S100A8在口腔鱗癌中的水平檢測及其臨床意義

程晴潔，馬 洪

（1.貴州醫科大學，貴州 貴陽 550004；2.貴州醫科大學附屬口腔醫院口腔頜面外科，貴州 貴

陽 550004）

S100A8在口腔鱗癌中的水平檢測及其臨床意義

程晴潔1，馬 洪2

（1.貴州醫科大學，貴州 貴陽 550004；2.貴州醫科大學附屬口腔醫院口腔頜面外科，貴州 貴

陽 550004）

采用q-PCR方法檢測S100A8mRNA在正常口腔組織40例及口腔鱗癌組織40例中的水平。結果顯示40例口腔鱗癌組織中S100A8mRNA與正常口腔組織比較表達明顯增高，且表達水平與口腔鱗癌組織病理分級密切相關，差異有統計學意義（P＜0.05）。提示S100A8可能參與OSCC的發生與發展。

S100A8；mRNA；口腔鱗癌；q-PCR

近年來在口腔鱗狀細胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）發病機制的研究方面，隨著實驗技術的進步，從基因（DNA）和基因轉錄（mRNA）水平開始進行了大量的研究。現已有研究報道S100A8在眾多惡性腫瘤中表達升高。同時課題組前期研究發現OSCC患者外周血S100A8蛋白與正常隨機對照組相較呈高表達[1-2]。本文旨在通過使用實時熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，q-PCR）檢測OSCC與正常口腔黏膜組織中S100A8mRNA表達水平，分析S100A8mRNA表達與OSCC臨床病理特征的關系，探討S100A8在口腔鱗癌發生發展過程中的作用及意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年～2016年收治的外科手術切除的后經病理確診的口腔鱗癌組織40例，其中高分化25例，中低分化15例。術前均未接受其他治療。對照組口腔正常組織40例，均取自外傷、唇腭裂等手術時去除的口腔組織。試劑：Dynabeads mRNA DIRECTTMKit試劑盒（Dynal公司）；逆轉錄試劑盒（德國 Roche公司）；LightCycler?480 SYBR Green I Master（德國 Roche公司）

1.2 方法

q-PCR檢測組織中S100A8的mRNA表達水平按mRNA提取試劑盒說明書，提取組織中mRNA約13 μL。按逆轉錄合成試劑盒說明書配置7.5 μL cDNA綜合體系，加入提取的13 μL mRNA經熱循環逆轉錄得到雙鏈cDNA模板20 μL。SYBR Green染料5.0 μL與6.0 μL cDNA 模板中加上下游引物（引物由上海生工生物公司設計合成，堿基序列見表1）混合物4.0 μL進行實時熒光定量PCR反應。RT-PCR反應條件：95℃ 10min，95℃ 10s，65℃ 6s，72℃6s，76℃，1s；重復循環2～5步7次，每循環一次第3步降溫0.6℃；95℃ 10s，60℃ 6s，72℃ 6s，76℃，1s；重復循環6～9步54次；95℃ 10s，65℃ 10s。使用2-ΔΔCT法對數據進行

分析。見表1。

表1 q-PCR引物的序列

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 S100A8mRNA在正常口腔粘膜組織和OSCC組織中表達水平比較

q-PCR結果顯示：S100A8在OSCC組、對照組中均表達。與對照組作比較，S100A8 mRNA在OSCC組表達增高，差異顯著，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 S100A8mRNA在OSCC、正常組織中的表達（±s）

表2 S100A8mRNA在OSCC、正常組織中的表達（±s）

組別 n S100A8/β-actin口腔鱗癌 40 1.24±0.16正常口腔黏膜 40 1.58±0.04 F 53.96 P 0.000

2.2 S100A8mRNA的表達與OSCC臨床病理特征相關性分析

OSCC組中S100A8 mRNA表達與患者的年齡、性別無關，但與病理分化程度顯著相關。且發現高分化組表達量明顯低于中低分化組。見表3。

表3 S100A8mRNA的表達與OSCC臨床病理特征的關系（±s）

表3 S100A8mRNA的表達與OSCC臨床病理特征的關系（±s）

臨床病理特征 例數 log T/N P值年齡 ≥60歲 13 0.61±0.41 ＞0.05＜60歲 27 0.54±0.40性別 男 29 0.63±0.41 ＞0.05女11 0.40±0.35病理分級 高分化 25 0.26±0.41 ＜0.01中低分化 15 1.07±0.11

3 討 論

據國內外的相關文獻報道，頭頸部的鱗狀細胞癌的病例數每年新增約50多萬例。目前經治療后，患者的5年生存率僅為60%。因此迫切需要尋找OSCC腫瘤分子標志物，以便為早期診斷惡性腫瘤提供條件，從而提高患者的生存率及愈后。

S100A8蛋白在腫瘤中的作用已經在諸多腫瘤中得到了證實，并且可以充當在某些類型的癌癥的預后標志物[3-4]。研究發現在癌細胞中，S100A8通過調節細胞分化和粘附細胞外基質，以抑制細胞周期進展、增長和遷徙侵襲[5-6]。Mie Ichikawa[7]的研究指出指出糖基化終末產物受體和S100A8在腫瘤細胞中協同表達升高并且共同激活腫瘤下流信號通路，進而導致細胞增殖。這與課題組研究結果一致。S100A8是與OSCC病理分級極顯著相關的上調基因，提示它可能為OSCC腫瘤分子標志物之一，并在OSCC發生發展過程中具有潛在的生物學意義。

綜上所述，S100A8表達水平可能對口腔鱗癌有預警及診斷的作用，并可獲得較高的診斷效能，有望成為臨床上篩選及診斷口腔鱗癌的腫瘤分子標志物。

[1] 馬 洪,王金生,潘 衛,等.比較蛋白組學在口腔鱗癌患者及健康人血清的初步研究[J].實用口腔醫學雜志,2012,28(1):98-101.

[2] 馬 洪,趙天江,王金生,等.口腔鱗癌腫瘤標記物血清蛋白組學的初步研究[J].重慶醫學,2012,41(8):766-768.

[3] Becker A, Gro?e Hokamp N,Zenker S, et al. Optical in vivo imaging of the alarmin S100A9 in tumor lesions allows for estimation of the individual malignant potential by evaluation of tumor-host cell interaction[J].J Nucl Med,2015,56(3):450-456.

[4] Tidehag V,Hammarsten P,Egevad L,et al.High density of S100A9 positive infammatory cells in prostate cancer stroma is associated with poor outcome[J].Eur J Cancer,2014,50(10):1829-1835.

[5] Cormier K,Harquail J,Ouellette RJ,et al.Intracellular expression of inflammatory proteins S100A8 and S100A9 leads to epithelial-mesenchymal transition and attenuated aggressivity of breast cancer cells[J].Anti-cancer agents in medicinal chemistry,2014,14(1):35-45.

[6] Choi JH,Shin NR,Moon HJ, et al.Identification of S100A8 and S100A9 as negative regulators for lymph node metastasis of gastric adenocarcinoma[J].Histology and histopatholo gy,2012,27(11):1439–1448.

[7] Mie Ichikawa,Roy Williams,Ling Wang,et al.S100A8/A9 activate key genes and pathways in colon tumor progression[J].Mol Cancer Res,2011,9(2):133–148.

本文編輯：趙小龍

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ISSN.2095-8242.2017.23.4468.02