廣州地區正常兒童血清維生素B12參考區間調查

黃鈺君++++++伍紹國++++++丘媛媛++++++蔡敏敏++++++陳慧敏+++++++黎彥攸

[摘要] 目的 建立廣州地區健康兒童血清維生素B12（VB12）參考區間。 方法 應用LK3000V維生素檢測儀對2015年9月～2016年12月廣州地區2065名健康兒童（男1208名，女857名）和129名成年人（男52名，女77名）的血清VB12水平進行檢測，對結果進行統計分析。 結果 11歲以內的11個年齡組、11～17歲組男、女血清VB12水平差異均無統計學意義（P > 0.05）。0～2歲、>2～5歲和>7～17歲、>5～7歲、>17歲血清VB12水平中位數（P2.5，P97.5）分別為252.4（192.3，338.0）、253.1（192.5，359.5）、262.7（194.8，374.9）、297.5（233.7，383.1） pg/mL，兩兩比較差異有統計學意義（P < 0.05）。年齡與血清VB12水平的相關系數（r值）為0.228（P=0.000）。 結論 廣州地區正常兒童血清VB12水平參考區間2歲以內為192.3～338.0 pg/mL，>2～5歲和>7～17歲兩個年齡段為192.5～359.5 pg/mL，>5～7歲為194.8～374.9 pg/mL。

[關鍵詞] 參考區間；維生素B12；廣州地區；兒童

[中圖分類號] R179 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）06（a）-0114-05

Investigation on the normal reference range of healthy children serum Vitamin B12 in Guangzhou

HUANG Yujun1 WU Shaoguo2 QIU Yuanyuan3 CAI Minmin4 CHEN Huimin5 LI Yanyou6

1.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou Children's Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510120， China； 2.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou 12th People's Hospital， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 3.Department of Laboratory Medicine， Guangzhou Maternity Health Care Center， Guangdong Province， Guangzhou 510120， China； 4.Department of Laboratory Medicine， Zhujiang New Town Branch of Guangzhou Women and Children Medical Center， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 5.Department of Clinical Nutrition， Zhujiang New Town Branch of Guangzhou Women and Children Medical Center， Guangdong Province， Guangzhou 510620， China； 6.Tianjin Lanbiao Science and Technology Ltd.， Tianjin 300384， China

[Abstract] Objective To establish the normal reference range of healthy children serum Vitamin B12 （VB12） in Guangzhou. Methods Levels of serum VB12 of 2065 healthy children （1208 boys and 857 girls） and 129 adults （52 male and 77 female） living in Guangzhou Region were examined by LK3000V Vitamin Analyzer from September 2015 to December 2016. The results were analyzed statistically. Results There were no statistical differences in levels of serum VB12 between boys and girls in 11 age groups （aged less than 11） and 11-17 age group （P > 0.05）. The median （P2.5， P97.5） levels of serum VB12 defined by age were 252.4 （192.3， 338.0） pg/mL of 0-2 years-old group， 253.1 （192.5， 359.5） pg/mL of >2-5 years-old group as well as >7-17 years-old group， 262.7 （194.8， 374.9） pg/mL of >5-7 years-old group， 297.5 （233.7， 383.1） pg/mL of >17 years-old group， there were statistically significant differences between any two groups （P < 0.05）. Positive correlation was found between age and level of serum VB12 （r=0.228， P=0.000）. Conclusion Reference ranges of healthy children serum VB12 in Guangzhou Region are showed as follows： 192.3-338.0 pg/mL of 0-2 years-old children， 192.5-359.5 pg/mL of >2-5 years-old as well as >7-17 years-old children， and 194.80-374.9 pg/mL of >5-7 years-old children.

[Key words] Reference range； Vitamin B12； Guangzhou Region； Children

維生素B12（vitamin B12，VB12）是兒童正常生長發育而所必需的微量營養素之一，對血液系統成熟、神經系統的發育有重要作用。典型的VB12缺乏導致巨幼細胞性貧血，但通常沒有貧血癥狀的隱性VB12缺乏者若治療不及時將造成不可逆的神經系統損害，如記憶力減退、學習成績和認知能力下降、行為異常等[1]。兒童早期VB12缺乏可能僅表現為體質虛弱、發育遲緩等非特異性的癥狀，臨床診斷較困難，因此早期診斷并及時治療是預防長期神經系統并發癥的關鍵[2]。然而，迄今未有診斷VB12缺乏的金標準，血清VB12作為目前判斷機體VB12水平的一線指標，是首選標準常規診斷試驗[3]。正確的參考區間是判斷血清VB12是否缺乏的前提。國內外研究均顯示，正常人群血清VB12水平存在著明顯的人種、地區、性別、年齡間差異，各地應該建立當地的參考范圍[4-9]。國內有關正常人群VB12參考區間的研究多數基于成年人群，較少見兒童人群的報道，尤其欠缺對正常兒童按年齡、性別進行分層的大樣本系統研究。本文按照美國臨床實驗室標準化委員會C28-A的要求[10]，通過檢測分析表觀“健康”兒童血清VB12的水平，以期建立廣州地區兒童人群本實驗室的正常參考區間，同時為臨床早期發現兒童VB12缺乏進而及時治療提供判斷標準，也為其他實驗室參考本地區正常兒童VB12水平提供循證醫學依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2015年9月～2016年12月在廣州市婦女兒童醫療中心、廣州市兒童醫院、廣州市婦嬰醫院、廣州市第十二人民醫院進行健康查體的兒童2065名，均肝腎功能正常、血尿常規正常及其他體檢結論為“健康”，同時經問卷調查無任何慢性病史、代謝病史，采集標本前1個月內無急性病，采集標本前2周未服用任何處方藥。其中，男1208名，女857名。同時招募健康成年人129名作為成年人對照，其中，男52名，女77名。研究經廣州市婦女兒童醫療中心倫理委員會批準，研究對象均知情同意。

1.2 儀器與試劑

儀器為天津市蘭標電子科技發展有限公司生產的LK3000V維生素檢測儀；試劑為蘭標公司生產的配套試劑盒（樣品處理液、定標液、質控品等）。

1.3 方法

1.3.1維生素B12檢測 各醫院標本統一送至廣州市兒童醫院檢驗科檢測。抽取受試者空腹靜脈血3 mL，置不含添加劑的一次性真空采血管，3000 r/min離心10 min，取40 μL血清標本（或質控品）加入盛有2 mL VB12樣本處理液的樣品管中，顛倒混勻后放在工作臺旋轉杯中，選擇檢測項目進行檢測。

1.3.2 參考區間驗證實驗 按照所建參考區間的年齡分組，分別重新隨機選取相應年齡體檢結論為“健康”的男女各10名測定VB12，對所建立的參考區間進行驗證。

1.4 統計學方法

采用IBM SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，所有分組比較數據均采用One sample Kolmogorov-Smirnov Test法做正態性檢驗。正態分布數據表示形式為均數±標準差（x±s），兩組間比較用獨立樣本t檢驗，多組間比較用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD-t（方差齊）或Tamhane's T2法（方差不齊）；非正態分布數據表示形式為中位數（四分位數）[M（P25，P75）]采用非參數檢驗：多組間比較用Kruskal-Wallis法，兩兩比較采用Mann-Whitney法。去除離群值用Tukey's法，參考區間用（P2.5，P97.5）表示。以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2065名健康兒童各年齡組兩性間血清VB12水平比較

由表1可見，17歲及以下各年齡組男性與女性血清VB12水平差異均無統計學意義（P > 0.05），故可以合并性別后按年齡組進行比較。

2.2 各年齡組、合并部分年齡組后血清VB12水平

由表2可見，總體判斷各組間差異有統計學意義（P < 0.05），但兩兩比較并非所有組間差異均有統計學意義。因此，本研究將水平差異無統計學意義的年齡組進行合并后行方差分析或非參數檢驗比較，直至組間兩兩比較差異均有統計學意義，最終分成0～2歲、>2～5歲和>7～17歲、>5～7歲、>17歲四組。見表3。

2.3 血清維生素B12水平與年齡的相關性分析

血清VB12水平與年齡的相關系數（r值）為0.228（P=0.000）。

2.4 簡單驗證參考區間實驗

選取的60名來自3個年齡段的血清VB12檢測結果全部在相應年齡段的參考區間之內，提示該參考區間可以應用于臨床實驗室。

3 討論

VB12又被稱為氰鈷胺，作為輔因子參與甲基化同型半胱氨酸轉化為蛋氨酸而影響DNA的合成，參與甲基丙二酰輔酶A轉化成琥珀酰輔酶A而影響神經髓鞘的代謝繼而影響神經系統的發育與功能[11]。研究表明，VB12與同型半胱氨酸、葉酸是成年人心血管疾病和腦血管疾病的獨立危險因子[12-14]。研究還表明，在孩童時期的低維生素B水平和高同型半胱氨酸水平可能對改變其長大后發生慢性疾病的風險具有潛在的影響[15]。因此，正確評估少年兒童時期VB12狀態對于健康成長以及預防成年后心腦血管病都具有重要意義。國內外研究均顯示，兒童人群中有較高的VB12缺乏率[16-18]。但迄今未有診斷VB12缺乏的金標準，更沒有統一可用的健康少年兒童維生素B的參考區間，對VB12缺乏的判定造成了困擾。一方面，除了不同地區人群種族、飲食、生活習慣、性別年齡間可能存在固有的差異外，兒童生長發育動態變化也深深地影響著實驗室指標的參考區間[19]，再加上VB12水平測定的儀器和方法眾多，相互間可比性差，很難建立統一的參考范圍。另一方面，通常要建立基于大樣本的、健康的、兒童人群的參考值調查研究非常困難，在全世界領域都是一項艱巨的任務[10]。因此，國外很多研究也基于醫院的“健康人群”建立參考區間[20-21]。在國內尚無多中心大樣本自然兒童人群調查研究的情況下，本研究旨在建立基于醫院“健康”兒童人群血清VB12水平的參考區間，先行為兒科臨床提供可用、有用的參考標準提供循證醫學證據，促進臨床診療的精準化。

建立參考區間的理想做法，應基于健康人群，并對性別、年齡、種族等關鍵協變量進行分層[22]。因此，本研究將在醫院進行健康保健、擇期手術的“準健康兒童”作為調查對象，選取經各種實驗室檢查和體格檢查最終結論為“健康”的血清VB12結果納入統計分析。首先按年齡分層，11歲以內以1歲為一組、11～17歲因樣本量小單列為一組，觀察男童與女童血清VB12水平的差異，發現所有未成年各年齡組兩性間血清VB12水平差異均無統計學意義（P > 0.05）。與國內重慶（2～7歲）[16]、湖北（健康成人）報道的結果[6]，及多數國外基于青少年人群如美國（3～19歲）[23]、英國（4～18歲）[15]、威爾士（12～13歲）[24]、希臘（6～15歲）[25]、奧地利（2～17歲）[26]等所報道的結果一致；但與國內部分地區成年人群[4]、歐洲10個國家（12.5～17.49歲）[27]、土耳其（7～14歲）[28]、科威特（10～19歲）[29]、中國臺灣（12～15歲）[30]、西班牙（13～18.5歲）[31]所報道的男性明顯低于女性有所不同。可見，性別對不同地區正常少年兒童血清VB12水平的影響不同，未見有女童血清VB12水平明顯低于男童的報道。隨后本研究合并兩性結果觀察各個年齡組間的血清VB12水平。結果發現，2歲以內（含2歲）嬰幼兒血清VB12水平最低，依次明顯低于>2～5歲和>7～17歲組（P < 0.05）、>5～7歲組（P < 0.05），而這三組又分別明顯低于>17歲組（P < 0.05）。總體而言，兒童血清VB12水平有隨年齡增加而增加的趨勢，與國內外報道的各年齡組間均無統計學差異[4，16，29]，國內[6]與多數國外[15，23，25-29]報道的隨年齡有遞減趨勢結果不同。反映了不同地區兒童年齡對血清VB12水平影響存在較大差異。2歲以下嬰幼兒血清VB12水平最低，可能是由于該階段為兒童體格生長發育最迅速的階段，對營養的要求相對更高，而此階段飲食又較為單一，VB12攝入量相對不足從而導致血清VB12水平明顯低于2歲以上各階段的兒童。至于>2～5歲和>7～17歲兩個年齡段兒童血清VB12水平無統計學差異且明顯低于>5～7歲組的原因有待進一步研究。此外，相關性分析顯示，17歲以內未成年人血清VB12水平與年齡存在明顯的正相關，也是本研究中血清VB12水平隨年齡增長而增加在統計學上的另一種印證。因此，就本次調查的人群而言，兒童血清VB12的參考區間應按3個年齡段進行設置：0～2歲為192.30～338.0 pg/mL，>2～5歲和>7～17歲兩個年齡段為192.5～359.5 pg/mL，>5～7歲為194.8～374.9 pg/mL。然后本研究隨機選取上述3個年齡區間內正常兒童各20名的血清VB12結果均落在相應參考區間之內，驗證了該參考區間的臨床適用性。

需要指出的是，本研究所建立的廣州地區正常兒童血清VB12水平參考區間是95%的正常兒童血清VB12檢測結果會落入的一個范圍，其下限和上限并非發生不良臨床事件，如VB12缺乏導致的巨幼細胞性貧血或高半胱氨酸血癥、神經系統損傷的臨界值，有關這些臨界值的研究目前也未見有報道，需要在日后進一步行隨機對照試驗進行研究。

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（收稿日期：2017-02-10 本文編輯：程 銘）