組織腫瘤也會有STAT6核/質陽性表達的具體機制還不甚明了。相比多克隆抗體，STAT6單克隆抗體的特異性和敏感性更高。Cheah等[12]利用STAT6單克隆抗體檢測54例SFT及其他相似病變發現：在SFT中，STAT6呈100%陽性，而在細胞性血管纖維瘤、肌纖維母細胞瘤、梭形細胞脂肪瘤等其他腫瘤均未見表達，顯示100%特異性和100%敏感性，是一種強有力的診斷標志物。本組26例M-HPC中，不論單/多克隆抗體，STAT6的陽性信號均位于細胞核，呈彌漫強陽性，其陽性率為100%(26/26)；STAT6在所有其他類型的腫瘤和正常腦膜中均不表達，顯示出100%的敏感性。

①②③④⑤圖1 鏡下腫瘤呈“血管外皮瘤”樣外觀圖2 腫瘤細胞CD34呈細胞膜彌漫陽性，EnVision法 圖3 腫瘤細胞STAT6呈細胞核彌漫強陽性，EnVision法 圖4 惡性腫瘤細胞STAT6呈細胞核陽性，EnVision法 圖5 腫瘤細胞PAX8呈細胞核彌漫強陽性，EnVision法

PAX8蛋白屬于配對盒成員轉錄因子家族成員，該蛋白在甲狀腺、腎臟及米勒管形成過程中起重要作用。現在已經發現PAX8在卵巢、腎臟、膀胱、甲狀腺及胸腺等上皮性腫瘤中呈過表達，而在乳腺、肺及間皮腫瘤則不表達，因此對于判斷轉移癌的原發部位和鑒別診斷是很好的標志物，在軟組織腫瘤中的表達情況鮮有相關研究。McDaniel等[13]檢測了41例已經證實CD34陽性的SFT中PAX8的表達，結果顯示26.8%和45.6%的SFT分別呈局部和彌漫陽性，其陽性率與患者年齡、腫瘤大小、部位、惡性與否以及復發無關。在NAB2-STAT6基因融合的腎臟SFT中也發現了PAX8呈彌漫強陽性[14]。本實驗結果顯示，在26例M-HPC中，PAX8陽性信號位于細胞核，其陽性率為57.7%(15/26)，而其他類型的腫瘤均未見其信號，顯示出57.7%的敏感性，其敏感性低于STAT6(100%)和CD34(92.3%)。雖然對于PAX8在SFT中的表達機制還不清楚，但是容易造成診斷陷阱，因此必須排除轉移性伴有肉瘤樣或梭形細胞形態的癌。

綜上所述，免疫組化檢測STAT6、PAX8和CD34在診斷和鑒別診斷SFT/M-HPC上有幫助。相比PAX8和CD34，利用STAT6單/多克隆抗體具有更高的敏感性，是一種理想的生物學標志物。

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1湖北省黃岡市中心醫院病理科，黃岡 4380002浙江省紹興市人民醫院病理科，紹興 3120003湖北省孝感市中心醫院病理科，孝感 4320004華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院病理研究所/同濟醫學院病理學系，武漢 430030

曹 鐘，男，碩士，副主任醫師。Tel: (0713)8625273， E-mail: caozhong1980@sina.om 敖啟林，男，副教授，碩士生導師，通訊作者。E-mail: aoqilin@263.net

時間：2017-6-20 11:18 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.017.html

R 739.45

A

1001-7399(2017)06-0669-03

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.017

接受日期：2017-02-07