乳酸菌用于養殖水體改良需要注意的幾個問題

■ 耿英慧 （上海保碩生物科技有限公司）

乳酸菌用于養殖水體改良需要注意的幾個問題

■ 耿英慧 （上海保碩生物科技有限公司）

近年來，隨著光合細菌和芽孢桿菌在養殖水體改良上的泛濫應用，乳酸菌作為一個新的品種使用日漸增多，但實際上不少養殖戶對如何使用好兼性厭氧的乳酸菌還有很多疑問。本文在諸多研究成果的基礎上，總結了乳酸菌用于處理養殖水體的依據和應用中需要注意的幾個問題，為用戶提供參考。

外用于養殖水體的乳酸菌制劑主要通過以下3個方面對水環境和養殖動物產生作用。

1 代謝產物效應

乳酸菌可以發酵碳水化合物，產生酸性物質，主要代謝產物及中間產物包括乳酸、乙酸等有機酸（李鐵等，2002）。乳酸可以降低水環境的pH值，另外還可以通過直接和亞硝酸鹽的作用，間接為水體微生物（反硝化細菌）提供能量促進反硝化作用，來降低水中亞硝酸鹽（宋蓉等，2012）。

乳酸菌代謝還可產生其它活性物質包括乳桿菌素，乳酸鏈球肽，雙乙酰，過氧化氫等可以抑制腐敗菌和病原菌如金黃色葡萄球菌，產氣莢膜梭菌，海洋弧菌，沙門氏菌等。

2 在水體中活菌效應

乳酸菌進入水體后，在適宜的營養條件下，可代謝水中碳水化物，同時對氨氮亞硝酸鹽，藻密度有一定的作用。李卓佳等在實驗室條件下發現乳酸桿菌能有效的降低養殖廢水和飼料中的亞硝酸鹽、硝酸鹽，磷酸鹽，而使氨氮濃度提升。

3 進入消化道和增強免疫效應

據試驗研究養殖動物體表、消化道微生態與水環境微生態有著密切關系，張慶等通過池塘潑灑芽孢桿菌為主導菌的復合微生物制劑，能在斑節對蝦的胃與腸中檢測到芽孢桿菌，說明芽孢桿菌可以隨餌料進入對蝦消化道，并在消化道中存活。那么潑灑進入水中的乳酸菌，也會進入養殖動物消化道，參與維持腸道菌群的微生態平衡，從而改善胃腸道功能。

乳酸菌在體外也可以增強養殖動物免疫力，呼吸爆發活力是魚類先天免疫防御中的一個重要指標，如高溫滅菌德式乳酸桿菌、乳酸球菌在體外環境下仍可以提高金頭鯛（Sparus aurata）頭腎細胞的呼吸爆發活力（salinas等，2006）。溶菌酶活性是魚類先天免疫系統的重要殺菌酶，Taoka等2006研究表明，乳酸菌還可以提高羅非魚皮膚黏液溶菌酶的水平，并且加入水中比口服效果更顯著。

4 乳酸菌外用的實際應用中應注意的問題

通過以上介紹，可以看到乳酸菌外用于養殖水體確實可以改善養殖水環境和促進養殖動物健康，在實際應用中有哪些地方需要引起特別注意，從而更好的發揮乳酸菌的功能呢？以下5個問題希望與大家共同探討。

4.1 水中溶氧對乳酸菌的影響

我們知道在工業大生產上發酵乳酸菌一般是定期攪拌不通氧的靜置方式來完成的，養殖戶一般也是參照這個流程進行乳酸菌的簡單培養，因此，很多養殖戶理所當然的認為乳酸菌最好在池塘溶解氧最低的時候使用效果最好，所以，很多養殖戶一般會選擇在傍晚使用。那么，在養殖水體增氧情況下會對乳酸菌效果產生影響嗎？周海平等采用MARS培養基，一株乳酸桿菌LH在溶氧高或低的條件下都能很好生長；作者也以3%滅菌紅糖水為培養基，250mL三角燒瓶裝液量50mL、100mL、150mL，接種0.4%100億/g的糞腸球菌，分別靜置和180rpm搖床培養12h，未見兩種培養方式培養液pH值的顯著差異。通過以上兩個試驗，我們發現至少乳酸桿菌和乳酸球菌，可以在分子氧存在的情況下進行厭氧發酵，氧氣并未對其生長和生存產生毒副作用。

因此我們在使用乳酸菌時，更多的關注池塘水體是否滿足乳酸菌的營養需求，不必刻意選擇使用時機。

4.2 關注乳酸菌易衰亡特性

相比芽孢的強抗逆性，不論液體還是粉劑狀態的乳酸菌制劑，都存在一個活菌易于衰亡的問題。儲存溫度、氧化作用、光照、滲透壓、營養成份以及保護劑的種類等都對活菌的穩定性產生重要影響。魏宏宇等研究了酸奶中乳酸菌數消長規律，室溫20℃下，初始菌數17.5億個/mL，放置1個月僅剩下0.18億個/mL。袁玲（2010）研究發現格氏乳桿菌制劑和肉雞全價料混合均勻后，15℃儲存30d，活菌數量級沒有變化，60d后存活率為8.05%；30℃儲存7d后菌數下降一個數量級，60d后存活率僅為0.32%。微生物衰亡是一個普遍的現象，但是，只要存在一定數量的菌種，當給予適當的營養條件，菌量可以快速增殖。

因此，對我們的養殖用戶而言，使用乳酸菌前最好進行簡單的擴大培養，使菌數增殖到一定數量，可以增強使用效果。同時要根據廠家提供的參數進行擴培或活化，防止雜菌感染對養殖動物造成不必要的危害。

4.3 關注池塘水體的C/N比

在養殖中后期，高蛋白飼料的使用必然引起水體氮的大量積累，導致C/N比失衡，結果是菌相和藻相紊亂，給養殖水體污染控制和養殖動物健康維持增加了難度。碳元素和氮元素是細菌生長所必需的基本元素，二者的水平直接決定了細菌生長和繁殖能力。高磊等研究發現較高的C/Nw比（≥10）不僅促進芽孢桿菌和乳酸菌的快速生長，而且可以有效抑制弧菌的繁殖（弧菌適合較低的C/N比）。

因此，對我們的養殖用戶而言，在使用乳酸菌時，要根據水體的營養狀況，適當添加碳源、調節水體的C/N比，將碳源添加技術和乳酸菌使用技術結合起來，以促進有益菌的繁殖，優化養殖水體菌相，平衡藻相。

4.4 關注乳酸菌的用量

作為海水養殖水體的土著菌，弧菌等異養細菌生長優勢明顯，在生態系統中天然占有重要的地位。外源的乳酸菌要對整個微生物群體形成的動態體系產生影響，必須要達到一定的數量。陳營等通過飼料添加乳酸菌，監測隨糞便排入水體的乳酸菌數量，實驗初期水體菌量在103cfu/mL，在30d后菌量維持在104～105cfu/mL，對弧菌有一定的控制作用，但不是很明顯；周海平等采用乳酸桿菌LH與哈維氏弧菌在自配滅菌飼料水溶液中共培養的方法，采用103cells/mL接種量即可取得較好的抑菌效果；王昊等研究結果也表明不同生物量的乳酸桿菌在養殖水體中的變化存在差異，水體菌量103cells/mL，3d降低到0，菌量106cells/mL7d降低到0，盡管如此，乳酸桿菌對3種微藻（微綠球藻，隱藻，顫藻）的抑制或促進作用仍很明顯。

因此，對我們的養殖用戶而言，乳酸菌制劑要對水體弧菌和藻相產生影響，含量至少要達到103cells/mL，若產品菌數在10億cfu/mL，要到達水體中含有103cells/mL，使用濃度為1g/m3（忽略增殖因素），并且至少要3d使用1次，若考慮到產品在運輸儲存過程的衰亡因素，還需要增加用量。

4.5 關注乳酸菌使用配伍問題

乳酸菌生長多以單糖和雙糖等碳水化合物為基質，還輔助一些維生素、氨基酸等。養殖水體有機污染包括殘餌，糞便，藻類以及動植物殘骸，主要成份多為大分子結構的蛋白質，纖維素，淀粉等，這些物質對乳酸菌來說有點力不從心了。李卓佳等在實驗室條件下發現乳酸桿菌能有效的降低養殖廢水和飼料中的亞硝酸鹽、硝酸鹽，磷酸鹽，而使氨氮濃度提升，對COD沒有明顯作用。

所以對熱衷于乳酸菌的養殖戶，要從微生物對污染物降解的特性出發，合理搭配有益微生物的種類，讓污染物的分解和物質循環得以順暢進行，最終使有機污染礦化為無機狀態。（參考文獻略）