黃芩苷在大鼠肝微粒體Ⅱ相代謝研究

顧紀鋒

【摘要】葡醛酸化代謝是中藥成分體內重要的代謝途徑。黃芩苷為多酚類化合物，具有多個羥基，在大鼠肝微粒體能夠生成葡醛酸化代謝產物，酶動力學符合米氏酶動力學過程，Km和Vmax分別為101μM、1371 pmol/min/mg protein。

【關鍵詞】黃芩苷；Ⅱ相代謝；大鼠微粒體

【中圖分類號】R285 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）07--01

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶（UGT） 是化學物質和中藥成分在生物體內進行第Ⅱ相生物轉化時最重要的一種酶。該酶能催化葡萄糖醛酸與大量的內源性和外源性化學物質進行葡萄糖醛酸結合反應，是藥物在體內重要的解毒途徑。闡明中藥成分的代謝變化對指導臨床合理用藥很有意義。

黃芩（Scutellariae Radix）為唇形科植物黃芩（Scutellariae baicalensis Georgi）的干燥根，具有“清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎”功效，臨床上單用或與其他中藥配伍使用，如我院常用的院內制劑芩茜止血顆粒中主要中藥就為黃芩[1]。黃芩苷是黃芩中最主要的有效黃酮類成分，具有多種藥理作用[2]。已有研究表明，黃芩苷為多酚類化合物，具有多個羥基，易發生Ⅱ相代謝結合反應[3]，其在體內的葡醛酸化是主要的代謝途徑之一。目前關于黃芩苷在大鼠肝微粒體的Ⅱ相代謝變化未見報道。

1.材料

WatersAlliance高效液相色譜系統。美國Finnigan公司LCQ離子阱型質譜儀。黃芩苷購自中國藥品生物制品檢定所；大鼠肝微粒體購自瑞德肝臟（上海）；甲醇購自Sigma公司；超純水由MilliporeMilli-Q純水儀制備；其他試劑為分析純。

2.方法

2.1 黃芩苷葡醛酸化產物測定條件色譜條件

ThermoC18柱（250×4.6mm，5μm），流動相：A（0.1%磷酸）和B（甲醇），等度洗脫：50%B。流速：1ml/min，柱溫：40℃，檢測波長：277nm，進樣量：10μL。

2.2 代謝穩定性研究

將磷酸鹽緩沖液、MgCl2、大鼠肝微粒體、水解酶抑制劑和黃芩苷藥液混合，37℃振蕩水浴中預孵育5min，加入UDPGA啟動反應，37℃振蕩水浴中孵育，在30min時取樣，同時做空白、滅活、及無UDPGA樣品，通過HPLC比較上述幾種樣品找出可能的代謝產物，并通過LCQ離子阱型質譜儀確定分子量。

2.3 黃芩苷葡醛酸化代謝動力學研究

在肝微粒體溫孵液中分別加入不同濃度黃芩苷標準液，使黃芩苷的濃度為1-300μM，經37℃水浴溫孵振蕩30min后，應用GraphPadPrism4.0軟件對代謝產物生成速率與底物濃度進行非線性擬合，計算酶動力學參數米氏常數（Km）及最大反應速度（Vmax）。

3.結果

3.1 代謝穩定性結果

通過比較可以發現孵育30min后與陰性對照相比出現了1個新的色譜峰，經LC-MS/MS分析確定其分子量均為623，比原藥的高176Da，主要二級碎片離子為m/z447（-176Da）。說明黃芩苷在大鼠肝微粒體中能夠發生葡萄糖醛酸化代謝。

3.2 黃芩苷葡醛酸化酶動力學結果

黃芩苷（濃度1-300μM）在大鼠肝微粒體中葡醛酸化代謝產物酶動力學符合米氏酶動力學過程。Km和Vmax分別為101μM、1371pmol/min/mgprotein。

4.討論

葡萄糖醛酸化是黃酮類化合物的重要代謝途徑[4]，其原因是酚類和羧酸類化合物易于葡萄糖結合，而黃酮類化合物為多酚類化合物，因此是Ⅱ相代謝酶的重要底物。黃芩是臨床上常用的中藥，我們的研究結果表明，黃芩苷能夠發生廣泛的Ⅱ相代謝，提示在臨床上避免與Ⅱ相代謝酶抑制劑聯合使用，避免影響藥效。

參考文獻

[1]辛文妤，宋俊科，何國榮，杜冠華.黃芩素和黃芩苷的藥理作用及機制研究進展[J].中國新藥雜志，2013，22（6）：647-659.

[2]李倩楠，葛曉群.黃芩苷的解熱作用及對細胞因子的影響[J].中國中藥雜志，2010，35（8）：1068-1072.

[3]Oliveira EJ，Wateon DG. Metabolism of guercetin and kaempferol by rat hepatocytes and the identification of flavonoid glycosides in human plasma[J]. Xenobiotica，2002，32（4）： 279-287.

[4]Guo MZ，Li XS，Xu HR，et al. Rhein inhibits liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats[J]. Acta Pharmacol Sin，2002，23（8）： 739-744.