獼猴桃、茉莉花復合益生菌酸奶加工工藝及抗氧化性的研究

（徐州工程學院食品學院，江蘇徐州221111）

獼猴桃、茉莉花復合益生菌酸奶加工工藝及抗氧化性的研究

宋慧，馬利華，陳學紅，呂強，顧泳

（徐州工程學院食品學院，江蘇徐州221111）

研究了獼猴桃汁、茉莉花汁制備凝固型益生菌酸奶，考察獼猴桃汁、茉莉花汁添加量、接種量、發酵溫度、發酵時間等因素對凝固型酸奶的酸度、持水性的影響，考察了酸奶在儲藏期間酸奶的乳酸菌活菌數、游離氨基酸質量分數、總酚質量濃度、DPPH·清除率、OH·清除率、脂質過氧化物抑制率、亞硝酸鹽抑制率等品質及體外抗氧化性指標。結果表明：獼猴桃汁20%，茉莉花汁15%，接種量5%，發酵溫度40℃，發酵時間8 h時，酸奶質量最佳。添加獼猴桃汁、茉莉花汁使酸奶具有較強的抗氧化性，提高了酸奶的品質。

獼猴桃汁；茉莉花汁；酸奶；抗氧化性；品質

0 引言

酸奶是一種發酵型乳制品，含有大量的活性乳酸菌[1]。能增強腸胃的消化功能，增加腸道有益菌的數量以及降低血清中膽固醇含量、預防心血管疾病等。從新產品的發展趨勢上看，酸奶產品以其功能性吸引更多的消費者，如鄭麗紅等[2]研究的牛奶、大豆蛋白復合凝固型酸奶等。

獼猴桃含有多種微量元素、維生素C和十幾種人體必須的氨基酸，營養價值高[3]。茉莉花為著名的茶葉原料，重要的風味物質，可清熱去毒，安神，有利于胃、開郁辟穢，益心、肝、脾、胃[4]。

本研究中添加獼猴桃汁和茉莉花汁，生產出具有獨特風味、營養豐富的酸奶，為酸奶市場提供一種新產品。

1 實驗

1.1 材料與儀器

獼猴桃、茉莉花（市售）。

3，5-二硝基水楊酸、蘇丹紅、酚酞、茚三酮、瓊脂、葡萄糖、蛋白胨、氫氧化鈉、氯化鈉等（分析純），菌種（市售直投式凍干菌），雙歧桿菌（MRS培養基）。

THZ-C恒溫振蕩器，xsp-2ca生物雙目顯微鏡，7230G型可見分光光度計，PC-1000電熱恒溫水浴鍋水浴鍋，手提式壓力蒸汽滅菌器，YXQG01高壓均質機，SW-CJ-1FD無菌操作臺。

1.2 樣品的制備

（1）獼猴桃汁的制備。獼猴桃挑選、去皮、破碎、熱燙、打漿、抽濾、冷藏，備用。

（2）茉莉花汁的制備。干茉莉花挑選、粉碎、浸提、抽濾、冷藏，備用。

（3）發酵劑的制備。菌種為市售直投菌（乳酸桿菌（L）∶嗜熱鏈球菌（S）=1∶1）；雙歧桿菌BB。

（4）母發酵劑的制備。稱取一定量的脫脂乳粉，加蒸餾水溶解，經105℃（10 min）高壓滅菌，冷卻到40～45℃，無菌條件下按5%的比例接種直投菌，置于42℃恒溫條件下培養5～7 h；以同樣方法按5%的比例接種雙歧桿菌，置于37℃恒溫條件下培養21～24 h，待脫脂乳凝固后，置于4℃冰箱中冷藏備用。

（5）生產發酵劑的制備。取鮮牛乳100 mL于三角瓶中，經105℃（10 min）高壓滅菌，冷卻至冷卻到40～45℃，無菌條件下按3%～5%的比例接種直投菌，置于42℃恒溫條件下培養4～6 h；以同樣方法按5%的比例接種雙歧桿菌，置于37℃恒溫條件下培養6～8 h，待脫脂乳凝固后，置于4℃冰箱中冷藏備用。

1.3 方法

1.3.1 游離氨基酸的測定

采用茚三酮比色法[5]，氨基酸標準曲線Y= 0.1294x-0.1432，R2=0.9985。

1.3.2 總多酚質量分數的測定

采用鐵氰化鉀法[5]，多酚標準曲線Y=0.9609x+ 0.0141，R2=0.9957。

1.3.3 抗氧化性測定

DPPH自由基清除活性根據馬利華等[6]的方法測定；羥基自由基清除活性根據Zhang等[7]的方法測定；脂質過氧化反應的抑制作用根據秦衛東等[8]的方法測定；對亞硝酸根離子的抑制作用根據趙金偉等[9]方法測定。

1.3.4 酸度測定

吸取10 mL待測乳，加20 mL蒸餾水，再加0.5 mL 0.5%的酚酞酒精溶液，用濃度為0.1 mol/L的NaOH標準溶液滴定至微紅色，在1 min內不消失為止。用下式計算滴定酸度：

滴定酸度=CN×100，

式中：C為消耗NaOH標準溶液毫升數；N為NaOH標準溶液濃度。

1.3.5 乳酸菌活菌數的測定

乳酸菌總數采用GB4789.35-2010中方法。

1.3.6 持水性測定

在10℃以下，將20 g凝固型酸奶以轉速為3 000 r/min離心20 min，測定樣品質量。持水性=離心后沉淀的質量/樣品質量×100%。

1.3.7 不同獼猴桃汁、茉莉花汁添加量對酸奶品質的影響

分別取質量分數為5%，10%，15%，20%，25%，30%的獼猴桃汁和茉莉花汁，加入鮮奶和白砂糖，接種量按質量分數為6%接入，發酵溫度為42℃，發酵時間為8 h，以普通酸奶為對照，分析不同接種量對實驗酸奶的酸度、持水性的影響。

1.3.8 接種量對酸奶發酵的影響

將20%獼猴桃汁、15%茉莉花汁均勻混合后，加入鮮奶和白砂糖，接種量按質量分數為2%，3%，4%，5%，6%依次接入；發酵溫度為42℃，發酵時間為8 h，以普通酸奶為對照，分析不同接種量對實驗酸奶的酸度、持水性的影響。

1.3.9 不同發酵溫度對酸奶發酵的影響

將質量分數為20%獼猴桃汁、15%茉莉花汁均勻混合后，加入鮮奶和白砂糖，接種量按5%接入，發酵溫度分別為36，38，40，42，44℃；發酵時間為8 h，以普通酸奶為對照，分析不同發酵溫度對實驗酸奶的酸度、持水性的影響。

1.3.10 不同發酵時間對酸奶發酵的影響

將質量分數為20%獼猴桃汁、15%茉莉花汁均勻混合后，加入鮮奶和白砂糖，接種量按5%接入，發酵溫度42℃，發酵時間分別為4，6，8，10，12 h；以普通酸奶為對照，分析不同發酵時間對實驗酸奶的酸度、持水性的影響。

1.3.11 正交實驗

根據單因素試驗的結果，將接種量（A）、發酵溫度（B）、發酵時間（C）作為考察的3個因素，進行三因素三水平正交實驗，結果如表1所示。

表1 正交實驗結果

2 結果與分析

2.1 不同獼猴桃汁、茉莉花汁添加量對酸奶品質的影響

由于乳酸菌等微生物發酵糖類物質產生乳酸等有機酸，使酸奶產生一定的酸度，適當的酸度會使凝固型酸奶具有良好的品質[10]。酸奶凝乳的持水力則是與乳清蛋白的變性有關，大于80℃以上加熱一定(大于5 min)時間，部分乳清蛋白會變性[11]，乳清蛋白變性達到一定程度會增加持水力，使凝固型酸奶具有較好的凝固性。實驗結果表明，添加獼猴桃汁和茉莉花汁可以提高酸奶的酸度和持水性，可能是因為獼猴桃汁與茉莉花汁中含有較多的碳水化合物，促進了乳酸菌的繁殖與生長，當添加獼猴桃汁質量分數為20%、茉莉花汁質量分數為15%時酸奶的酸度和持水性達到最佳，分別比對照提高33.1%和24.9%。圖1為獼猴桃汁、茉莉花汁對酸度、持水性的影響。

圖1 不同添加量對酸度、持水性的影響

2.2 不同接種量對酸奶發酵品質的影響

接種量是指接種乳酸菌數量，接種量越大，對酸奶品質的影響越大。實驗結果表明，添加獼猴桃汁和茉莉花汁后酸奶的接種量比對照略高，對照接種量在4%～5%較為合適，而樣品接種量則在5%～6%較為合適，可能由于樣品中添加的茉莉花汁中含有一定的多酚物質，對乳酸菌的生長略有影響。

2.3 不同發酵溫度對酸奶發酵品質的影響

隨著溫度的不斷升高，酶的活性不斷提高，細胞內的生命活動不斷加快，生長速度也變快[12]。實驗結果表明：40～42℃可以保證乳酸菌最大活菌數的商品狀態，并且保證酸奶的品質最好。

2.4 不同發酵時間對酸奶發酵的影響

圖2 接種量對酸度、持水性的影響

圖3 發酵溫度對酸度、持水性的影響

發酵時間可以影響乳酸菌的生命活動及代謝產物的多少，發酵時間過長，產酸過多，會影響酸奶的品質。實驗結果表明，發酵時間在8～10 h內，酸奶的酸度和持水性都最佳（如圖4所示）。

圖4 發酵時間對酸度、持水性的影響

2.5 最佳發酵條件

表2 正交實驗結果

由表2可以看出，三因素影響酸度、持水性的大小分別為A＞B＞C，即接種量〉發酵溫度〉發酵時間；最佳提取條件為A3B1C1，即最佳條件為：接種量5%，發酵溫度40℃，發酵時間8 h時，酸奶質量最佳。

2.6 儲藏過程中酸奶的游離氨基酸、總酚、乳酸菌活菌數的變化

由圖5和圖6表明，儲藏期前期，乳酸菌數迅速增加,由于酪蛋白水解、多肽及多酚物質的分解加速,酸奶中游離氨基酸、多酚的質量濃度也急劇上升。隨著儲藏期延長，乳酸菌活菌數的增長穩定,酸乳凝乳形成固定了游離的水分,蛋白酶、多肽酶類及多酚的運輸和活性以及物質運輸受到了很大的限制，游離氨基酸和多酚質量濃度增加緩慢，甚至停止。由實驗結果可以看出，儲藏期在8～10 d酸奶中游離氨基酸、總酚質量濃度及乳酸菌活菌數最佳，由于獼猴桃汁和茉莉花汁，含有較多的蛋白質、多糖、多酚等活性物質，可以提高酸奶的營養價值。儲藏8 d后，游離氨基酸、總酚質量濃度、乳酸菌活菌數分別比對照高8.1%，59.54%，5.1%。

圖5 儲藏期復合酸奶總酚質量濃度、游離氨基酸變化

圖6 儲藏期復合酸奶乳酸菌活菌數變化

2.7 儲藏過程中酸奶抗氧化性的變化

自由基，是生物體內有關酶促系統，在需氧代謝過程和電子傳遞鏈中電子傳遞的中間產物，生物體內自由基的產生與疾病的發生有直接關系。適當補充外源性抗氧化劑或給予能使機體內源性自由基清除劑恢復到一定水平的藥物，可有效改善與自由基過多有關的疾病[13]。

圖7 儲藏期復合酸奶DPPH·清除率OH·清除率的變化

圖8 儲藏期復合酸奶脂質過氧化物抑制率亞硝酸鹽抑制率的變化

DPPH·代表醇溶性自由基、OH·代表水溶性自由基、脂質過氧化物自由基代表脂溶性自由基，亞硝酸鹽抑制率表示對亞硝酸鹽的抑制作用。酸奶經過乳酸菌的發酵作用，產生了許多具有生物活性的物質，使酸奶具有了一定的抗氧化性。由圖7和圖8可以看出，儲藏前期樣品與對照的四種抗氧化性能均增強較快，儲藏8～10 d以后則趨于平緩。儲藏10 d樣品和對照各種自由基的清除率或抑制率分別達到：DPPH·清除率為84.36%和63.94%；OH·清除率為71.53%和60.44%；脂質過氧化物自由基抑制率為66.47%和54.92%；亞硝酸鹽抑制率為55.33%和40.16%。樣品的DPPH·清除率、OH·清除率、脂質過氧化物自由基抑制率和亞硝酸鹽抑制率又分別比對照提高了31.9%，18.3%，21.03%，37.8%；表明了樣品添加適量的獼猴桃汁和茉莉花汁，增加了酸奶中的多糖、多酚、蛋白住、氨基酸等生物活性物質，從而提高了樣品的抗氧化能力。

2.8 復合酸奶體外抗氧化性與總多酚質量濃度的相關性

圖9 抗氧化性與總酚質量濃度的相關性

各種食物中含有多種具有生物活性的化合物，當與機體作用后能引起各種生物效應，稱為生物活性物質。它們種類繁多，有糖類、脂類、蛋白質多肽類、甾醇類、生物鹼、甙類、揮發油等等[13]。實驗結果表明，添加獼猴桃汁和茉莉花汁的復合酸奶，含有較多的多酚類生物活性物質，提高了酸奶的抗氧化性，且DPPH·清除率、OH·清除率、脂質過氧化物自由基抑制率和亞硝酸鹽抑制率與多酚類活性物質的含量呈線性相關，相關系數分別達到0.94，0.8799，0.8815和0.8848。

3 結論

酸奶添加獼猴桃汁質量分數20%，茉莉花汁質量分數15%口味和品質最佳，最佳發酵條件為接種量5%，發酵溫度40℃，發酵時間8 h。

添加適量的獼猴桃汁和茉莉花汁制備的新型復合酸奶游離氨基酸含量、多酚物質含量以及乳酸菌活菌數均上升，DPPH·清除率、OH·清除率、脂質過氧化物自由基抑制率和亞硝酸鹽抑制率的能力增強，是一種風味獨特、營養保健型的復合酸奶，具有較好的市場空間。

[1]李麗華,王紅葉,賈軍燕，等.凝固型酸奶的制備和質量評價[J].中國乳品工業,2010,38(12):49-51.

[2]鄭立紅,張建才,李春華，等.牛奶、大豆蛋白復合凝固型酸奶的研制[J].食品與發酵工業，2008，34（4）:154-158.

[3]張麗華,惠偉,屠蔭華.獼猴桃在食品加工中的開發利用[J].氨基酸和生物資源,2005（2）:14-16.

[4]蔣慧穎,馬玉仙,黃健鋒，等.茉莉花保健功效及相關保健產品研究現狀[J].山西農業大學學報,2016，（8）36(8):604-606.

[5]劉鄰渭.食品化學[M].北京：中國農業出版社,2000,55.

[6]馬利華，秦衛東，陳學紅，等.牛蒡皮提取物抗氧化活性及組成的研究[J].中國食品學報,2011（8）：23-29.

[7]ZHANG L H，WANG X，DONG L L.Antioxidation and antiglyca?tion of polysaccharides from misgunus anguillicandatus[J].Food Chem?istry，2010，124（1）：183-187.

[8]秦衛東，陳學紅，馬利華，等.黑曲霉發酵豆粕制備抗氧化肽研究[J].食品科學，2010,31（23）：289-293.

[9]趙金偉,李范洙,張先.蘋果梨酚類物質抗氧化活性研究[J].食品科學, 2010,17:170-172.

[10]李全陽,夏文水,焦恩峰，等.凝固型酸乳質量影響因素機及其相互作用關系的研究[J]食品與發酵工業,2006,32(3):116-120.

[11]謝愛英,黨亞麗,李芳芳，等.不同巴氏殺菌條件對酸奶品質的影響[J].食品科學,2011,32(9):14-17.

[12]孫健,陳靜,翁心剛.酸奶的儲存溫度對產品品質的影響[J].食品工業科技,2012,31(12):140-141.

[13]劉靜波,林松毅.功能食品學[M].北京：化學工業出版社,2008：23.

Study on technology and inoxidability of complex probiotics yogurt of kiwi fruitand and jasmine flower

SONG Hui，MA Lihua，CHEN Xuehong，LYU Qiang，GU Yong
(Department of Food Enginer College of Xuzhou,Xuzhou,Jiangsu 221111)

Study on solidified probiotics yoghurt of juice from kiwi fruitand and jasmine flower,it were inspected that addition of juice from kiwi fruitand and jasmine flower、inoculum concentration、fermentation temperature、fermentation time,that influence on acidness and water retention property.it were inspected that viable count of lactic acid bacteria、FAA contents、total phenolics contents、DPPH·clearance rate、OH·clearance rate、lipid peroxidation suppression ratio、nitrite suppression ratio,Results indicate that best prescription were20%kiwi fruitand juic、15%jasmine flower juic、5%inoculum concentration、40℃fermentation temperature、8h fermentation time.The complex probiotics yo?gurt was berrter of inoxidability and quality.

kiwi fruitand juic;jasmine flower juic;Yogurt;inoxidability;quality

TS252.54

：A

：1001-2230（2017）06-0061-04

2016-09-13

宋慧(1960-)，女，教授，研究方向為儀器加工與機械。