血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中的表達及臨床意義

徐 健，劉金龍，丁麗萍，江 嬌

（濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

·基礎研究·

血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中的表達及臨床意義

徐 健，劉金龍，丁麗萍，江 嬌

（濰坊市婦幼保健院，山東 濰坊 261011）

目的 探討血清miRNA-499-5p在缺血性腦卒中患者中的臨床意義。方法 收集缺血性腦卒中患者60例，選取同期在醫院健康體檢者40例為對照組。采用實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術檢測血清miRNA-499-5p的表達。結果 腦卒中患者血清miRNA-499-5p表達與對照組比較表達上調，差異有統計學意義（P＜0.01）。結論 缺血性腦卒中患者血清中miRNA-499-5p表達顯著上升，可預測缺血性腦卒中疾病的發生及判斷其危險程度，估計病情的發展狀況，是其可能的生物學標記物之一。

缺血性腦卒中；miRNA-499-5p；生物學標記物

缺血性腦卒中是一種急性起病的局灶性腦供血障礙性疾病。對缺血性腦卒中的病因和發病機制尚未完全闡明。文獻表明，microRNA通過堿基互補配對方式識別靶基因，調控多種基因的表達。腦組織中的miRNA的表達和分布與腦卒中有著密切的聯系[1]。許多miRNA與腦組織的發育、分化、生理功能及病變等密切相關，與靶基因共同參與炎癥、細胞凋亡、神經血管再生[2]。miRNA-499-5p在大腦細胞中都有表達。本研究利用熒光定量PCR的方法檢測缺血性腦卒中患者血清中miRNA-499-5p的表達，探討其在缺血性腦卒中的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

搜集2016年4月～2017年4月濰坊市人民醫院接收的缺血性腦卒中患者60例，并收集同期在濰坊人民醫院進行健康體檢患者40例。實驗分為缺血性腦卒中組和和健康體檢組。缺血性腦卒中組和和健康體檢組一般資料相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 血液樣本收集

收集缺血性腦卒中組和和健康體檢組靜脈血，3000 rpm/min，離心10 min，取上清凍存于-80℃，準備后續RT-PCR檢測，其操作方法嚴格按照說明書進行操作。

1.2.2 熒光定量PCR檢測

PCR反應體系如下所示：cDNA1ul；2×SYBR Green Mix 9 ul；上游primer0.5 ul；下游primer（10uM）0.5ul；水9 ul；總體積20 ul。PCR擴增反應參數：預變性95℃、3 min，94℃、30 s，60℃退火30 s，72℃延伸15 s，35個循環。以cel-miR-39為內參，上游引物5’CTC CAGCTG TCA AGA G CAA TAA CGA A3’，下游引物5’TCCAGT GCA GGG TCC GAG GT3’。

1.3 統計學方法

2 結 果

2.1 臨床資料結果

腦卒中組患者與健康對照組在性別、年齡方面差異無統計學意義。而在高血壓史、糖尿病史方面明顯高于健康對照組（P＜0.05）。見表1。

表1 缺血性腦卒中組和健康對照組一般資料比較

2.2 血清miR-499-5p表達檢測

運用定量PCR方法檢測腦卒中組和健康對照組血清中miR-499-5p的表達水平，結果示腦卒中組血清miR-499-5p相對表達量明顯高于健康對照組，差異有顯著性（P＜0.01），見表2。

表2 缺血性腦卒中組與健康對照組血清miR-499-5p表達水平

3 討 論

本研究通過研究發現卒中性患者血清miR-499-5p表達水平顯著升高，疾病組與健康組在性別、年齡方面無統計學差異。而疾病組在高血壓史、糖尿病史方面明顯高于健康對照組[3]（P＜0.05）。許多研究表明miRNA參與了神經系統的發生、發育、病理損傷和修復過程[4]。本研究結果提示，miR-499-5p在腦卒中組表達顯著上調，其可能作為腦卒中的生物學標志物之一被更廣泛用于臨床診斷和治療腦卒中，具體的作用機制目前還了解甚少，需要進一步研究。

[1] 王 麗,王媛媛,劉海莉,等.MicroRNA與神經系統發育的研究進展[J].中南大學學報醫學版,2013,38(3):323-328.

[2] 鈕 超,孫麗華.microRNA在高血壓誘發腦卒中疾病發展中的作用[J].中國臨床藥理學雜志,2013,29(7):551-553.

[3] 保玉蓮,朱榆紅.MicroRNA與缺血性腦卒中關系的研究進展[J].中國實用神經疾病雜志,2014,17(4):94-97.

本文編輯：吳 衛

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ISSN.2095-8242.2017.22.4171.02