黃芩苷在大鼠肝微粒體Ⅱ相代謝研究

顧紀鋒

【摘要】葡醛酸化代謝是中藥成分體內(nèi)重要的代謝途徑。黃芩苷為多酚類化合物，具有多個羥基，在大鼠肝微粒體能夠生成葡醛酸化代謝產(chǎn)物，酶動力學符合米氏酶動力學過程，Km和Vmax分別為101μM、1371 pmol/min/mg protein。

【關鍵詞】黃芩苷；Ⅱ相代謝；大鼠微粒體

【中圖分類號】R285 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2017）07--01

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT） 是化學物質(zhì)和中藥成分在生物體內(nèi)進行第Ⅱ相生物轉(zhuǎn)化時最重要的一種酶。該酶能催化葡萄糖醛酸與大量的內(nèi)源性和外源性化學物質(zhì)進行葡萄糖醛酸結(jié)合反應，是藥物在體內(nèi)重要的解毒途徑。闡明中藥成分的代謝變化對指導臨床合理用藥很有意義。

黃芩（Scutellariae Radix）為唇形科植物黃芩（Scutellariae baicalensis Georgi）的干燥根，具有“清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎”功效，臨床上單用或與其他中藥配伍使用，如我院常用的院內(nèi)制劑芩茜止血顆粒中主要中藥就為黃芩[1]。黃芩苷是黃芩中最主要的有效黃酮類成分，具有多種藥理作用[2]。已有研究表明，黃芩苷為多酚類化合物，具有多個羥基，易發(fā)生Ⅱ相代謝結(jié)合反應[3]，其在體內(nèi)的葡醛酸化是主要的代謝途徑之一。目前關于黃芩苷在大鼠肝微粒體的Ⅱ相代謝變化未見報道。

1.材料

WatersAlliance高效液相色譜系統(tǒng)。美國Finnigan公司LCQ離子阱型質(zhì)譜儀。黃芩苷購自中國藥品生物制品檢定所；大鼠肝微粒體購自瑞德肝臟（上海）；甲醇購自Sigma公司；超純水由MilliporeMilli-Q純水儀制備；其他試劑為分析純。

2.方法

2.1 黃芩苷葡醛酸化產(chǎn)物測定條件色譜條件

ThermoC18柱（250×4.6mm，5μm），流動相：A（0.1%磷酸）和B（甲醇），等度洗脫：50%B。流速：1ml/min，柱溫：40℃，檢測波長：277nm，進樣量：10μL。

2.2 代謝穩(wěn)定性研究

將磷酸鹽緩沖液、MgCl2、大鼠肝微粒體、水解酶抑制劑和黃芩苷藥液混合，37℃振蕩水浴中預孵育5min，加入UDPGA啟動反應，37℃振蕩水浴中孵育，在30min時取樣，同時做空白、滅活、及無UDPGA樣品，通過HPLC比較上述幾種樣品找出可能的代謝產(chǎn)物，并通過LCQ離子阱型質(zhì)譜儀確定分子量。

2.3 黃芩苷葡醛酸化代謝動力學研究

在肝微粒體溫孵液中分別加入不同濃度黃芩苷標準液，使黃芩苷的濃度為1-300μM，經(jīng)37℃水浴溫孵振蕩30min后，應用GraphPadPrism4.0軟件對代謝產(chǎn)物生成速率與底物濃度進行非線性擬合，計算酶動力學參數(shù)米氏常數(shù)（Km）及最大反應速度（Vmax）。

3.結(jié)果

3.1 代謝穩(wěn)定性結(jié)果

通過比較可以發(fā)現(xiàn)孵育30min后與陰性對照相比出現(xiàn)了1個新的色譜峰，經(jīng)LC-MS/MS分析確定其分子量均為623，比原藥的高176Da，主要二級碎片離子為m/z447（-176Da）。說明黃芩苷在大鼠肝微粒體中能夠發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝。

3.2 黃芩苷葡醛酸化酶動力學結(jié)果

黃芩苷（濃度1-300μM）在大鼠肝微粒體中葡醛酸化代謝產(chǎn)物酶動力學符合米氏酶動力學過程。Km和Vmax分別為101μM、1371pmol/min/mgprotein。

4.討論

葡萄糖醛酸化是黃酮類化合物的重要代謝途徑[4]，其原因是酚類和羧酸類化合物易于葡萄糖結(jié)合，而黃酮類化合物為多酚類化合物，因此是Ⅱ相代謝酶的重要底物。黃芩是臨床上常用的中藥，我們的研究結(jié)果表明，黃芩苷能夠發(fā)生廣泛的Ⅱ相代謝，提示在臨床上避免與Ⅱ相代謝酶抑制劑聯(lián)合使用，避免影響藥效。

參考文獻

[1]辛文妤，宋俊科，何國榮，杜冠華.黃芩素和黃芩苷的藥理作用及機制研究進展[J].中國新藥雜志，2013，22（6）：647-659.

[2]李倩楠，葛曉群.黃芩苷的解熱作用及對細胞因子的影響[J].中國中藥雜志，2010，35（8）：1068-1072.

[3]Oliveira EJ，Wateon DG. Metabolism of guercetin and kaempferol by rat hepatocytes and the identification of flavonoid glycosides in human plasma[J]. Xenobiotica，2002，32（4）： 279-287.

[4]Guo MZ，Li XS，Xu HR，et al. Rhein inhibits liver fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats[J]. Acta Pharmacol Sin，2002，23（8）： 739-744.