RP—HPLC法測定肝康寧片中虎杖苷的含量

2017-08-04 13:16:06張國躍劉春河

中國醫藥科學 2017年9期

張國躍?劉春河

[摘要] 目的建立RP-HPLC法測定肝康寧片中虎杖苷含量的方法。方法采用Kromasil C18色譜柱（5?m，4.6mm×250mm）；甲醇-0.005mol/L乙酸銨溶液（28∶72）為流動相，流速1.0mL/min；柱溫35℃，檢測波長306nm。結果虎杖苷進樣量在0.02824～0.4236μg之間，與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9999，加樣回收率平均為97.51%，RSD=1.83%。結論本法結果簡便可行、準確度高，適用于當肝康寧片中虎杖苷的含量測定。

[關鍵詞] RP-HPLC法；肝康寧片；虎杖苷；虎杖

[中圖分類號] R286 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）09-39-03

Content of polydatin in liver corelle tablet determined by RP-HPLC

ZHANG Guoyue1 LIU Chunhe2

1.Shanxi Institute for Food and Drug Control， Xi'an 710065， China； 2.Tianyou Hospital Affiliated to Wuhan University of Science & Technology， Wuhan 430064， China

[Abstract] Objective To establishi the method to determine the content of Polydatin in Liver Corelle tablet by RP-HPLC. Methods Kromasil C18 chromatographic column （5?m， 4.6mm×250mm） was used. Methanol-0.005mol/L and ammonium acetate solution （28∶72） was the mobile phase， and the current speed was 1.0Ml/min.The column temperature was 35℃. Detection wavelength was 306nm. Results Sample size of Polydatin was within 0.02824μg-0.4236μg， which showed good linear relationship with peak area， r=0.9999. Average recovery rate was 97.51%， RSD=1.83%. Conclusion This method is simple， feasible and accurate. It is suitable for the determination of polydatin in Corelle tablets.

[Key words] RP-HPLC method； Liver corelle tablet； Polydatin； Polygonum cuspidatum

肝康寧片是由白花蛇舌草、虎杖、垂盆草、柴胡、人參、白術、等十二味藥味制成的薄膜衣片，具有清熱解毒，活血疏肝，健脾祛濕的功效，常用于急慢性肝炎，濕熱疫毒蘊結、肝郁脾虛證候的輔助治療。原質量標準收載于國家食品藥品監督管理局標準[WS-10127（ZD-0127）-2012-2012Z]中，含量測定項僅測定虎杖中的蒽醌類成分大黃素，沒有二苯乙烯類的含量測定，不能有效的控制該制劑中虎杖所含有的二苯乙烯類成分含量，而二苯乙烯類的藥理活性與該藥物的治療目的密切相關，此類成分的抗炎等作用對于該藥物的治療效果起著相當大的作用[1-2]，故測定該藥物中二苯乙烯類的代表成分虎杖苷顯得尤為重要，原標準亟待完善。受陜西步長高新制藥有限公司的委托，按照國家藥典委員會關于藥品質量標準技術要求，研究建立了用RP-HPLC法測定肝康寧片中虎杖苷含量的方法，并進行了方法學驗證。該方法操作簡便、快捷，準確度高、重復性好，可很好地監控該產品中虎杖苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫高效液相色譜儀、Waters Waters 2695/ 2487/ 2669高效液相色譜儀（紫外和二極管陣列檢測器），Waters Empower工作站；月旭 C18色譜柱（5?m，4.6mm×250mm）；賽多利斯AGME235S電子分析天平；KQ-500DE型數控超聲波清洗器。

1.2 其他

虎杖苷對照品（批號：111575-200502）由中國食品藥品檢定研究院提供。試劑均為分析純，水（超純水），甲醇（色譜純）。“肝康寧片”、不含虎杖的陰性樣品均由委托方制備。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Kromasil C18色譜柱（5?m，4.6mm×250mm）；甲醇-0.005mol/L乙酸銨溶液（28∶72）為流動相，流速1.0mL/min；柱溫35℃，測定波長306nm。

2.2 對照品溶液的制備

取虎杖苷對照品7.51mg，加稀乙醇溶解并定容至100mL量瓶中，再用稀乙醇稀釋成每1mL含15.02μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取肝康寧片，研細，精密稱取約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇25mL，稱定重量，85℃水浴回流45min，冷卻，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續濾液，即得。

2.4 專屬性試驗

取不含虎杖的陰性樣品，按上述2.3供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液，將對照品溶液、陰性對照溶液和供試品溶液各10μL，分別注入高效液相色譜儀中，測定，結果未見對虎杖苷測定的干擾。見圖1。

2.5 線性關系考察

將虎杖苷對照品溶液（濃度0.1412mg/mL）適量，稀釋成濃度為2.824、5.648、14.12、28.24和56.48μg/mL的溶液，照文中的色譜條件測定，進樣量均為10μL，虎杖苷質量（X）作為橫坐標，虎杖苷峰面積（Y）作為縱坐標，線性回歸結果表明，進樣量在0.02824～0.5648μg范圍內，與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為 Y=40119X+710.41（r=0.9999），見圖2。

2.6 儀器精密度考察

取虎杖苷對照品溶液，重復進樣7次，峰面積的RSD=0.28%，表明精密度良好。

2.7 精密度

2.7.1 樣品重復性考察取6份同一樣品，照上文中的方法制備試樣，測定，結果虎杖苷平均含量為1.97mg/g，RSD=1.39%。見表1。

2.7.2 中間精密度考察取同一批樣品，由本實驗室的其他實驗員按照上文中的試驗方法，在不同時間使用另一臺高效液相色譜儀測定樣品中的虎杖苷含量，與與本文作者測定結果進行比較，RSD=2.02%。

2.8 供試液穩定性考察

取同一份樣品，照文中的方法制備試樣，分別在0、1、4、7、14、19、28h測定，結果RSD=1.65%，表明供試液在28h內較穩定。

2.9 準確度考察

精密稱取樣品約0.25g共6份，精密加入濃度為0.531mg/mL虎杖苷對照品溶液1mL，揮干溶劑，照上文中的方法制成供試液，測定，結果平均回收率為97.51%，RDS=1.83%。見表2。

2.10 峰純度檢測

取樣品溶液和對照品溶液，分別進樣10μL，用二極管陣列檢測器，在200～500nm波長范圍掃描PDA光譜，結果，樣品PDA光譜與對照品PDA光譜一致，同時考察樣品峰純度，結果供試品溶液色譜峰純度符合要求。

3 討論

虎杖為蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的干燥根莖和根，主要成分有蒽醌類、二苯乙烯類、酚類和黃酮類等，具有祛風利濕、祛痰止咳、清熱解毒、活血化瘀等功效，近年來虎杖的研究較多，藥理學研究顯示，虎杖具有保護心血管系統、肝保護、抗菌抗病毒、抗炎鎮痛、抗腫瘤、提高免

疫力等多種藥理活性[2-7]，其中的二苯乙烯類和蒽醌類成分如虎杖苷、大黃素等是其主要活性成分，現行的《中國藥典》（2015年版一部）含量測定標的物就是虎杖苷和大黃素 [8]，虎杖苷可在生物體內脫去糖苷轉化為白藜蘆醇，而白藜蘆醇是近年來植物抗毒素研究的熱點，安梅等[9]從白藜蘆醇的來源、一般特性、生物合成、體內代謝和藥理活性等方面綜述了白藜蘆醇抗腫瘤作用及機制的研究進展和抗氧化、抗炎等效應的研究近況，認為白藜蘆醇作為多種中藥治療炎癥、脂類代謝和心臟疾病等的有效成分，其作用于心血管系統疾病、抗腫瘤和抗炎作用等的臨床研究和基礎研究也在不斷深入，白藜蘆醇的藥理學作用正日益得到重視，有望成為防治相關疾病的新型藥物，其臨床應用前景將更加廣闊。

截止目前，尚未有測定肝康寧片中虎杖苷含量的報道，根據肝康寧片的處方和制備工藝，結合相關文獻[10-14]，分別以80%的甲醇、甲醇及乙醇、稀乙醇作為提取溶劑，分別加熱回流45min，結果以稀乙醇為溶劑制備的供試品溶液虎杖苷的含量最高；再以稀乙醇為提取溶劑，分別用30、60、90min的處理時間和超聲處理、加熱回流處理方式來制備供試品溶液，結果文中的制備方法較好，延長處理時間，虎杖苷的含量沒有明顯增加。曾試驗過乙腈-水、乙腈-水-0.2%磷酸溶液等流動相系統，結果與本文中流動相條件下差異不大，從經濟和安全角度考慮，確定了本文中的流動相。還通過改變流速、柱溫和改用其他品牌色譜柱分別運行供試品溶液，結果樣品色譜峰的峰型、面積等無明顯變化。鑒于虎杖苷的光穩定性不太好，整個試驗過程應注意避光操作[15]。

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