風輪菜酚酸類化學成分研究

王凌天+孫忠浩+鐘明亮+吳海峰+張海晶+朱乃亮，孫桂波+葉曉霞+許旭東+朱寅荻+楊峻山

[摘要] 綜合運用硅膠Sephadex LH-20，ODS，MCI gel等柱色譜及制備高效液相色譜等方法，對風輪菜酚類部位進行化學成分分離純化得到28個化合物。利用NMR和MS解析技術鑒定為芹菜素（1）、芹菜素-7-O-葡萄糖苷（2）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（3）、羊紅膻酯（4）、芹菜素-7-O-蕓香糖苷（5）、木犀草素（6）、木犀草素-4′-O-葡萄糖苷（7）、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷正丁醇酯（8）、木犀草素-7-O-蕓香糖苷（9）、木犀草素-7-O-新橙皮糖苷（10）、金合歡素（11）、金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷（12）、蒙花苷（13）、柚皮素（14）、江戶櫻花苷（15）、柚皮素-7-O-蕓香糖苷（16）、異櫻花素（17）、異櫻花苷（18）、香蜂草苷（19）、橙皮苷（20）、山柰酚（21）、槲皮素（22）、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷（23）、對羥基桂皮酸（24）、咖啡酸（25）、cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）- 1-hydroxymethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid （26）、mesaconic acid （27）、gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside （28），其中化合物7， 9～10， 12， 23， 26～28首次從風輪菜屬植物中分離得到。采用H₂O₂氧化心肌細胞損傷為模型，對化合物1～6， 8～17和19進行心肌保護活性篩選，江戶櫻花苷（15）顯示出顯著的心肌保護作用；與模型組的細胞存活率（62.12±6.18）%，陽性對照（槲皮素）在20.0 mg·L^-1下的細胞存活率為（84.55±8.26）%，江戶櫻花苷在25.0 mg·L^-1下的細胞存活率為（84.25±7.36）%。

[關鍵詞] 唇形科；風輪菜屬；風輪菜；黃酮；心肌保護

[Abstract] Twenty-eight compounds were isolated and purified from Clinopodium chinense by Sephedax LH-20， ODS， MCI and preparative HPLC. Their structures were identified as apigenin （1）， apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside （2）， apigenin-7-O-β-D-glucuronopyranoside （3）， thellungianol （4）， apigenin-7-O-β-D-rutinoside （5）， luteolin （6）， luteolin-4′-O-β-D-glucopyranoside （7）， apigenin-7-O-β-D-pyranglycuronate butyl ester （8）， luteolin-7-O-β-D-rutinoside （9）， luteolin-7-O-β-D-noehesperidoside （10）， acacetin （11）， acacetin-7-O-β-D-glucuronopyranoside （12）， buddleoside （13）， naringenin （14）， pruning （15）， nairutin （16）， isosakuranetin （17）， isosakuranin （18）， didymin （19）， hesperidin （20）， kaempferol （21）， quercetin （22）， kaempferol-3-O-α-L-rahmnoside （23）， p-hydroxycinnamic acid （24）， caffeic acid （25）， cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）-1 -hydroxymethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid （26）， mesaconic acid （27）， gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside （28）. Among them， compounds 7， 9-10， 12， 23， 26-28 were isolated from the Clinopodium for the first time. The protective effects of compounds 1-6， 8-17 and 19 against H₂O₂-induced H9c2 cardiomyocyte injury were tested， compounds 15 exhibited significantly protective effects. Compared with the cell viability of （62.12±6.18）% in the model， pruning exhibited viabilities of （84.25±7.36）% at 25.0 mg·L^-1， respectively， using quercetin as a positive control [cell viability of （84.55±8.26）%， 20 mg·L^-1].

[Key words] Lamiaceae；Clinopodium；Clinopodium chinense；favonoid；myocardial protection

風輪菜Clinopodium chinense（Benth.） O. Kuntze為唇形科風輪菜屬植物。風輪菜屬植物約20種，我國產12種，5變種，2變型，主要分布于浙江、江蘇、安徽、江西、福建等地。首載于《救荒本草》（1406年）草部，在我國有悠久的民間藥用歷史。現已被2015年版《中國藥典》收載為斷血流藥用，具有收斂止血的功效，用于治療崩漏、尿血、鼻衄，牙齦出血，創傷出血[1]。風輪菜的止血作用對治療和預防心血管疾病方面具有獨特的優勢，有著良好的研究開發前景。本研究希望通過對風輪菜的化學成分研究，從中獲得結構多樣的天然產物，篩選心肌保護活性顯著成分，為進一步深入研究風輪菜化學成分及其藥理活性奠定基礎。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ 600 型核磁共振儀核磁共振儀（德國Bruker 公司）；LTQ-Obitrap XL質譜儀（美國ThermoFisher 公司）；LC3000高效液相色譜儀（北京創新通恒科技有限公司）；YMC Pack ODS-A半制備色譜柱（10 mm×250 mm，5 μm，日本YMC公司）；Sephadex LH-20凝膠為Pharmacia公司產品；柱色譜和薄層色譜硅膠GF₂₅₄（青島海洋化工廠）；顯色劑為10%硫酸乙醇溶液；常規所用試劑均為分析純（北京化工廠）。

風輪菜藥材于2013年購自安徽，經北京協和醫學院藥用植物研究所廣西分所袁經權教授鑒定為唇形科風輪菜屬植物C. chinense。樣品標本現存于中國醫學科學院藥用植物研究所中草藥物質基礎與資源利用教育部重點實驗室，編號201303012。

2 提取與分離

風輪菜地上部分15 kg粉碎后，以70%乙醇回流提取2次，回收乙醇得浸膏約1.8 kg。以6 000 mL水溶解此浸膏后，依次用6 000 mL石油醚萃取3次，每次2 000 mL，減壓回收溶劑，得石油醚萃取物（FS，100 g）；用18 000 mL乙酸乙酯萃取3次，每次6 000 mL，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯萃取物（FY，700 g），乙酸乙酯部分（FY，500 g）經硅膠柱色譜以氯仿-甲醇（100∶0～50∶50）進行梯度洗脫，分為FY-a～g 7個部分。FYa經過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個流分FYa-1～FYa-3。FYa-1～FYa-3經過MCI柱以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到9個組分（FYa-1.1～ FYa-1.3，FYa-2.1～ FYa-2.3和FYa-3.1～ FYa-3.3）；FYa-1.1經甲醇重結晶得到化合物27（15 mg），FYa-1.3經甲醇重結晶得到化合物1（64 mg），FYa-2.1經甲醇重結晶得到化合物25（10 mg），FYa-2.2經甲醇重結晶得到化合物24（30 mg）；FYa-2.2經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（55∶45）等度洗脫，得到化合物6（10 mg），21（5 mg） 和22（7 mg），FYa-3.2經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（60∶40）等度洗脫，得到化合物11（6 mg）和14（8 mg），FYa-3.3經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（65∶35）等度洗脫，得到化合物17（9 mg）和22（7 mg）。FYb甲醇重結晶得到化合物4（15g），剩余濾液經過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個流分FYb-1～ FYb-3。FYb-2分別經過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水50∶50）得到化合物28（11 mg）。FYc經甲醇重結晶得到化合物8（3 g），剩余濾液經過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個流分FYc-1～FYc-3。FYc-1～FYc-3分別經過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水45∶55），得到化合物2（10 mg），5（4 mg），18（2 mg）。FYd經甲醇重結晶得到化合物19（20 g），剩余濾液經過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個流分FYd-1～FYd-3。FYd-1～FYd-3分別經過Sephadex LH-20，以甲醇洗脫，得到9個組分（FYd-1.1～FYd-1.3，FYd-2.1～FYd-2.3和FYd-3.1～FYd-3.3）；FYd-1.2經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（35∶65）等度洗脫，得到化合物3（16 mg）和12（13 mg），FYd-2.2經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（40∶60）等度洗脫，得到化合物7（3 mg）和15（13 mg），FYd-3.2經過高效制備液相色譜，以甲醇-水（40∶60）等度洗脫，得到化合物23（3 mg）。FYe經甲醇重結晶得到化合物13（6 g），剩余濾液經過ODS柱，以甲醇-水（30∶70～75∶25）梯度洗脫，得到3個流分FYe-1～FYe-3，FYe-1～FYe-3分別經過Sephadex LH-20（甲醇）、高效制備液相色譜（甲醇-水35∶65），得到化合物9（16 mg），10（8 mg），16（9 mg），20（4 mg）。

3 結構鑒定

化合物1 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.93（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），6.48（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。以上波譜數據與文獻[2]對比，確定化合物為芹菜素。

化合物2 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.97（1H，s，5-OH），7.96（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.83（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.44（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.07（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.5（C-6），162.9（C-7），94.8（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），99.9（C-1″），73.1（C-2″），77.2（C-3″），69.5（C-4″），76.4（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數據與文獻[3]對比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖苷。

化合物3 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.82（1H，br s，H-8），6.82（1H，s，H-3），6.43（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.16（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.0（C-3），181.9（C-4），161.5（C-5），99.4（C-6），162.7（C-7），94.6（C-8），156.9（C-9），105.3（C-10），120.8（C-1′），128.5（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.5（C-6′），99.5（C-1″），72.8（C-2″），74.6（C-3″），71.6（C-4″），76.0（C-5″），171.0（C-6″）。以上波譜數據與文獻[4]對比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷。

化合物4 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.95（2H，d，J=7.2 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=7.2 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.85（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.46（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.30（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.18（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），1.55（2H，m，H-2），1.32（2H，m，H-3），0.83（3H，t，J=7.2 Hz，H-4）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.2（C-6），162.4（C-7），94.7（C-8），156.9（C-9），105.5（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.1（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），99.4（C-1″），72.7（C-2″），75.2（C-3″），71.1（C-4″），75.5（C-5″），168.6（C-6″），59.7（OMe），64.3（C-1），30.0（C-2），18.4（C-3），13.4（C-4）。以上波譜數據與文獻[5]對比，確定化合物為芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷丁酯。

化合物5 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.87（1H，s，H-3），6.80（1H，s，H-8），6.38（1H，s，H-6），5.25（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.66（1H，s，H-1），1.18（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：165.5（C-2），104.4（C-3），183.2（C-4），162.6（C-5），101.5（C-6），163.7（C-7），95.7（C-8），159.1（C-9），106.7（C-10），122.1（C-1′），129.6（C-2′），117.1（C-3′），162.1（C-4′），117.1（C-5′），129.6（C-6′），99.1（C-1″），77.4（C-2″），78.2（C-3″），70.9（C-4″），78.5（C-5″），67.1（C-6″），100.6（C-1），71.5（C-2），71.7（C-3），73.1（C-4），69.6（C-5），19.2（C-6）。以上波譜數據與文獻[6]對比，確定化合物為芹菜素-7-O-蕓香糖苷。

化合物6 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.41（1H，d，J=8.4，2.4 Hz，H-6′），7.39（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），6.89（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.67（1H，s，H-3），6.44（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=2.4 Hz，H-6）。以上波譜數據與文獻[7]對比，確定化合物為木犀草素。

化合物7 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.49（1H，br d，J=8.4 Hz，H-6′），7.48（1H，br s，H-2′），7.23（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.79（1H，s，H-3），6.44（1H，s，H-8），6.15（1H，s，H-6），4.88（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。¹³C-NMR（MeOD，150 MHz） δ：162.8（C-2），102.1（C-3），182.3（C-4），160.2（C-5），98.4（C-6），160.8（C-7），93.9（C-8），156.8（C-9），103.3（C-10），121.6（C-1′），114.6（C-2′），145.5（C-3′），147.2（C-4′），116.4（C-5′），117.0（C-6′），100.8（C-1″），72.8（C-2″），76.5（C-3″），70.4（C-4″），75.2（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數據與文獻[8]對比，確定化合物為木犀草素-4′-O-葡萄糖苷。

化合物8 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.99（1H，s，5-OH），7.95（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），7.44（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′），7.42（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.81（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.75（1H，s，H-3），6.46（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.30（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.10（2H，t，J=7.2 Hz，H-1），1.55（2H，m，H-2），1.31（2H，m，H-3），0.82（3H，t，J=7.2 Hz，H-4）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.5（C-2），103.1（C-3），181.9（C-4），161.2（C-5），99.4（C-6），162.4（C-7），94.6（C-8），156.9（C-9），105.5（C-10），119.1（C-1′），113.6（C-2′），145.8（C-3′），149.9（C-4′），116.4（C-5′），121.4（C-6′），99.3（C-1″），72.8（C-2″），75.2（C-3″），71.2（C-4″），75.5（C-5″），168.7（C-6″），64.4（C-1），30.0（C-2），18.4（C-3），13.4（C-4）。以上波譜數據與文獻[9] 對比，確定化合物為木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷正丁醇酯。

化合物9 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.96（1H，s，5-OH），7.40（2H，m，H-2′，6′），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.72（1H，s，H-3），6.72（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.46（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。5.08（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.56（1H，s，H-1），1.09（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.7（C-2），103.2（C-3），182.1（C-4），161.3（C-5），100.8（C-6），162.9（C-7），95.1（C-8），157.2（C-9），105.6（C-10），121.4（C-1′），119.3（C-2′），146.2（C-3′），150.9（C-4′），116.5（C-5′），120.2（C-6′），99.9（C-1″），73.1（C-2″），76.0（C-3″），70.5（C-4″），75.2（C-5″），66.6（C-6″），99.6（C-1），70.5（C-2），70.2（C-3），72.2（C-4），68.3（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數據與文獻[10]對比，確定化合物為木犀草素-7-O-蕓香糖苷。

化合物10 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.95（1H，s，5-OH），7.44（2H，m，H-2′，6′），6.91（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.79（1H，s，H-3），6.74（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.39（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。5.22（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），5.16（1H，s，H-1），1.15（3H，d，J=6.6 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.5（C-2），103.2（C-3），182.0（C-4），162.6（C-5），99.5（C-6），161.5（C-7），94.5（C-8），157.4（C-9），105.8（C-10），121.6（C-1′），114.1（C-2′），145.8（C-3′），149.9（C-4′），116.4（C-5′），119.5（C-6′），98.1（C-1″），77.3（C-2″），76.4（C-3″），70.4（C-4″）、77.2（C-5″），60.6（C-6″），100.7（C-1），70.5（C-2），69.6（C-3），70.2（C-4），68.2（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數據與文獻[11]對比，確定化合物為木犀草素-7-O-新橙皮糖苷。

化合物11 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.91（1H，s，5-OH），8.03（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），7.11（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.84（1H，s，H-3），6.51（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），3.86（3H，s，OMe）。以上波譜數據與文獻[12]對比，確定化合物為金合歡素。

化合物12 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.97（1H，s，5-OH），7.95（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.86（1H，s，H-3），6.86（1H，J=1.8 Hz，H-6），6.47（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.31（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.67（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：164.3（C-2），103.1（C-3），182.0（C-4），161.4（C-5），99.1（C-6），162.4（C-7），94.6（C-8），157.0（C-9），105.5（C-10），121.0（C-1′），128.6（C-2′），116.0（C-3′），161.2（C-4′），116.0（C-5′），128.6（C-6′），52.0（OMe），99.3（C-1″），72.7（C-2″），75.2（C-3″），71.3（C-4″），75.4（C-5″），169.2（C-6″）。以上波譜數據與文獻[13]對比，確定化合物為金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷。

化合物13 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.91（1H，s，5-OH），8.06（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），7.15（1H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.95（1H，s，H-3），6.79（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.45（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.06（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），4.55（1H，br s，H-1），3.86（3H，s，OMe），1.08（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：156.7（C-2），103.5（C-3），181.7（C-4），162.7（C-5），99.4（C-6），163.7（C-7），94.5（C-8），162.1（C-9），105.2（C-10），122.4（C-1′），128.2（C-2′），114.4（C-3′），160.8（C-4′），114.4（C-5′），128.2（C-6′），55.3（OMe），99.6（C-1″），72.8（C-2″），75.9（C-3″），69.3（C-4″），75.4（C-5″），65.8（C-6″），100.2（C-1），70.0（C-2），70.4（C-3），71.8（C-4），68.0（C-5），17.5（C-6）。以上波譜數據與文獻[14]對比，確定化合物為蒙花苷。

化合物14 白色針狀結晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.15（1H，s，5-OH），7.31（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.79（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），5.88（2H，br s，H-8，H-6），5.43（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.26（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.68（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e）。以上波譜數據與文獻[15]對比，確定化合物為柚皮素。

化合物15 淡黃色粉末¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.11（1H，s，5-OH），7.36（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.15（2H，br s，H-6，8），5.51（1H，dd，J=12.6，2.4 Hz，H-2），4.98（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.17（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3b），2.77（1H，dd，J=16.8，2.4 Hz，H-3a）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：77.2（C-2），42.1（C-3），196.9（C-4），165.1（C-5），95.5（C-6），165.5（C-7），96.7（C-8），162.6（C-9），103.2（C-10），128.7（C-1′），128.5（C-2′），115.2（C-3′），158.1（C-4′），115.2（C-5′），128.5（C-6′），103.2（C-1″），73.2（C-2″），77.1（C-3″），69.7（C-4″），78.6（C-5″），60.6（C-6″）。以上波譜數據與文獻[16]對比，確定化合物為江戶櫻花苷。

化合物16 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.34（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′，6′），6.80（2H，d，J=7.8 Hz，H-3′，5′），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.11（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.40（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.15（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3a），2.75（1H，dd，J=16.2，3.0 Hz，H-3e），4.99（1H，t，J=7.8 Hz，H-1″），4.52（1H，s，H-1），1.08（3H，d，J=6.0 Hz，H-6）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.6（C-2），42.2（C-3），197.1（C-4），163.0（C-5），99.4（C-6），165.1（C-7），96.4（C-8），162.6（C-9），103.2（C-10），128.6（C-1′），128.4（C-2′），115.2（C-3′），157.7（C-4′），115.2（C-5′），128.4（C-6′），96.3（C-1″），72.9（C-2″），76.2（C-3″），69.6（C-4″），75.1（C-5″），66.0（C-6″），100.5（C-1），70.2（C-2），70.7（C-3），72.1（C-4），69.9（C-5），18.1（C-6）。以上波譜數據與文獻[17]對比，確定化合物為柚皮素-7-O-蕓香糖苷。

化合物17 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.15（1H，s，5-OH），7.53（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），7.03（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），5.94（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.92（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.56（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），3.32（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.78（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e），3.82（3H，s，OMe）。以上波譜數據與文獻[18]對比，確定化合物為異櫻花素。

化合物18 白色粒狀晶體，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.05（1H，s，5-OH），7.34（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.80（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.20（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.16（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.52（1H，dd，J=13.2，3.0 Hz，H-2），4.90（1H，d，J=7.8 Hz，H-1），3.36（1H，dd，J=16.8，13.2 Hz，H-3a），2.73（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3e），3.65（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：77.3（C-2），41.0（C-3），196.0（C-4），161.8（C-5），95.4（C-6），164.2（C-7），94.4（C-8），161.7（C-9），102.1（C-10），129.2（C-1′），127.3（C-2′），113.1（C-3′），159.1（C-4′），113.1（C-5′），127.3（C-6′），98.6（C-1″），73.1（C-2″），76.2（C-3″），69.4（C-4″），76.8（C-5″），60.4（C-6″）。以上波譜數據與文獻[19]對比，確定化合物為異櫻花苷。

化合物19 白色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.01（1H，s，5-OH），7.46（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.13（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），5.57（1H，dd，J=12.6，2.4 Hz，H-2），3.10（1H，dd，J=17.4，12.6 Hz，H-3b），2.78（1H，dd，J=17.4，2.4 Hz，H-3a），3.77（3H，s，OMe），4.98（1H，t，J=7.8 Hz，H-1″），4.52（1H，br s，H-1），1.09（3H，m，rha-Me）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.3（C-2），41.8（C-3），197.0（C-4），163.0（C-5），96.4（C-6） 165.1（C-7），95.4（C-8），162.5（C-9），103.3（C-10），130.4（C-1′），128.3（C-2′），113.9（C-3′），159.4（C-4′），113.9（C-5′），128.3（C-6′），55.2（OMe），100.6（C-1″），72.9（C-2″），75.5（C-3″），70.7（C-4″），76.2（C-5″），66.0（C-6″），99.3（C-1），69.6（C-2），70.2（C-3），72.0（C-4），68.3（C-5），17.8（C-6）。以上波譜數據與文獻[20]對比，確定化合物為香蜂草苷。

化合物20 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.03（1H，s，5-OH），6.93（3H，m，H-2′，5′，6′），6.14（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.12（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.50（1H，dd，J=12.6，3.0 Hz，H-2），4.97（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），4.53（1H，br s，H-1），3.32（1H，dd，J=16.8，12.6 Hz，H-3b），2.78（1H，dd，J=16.8，3.0 Hz，H-3a），3.77（3H，s，OMe）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：78.4（C-2），42.3（C-3），197.0（C-4），163.0（C-5），99.4（C-6），165.4（C-7），95.6（C-8），162.5（C-9），103.3（C-10），131.0（C-1′），114.1（C-2′），148.0（C-3′），146.5（C-4′），112.1（C-5′），117.9（C-6′），55.7（OMe），96.4（C-1″），73.0（C-2″），75.5（C-3″），70.7（C-4″），76.3（C-5″），66.1（C-6″），100.6（C-1），69.6（C-2），70.3（C-3），72.1（C-4），68.3（C-5），17.8（C-6）。以上波譜數據與文獻[21]對比，確定化合物為橙皮苷。

化合物21 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.48（1H，s，5-OH），8.04（2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.43（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.18（1H，d，J=1.8 Hz，H-6）。以上波譜數據與文獻[22]對比，確定化合物為山柰酚。

化合物22 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：12.49（1H，s，5-OH），6.18（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），6.40（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），7.67（1H，d，J=2.4 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.53（1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6′）。該化合物碳氫譜數據與文獻[23]對比，確定化合物為槲皮素。

化合物23 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.76（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′，5′），6.38（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.21（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.21（1H，d，J=1.8 Hz，H-1″），0.99（3H，d，J=6.0 Hz，H-6″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ：158.1（C-2），134.4（C-3），178.7（C-4），160.8（C-5），99.7（C-6） 161.8（C-7），94.8（C-8），159.4（C-9），109.5（C-10），122.8（C-1′），130.9（C-2′），116.4（C-3′），159.2（C-4′），116.4（C-5′），130.9（C-6′），99.7（C-1″），70.2（C-2″），70.3（C-3″），71.4（C-4″），70.1（C-5″），18.1（C-6″）。以上波譜數據與文獻[24]對比，確定化合物為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物24 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.51（1H，d，J=8.4 Hz，H-2，6），7.49（1H，d，J=16.2 Hz，H-7），6.79（1H，d，J=8.4 Hz，H-3，5），6.28（1H，d，J=16.2 Hz，H-8）。以上波譜數據與文獻[25]對比，確定化合物為對羥基桂皮酸。

化合物25 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ：7.41（1H，d，J=15.6 Hz，H-7），7.02（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），6.96（1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6），6.75（H，d，J=8.4 Hz，H-5），6.16（1H，d，J=15.6 Hz，H-8）。以上波譜數據與文獻[26]對比，確定化合物為咖啡酸。

化合物26 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 7.24（1H，s，J=1.2 Hz，H-2），6.85（1H，d，J=8.4 Hz，H-5），7.08（1H，dd，J=8.4，1.2 Hz，H-6），7.47（1H，d，J=16.2 Hz，H-7），6.34（1H，d，J=16.2 Hz，H-8），6.85（1H，br s，H-2′），6.68（2H，br s，H-5′，6′），4.64（1H，J=3.6 Hz，H-7′），6.25（1H，d，J=3.6 Hz，H-8′）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 129.9（C-1），105.9（C-2），148.5（C-3），149.7（C-4），107.8（C-5），124.2（C-6），144.0（C-7），116.7（C-8），129.9（C-1′），114.8（C-2′），144.8（C-3′），144.8（C-4′），115.0（C-5′），118.2（C-6′），72.4（C-7），112.9（C-8）。以上數據與文獻[27]對比，確定化合物為cis-3-[2-[1-（3，4-dihydroxy-phenyl）-1-hydroxylmethyl]-1，3-ben-zodioxol-5-yl]-（E）-2-propenoic acid。

化合物27 白色針晶，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 10.87（-OH），10.65（-OH），7.23（1H，s，H-3），1.72（3H，s，H-5）；¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 164.8（C-4），151.4（C-1），137.6（C-2），107.6（C-3），11.7（C-5）。以上數據與文獻[28]對比，確定化合物為mesaconic acid。

化合物28 黃色粉末，¹H-NMR（DMSO-d₆，600 MHz） δ： 6.75（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），7.23（1H，dd，J=9.0，3.0 Hz，H-4），7.41（1H，d，J=3.0 Hz，H-6），10.25（1H，s，H-7），4.85（1H，d，J=7.8 Hz，H-1′），6.98（1H，br d，J=8.4 Hz，H-3′），7.54（1H，ddd，J=8.4，7.8，1.7 Hz，H-4″），6.94（1H，td，J=7.8，1.8 Hz，H-5″），7.76（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6″）。¹³C-NMR（DMSO-d₆，150 MHz） δ： 112.7（C-1），156.3（C-2），117.4（C-3），117.6（C-4），149.2（C-5），125.1（C-6），171.3（C-7），101.2（C-1′），73.4（C-2′），76.1（C-3′），70.1（C-4′），73.1（C-5′），64.6（C-6′），112.9（C-1″），160.2（C-2″），119.3（C-3″），135.8（C-4″），117.2（C-5″），129.9（C-6″），168.6（C-7″）。以上數據與文獻[29]對比，確定化合物為gentisic acid 5-O-β-D-（6′-salicylyl）-glucopyranoside。

4 體外抗心肌保護活性的測定

采用H₂O₂氧化心肌細胞損傷為模型，對化合物1～6，8～17，19進行活性篩選，以槲皮素[31]為陽性對照見表1。將實驗分為空白對照組：實驗過程中使用無血清培養液處理；H₂O₂模型組：無血清培養液培養2 h后，加入終濃度為200 μmol·L^-1H₂O2 作用2 h；主要活性成分預處理組（4 h）：分別將含有相應濃度的各種活性成分的無血清培養液作用4 h后，棄去含藥培養液。加入終濃度為200 μmol·L^-1H₂O₂作用 2 h；陽性對照組（4 h）：將含有20 mg·L^-1槲皮素[30]的無血清培養液作用4 h后，棄去含藥培養液，后面操作與主要活性成分預處理組一致。

取對數生長期的H9c2心肌細胞以5×10⁴個/孔的密度接種于96孔板中，在5% CO₂，37 ℃ 條件培養36 h后，進行處理。處理結束后，每孔加入5 g·L MTT 溶液20 μL，37 ℃孵育4 h后小心移除培養液，每孔中加入100 μL DMSO，微孔板震蕩器震蕩10 min使甲臜結晶充分溶解后，在微孔板掃描酶標儀測570 nm處吸光度（A）。將各測試孔的A減去本底A（無血清培養基加MTT，無細胞），根據各孔A計算±s。細胞存活率=（A加藥細胞-A本底）/（A對照細胞-A本底）×100%。

5 小結

本實驗從風輪菜種分離得到28個化合物，其中化合物7，9～10，12，23，26～28首次從風輪菜屬植物中分離得到，豐富了風輪菜的化學成分。風輪菜中分離得到的單體成分木犀草素（6） 木犀草素-7-O-新橙皮糖苷（10）、金合歡素-7-O-葡萄糖醛酸苷（12）、柚皮素（14）、江戶櫻花苷（15）、柚皮素-7-O-蕓香糖苷（16）均可不同程度降低H₂O₂氧化引起的細胞損傷，其中江戶櫻花苷顯示出較強保護作用，與模型組的細胞存活率（62.12±6.18）%，陽性對照（槲皮素）在20.0 mg·L^-1下的細胞存活率為（84.55±8.26）%，江戶櫻花苷在25.0 mg·L^-1下的細胞存活率為（84.25±7.36）%。二氫黃酮類抗H₂O₂氧化誘導的H9c2心肌細胞損傷活性較顯著，且呈一定的劑量依賴性。

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[責任編輯 丁廣治]