生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬生理指標及血清C-反應蛋白、NO水平的影響＊

甘雨，包玉龍，張宏，王菲，范英蘭，喬敏，劉小虎，夏素霞，李國信

生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬生理指標及血清C-反應蛋白、NO水平的影響＊

甘雨，包玉龍，張宏，王菲，范英蘭，喬敏，劉小虎，夏素霞，李國信＊＊

（遼寧省中醫藥研究院沈陽110034）

目的：探討生脈注射液對心肌缺血Beagle犬血壓、心率、心電圖及血清C-反應蛋白、NO水平的影響。方法：30只Beagle犬隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、生脈注射液小劑量組(0.80 mL·kg-1）、生脈注射液大劑量組（3.20 mL·kg-1）和單硝酸異山梨酯組（0.07 mL·kg-1）。采用皮下注射鹽酸異丙腎上腺素制備心肌缺血模型，同時給予藥物治療。記錄給藥后1、6、12、24 h，犬血壓、心率和心電圖變化，并檢測血清C-反應蛋白和NO含量。結果：與空白對照組比較，模型組Beagle犬平均動脈壓（MBP）明顯降低（P＜0.01），心率（HR）明顯加快（P＜0.01或P＜0.05），心電圖ΔST值明顯增大（P＜0.01），生脈注射液能改善上述癥狀，但作用趨緩。生脈注射液對血清C-反應蛋白含量降低和NO含量升高有明顯的對抗作用，與模型組比較，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。結論：生脈注射液能改善心肌缺血Beagle犬生理指標，其機制可能與調節C-反應蛋白代謝，抑制NO分泌有關。

生脈注射液心肌缺血生理指標C-反應蛋白一氧化氮

生脈注射液源自中國古代經典名方“生脈散”，是一種由紅參、麥冬和五味子經現代工藝制成的純中藥制劑，具有穩定的強心、升壓效應，臨床廣泛用于心血管疾病的治療，尤其是對心肌缺血誘發的冠心病、心律失常、心力衰竭、體克等疾病療效顯著，但對生脈注射液改善心肌缺血動物生理指標研究較少，且存在一定爭議[1-2]。另外，有關生脈注射液抗心肌缺血作用機制研究更是鮮有報道。為了更好地發揮名方的治療作用，本研究采用Beagle犬慢性心肌缺血模型，以臨床上治療心肌缺血療效得到普遍認可的單硝酸異山梨酯作為陽性對照藥，研究生脈注射液對心肌缺血動物生理指標的影響，并初步探討其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康成年Beagle犬30只，雌雄各半，月齡12～24月，體質量（10.0±2.0）kg，自北京沙河通利試驗動物養殖場[許可證號：SCXK（京）2013-0007]購入，經遼寧中醫藥大學附屬第二醫院實驗動物中心[許可證號：SCXK（遼）2012-0010]適應性飼養1周后使用。

1.2 藥品與試劑

生脈注射液：由四川省宜賓五糧液集團宜賓制藥有限責任公司提供，規格：20 mL/支，批號：13060112；單硝酸異山梨酯注射液（欣康）：由魯南貝特制藥有限公司提供，規格：5 mL∶25 mg/支，批號：1412100610；鹽酸異丙腎上腺素注射液：由上海禾豐制藥有限公司提供，規格：2 mL∶1 mg/支，批號：131001；C-反應蛋白酶聯免疫試劑盒由江蘇凱基生物技術股份有限公司提供，批號：201508；NO酶聯免疫試劑盒由江蘇凱基生物技術股份有限公司提供，批號：201507。

1.3 實驗儀器

BP-2010E型智能無創血壓計（北京軟隆科技有限責任公司）；SPECTRA MAX 190型酶標儀（美國Molecular Devices公司）；SP2006心電圖分析系統（北京軟隆科技有限責任公司）；SIGMA 3-18k型低溫離心機（德國SIGMA公司）；SHA-B型37度孵育箱（金壇市精達儀器制造廠）。

1.4 方法

1.4.1 分組與模型制備

取健康成年Beagle犬30只，按體質量隨機分為5組，每組6只，即空白對照組、模型對照組、生脈注射液小劑量組（0.80 mL·kg-1）、生脈注射液大劑量組（3.20 mL·kg-1）和單硝酸異山梨酯組（0.07 mL·kg-1）。除空白對照組外，其余各組Beagle犬均皮下多點注射鹽酸異丙腎上腺素1.1 mg·kg-1，共注射3次，每次間隔12 h?？瞻讓φ战M皮下多點注射等容量生理鹽水。

1.4.2 給藥

于末次注射鹽酸異丙腎上腺素后，開始股靜脈滴注各治療藥物，生脈注射液小劑量組靜滴生脈注射液0.80 mL·kg-1，生脈注射液大劑量組靜滴生脈注射液3.20 mL·kg-1，單硝酸異山梨酯組靜滴單硝酸異山梨酯0.07 mL·kg-1。各治療藥物在使用前均用5%葡萄糖注射液稀釋，給藥體積為10 mL·kg-1，空白對照組和模型對照組靜滴等容量的5%葡萄糖注射液，靜滴時間均控制在90 min左右。

1.4.3 檢測指標

于造模前及造模后1、6、12、24 h，采集Beagle犬血壓、心率和Ⅱ導聯心電圖，以給藥前后ST段變化（ΔST）情況作為心肌缺血嚴重程度考察指標，每個時間點選取基線平穩的連續3個波形取平均值，并于造模后1、6、12、24 h采集靜脈血4 mL，3 500 rpm離心10 min，分離血清，置于-70℃冰箱保存待測。C-反應蛋白和NO均采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定，嚴格按試劑盒說明書操作。

1.5 統計學處理

心電圖數據采用softron ECG processor 2006軟件進行分析，數據統計采用DAS 2.1.1軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（xˉ±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血壓變化

由表1可知，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，平均動脈壓（MBP）明顯降低，模型組各時間點與空白對照組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。靜滴生脈注射液后，血壓逐漸恢復，至24 h時，小劑量組升高35.58 mmHg，大劑量組升高31.16 mmHg，均高于模型組自然恢復的19.00 mmHg，但無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 心率變化

由表2可知，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，心率（HR）明顯加快，在模型組1 h、6 h時與空白對照組進行比較，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05），至12 h時心率基本恢復正常。生脈注射液大劑量組心率變化趨于平穩，在1 h時間點的心率明顯低于模型組（P＜0.05）。

2.3 心電圖改變

由表3、圖1可知，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，Ⅱ導聯心電圖ST段明顯下移，T波出現倒置，模型組ΔST值在1、6、12 h與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），表明動物出現心肌缺血損傷。靜滴生脈注射液后，ΔST逐漸減小，但與模型組比較無統計學意義（P＞0.05）。

表1 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬MBP的影響（mmHg，xˉ±s，n=6）

表2 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬HR的影響（bpm，xˉ±s，n=6）

表3 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬心電ΔST的影響（mV，xˉ±s，n=6）

2.4 血清C-反應蛋白含量變化

由表4可知，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，血清C-反應蛋白含量明顯降低，模型組各時間點與空白對照組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。靜滴生脈注射液后，血清C-反應蛋白含量明顯升高，各劑量不同時間點均明顯高于模型組（P＜0.01或P＜0.05）。

2.5 血清NO含量變化

由表5可知，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，血清NO含量明顯升高，模型組在1 h、24 h與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。靜滴生脈注射液后，血清NO含量明顯降低，各劑量不同時間點均明顯低于模型組（P＜0.01）。

3 討論

圖1 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬心電圖的影響

心肌缺血是冠狀動脈血液供應減少或中斷，導致心肌細胞缺氧，能量代謝障礙，從而無法正常維持心臟功能的一種病理狀態[3]。長期的心肌缺血可誘發心絞痛或心肌梗塞，甚至發生毫無先兆的猝死，預后十分危急。為了將心肌缺血的治療提高到一個新水平，研發出更多新藥，揭示更多藥物的作用機制，動物實驗必不可少，因此制備穩定可靠，與人類心肌缺血病因病機和臨床癥狀相似的動物模型至關重要[4]。以往多采用開胸結扎動物冠狀動脈分支造成心肌缺血[5,6]，但由于開胸破壞了胸腔的完整性，對動物創傷較大，同時動物需要麻醉，監測指標都是在麻醉狀態下進行，所得數據缺乏臨床相似性。因此，制備清醒、無創，能模擬人類心肌缺血發生發展過程的動物模型有重要意義。本研究采用異丙腎上腺素小劑量多次皮下注射制備Beagle犬慢性心肌缺血模型，并在清醒、無創條件下監測生理指標，避免了動物應激對其生理參數造成的影響，為藥物研究提供了更真實、可靠數據。

表4 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬血清C-反應蛋白含量的影響（mg·L-1，xˉ±s，n=6）

表5 生脈注射液對實驗性心肌缺血Beagle犬血清NO含量的影響（μmol·L-1，xˉ±s，n=6）

生脈注射液是中醫“益氣復脈”古方—生脈散經現代工藝制成的純中藥制劑，臨床廣泛用于冠心病、休克等疾病的治療[7]。但有關該藥物的臨床藥理和治療機制研究還很匱乏，并存在一定爭議。有研究認為生脈注射液靜注對麻醉犬正常血壓有明顯的降壓作用，對心率無明顯影響[8]，這與其“升壓”、“強心”效應相駁。本研究采用慢性心肌缺血模型，造模后Beagle犬MBP明顯降低（P＜0.01），HR明顯加快（P＜0.05）。靜滴生脈注射液后，血壓逐漸恢復，至24 h時，小劑量組升高35.58 mmHg，大劑量組升高31.16 mmHg，均高于模型組自然恢復的19.00 mmHg；心率變化更趨于平穩，在1 h時間點的心率明顯低于模型組（P＜0.05）。提示生脈注射液對心肌缺血導致的低血壓和心率加快有抑制作用，可能對危重患者的救治有益。

心電圖ST段改變是心肌缺血損傷程度和范圍的重要評價指標[9,10]。本研究中，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，Ⅱ導聯心電圖ST段明顯下移，T波出現倒置，模型組ΔST值在1 h、6 h、12 h與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01），表明動物出現心肌缺血損傷。靜滴生脈注射液后，ΔST逐漸減小，但與模型組比較無統計學意義（P＞0.05），這可能與單次給藥，中藥療效緩慢有關。

C-反應蛋白是一種反映炎癥、損傷的非抗體性標志物，與動脈粥樣硬化斑塊破裂和促發局部血栓形成密切相關，可以作為心血管不良事件的獨立預測因子[11,12]。本研究中，動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，血清C-反應蛋白含量明顯降低，模型組各時間點與空白對照組比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）。靜滴生脈注射液后，血清C-反應蛋白含量明顯升高，各劑量不同時間點均明顯高于模型組（P＜0.01或P＜0.05）。提示生脈注射液可能具有抗心肌缺血引起的炎癥反應的作用。

NO是一種內皮細胞分泌的超強舒血管性活性物質，其恒定釋放對保持血管舒張狀態，抑制血小板聚集，調節冠脈張力等有重要作用[13-15]。本研究觀察到動物注射鹽酸異丙腎上腺素造模后，血清NO含量明顯升高，將1 h、24 h時模型組與空白對照組進行比較，差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05），這可能是導致動物血壓明顯下降的原因，也表明生脈注射液可能是通過抑制NO分泌，調節血管張力，進而起到升壓作用。

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Effects of Shengmai Injection on Physiological Indices,C-reactive Protein and NO Levels in Experimental Beagle Dogs with Myocardial Ischemia

Gan Yu,Bao Yulong,Zhang Hong,Wang Fei,Fan Yinglan,Qiao Min,Liu Xiaohu,Xia Suxia,Li Guoxin
(Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110034,China)

This study was aimed to explore the effects of Shengmai(SM)injection on blood pressure(BP),heart rate(HR), electrocardiogram(ECG),and serum C-reactive protein(CRP)and NO levelin Beagle dogs with myocardial ischemia (MI).A total of 30 Beagle dogs were divided into 5 groups,which were the blank control group,model control group,SM injection low-dose group(0.80 mL·kg-1),SM injection high-dose group(3.20 mL·kg-1)and isosorbidemononitrate group (0.07 mL·kg-1).The MI model was established by the subcutaneous injection of isoprenaline hydrochloride,and the drug treatments were given at the same time.At 1 h,6 h,12 h,24 h after administration,changes of BP,HR and ECG were recorded;serum CRP and NO content were detected.The results showed that compared with the blank control group,the mean arterial pressure(MBP)was significantly decreased(P＜0.01),HR was significantly increased(P＜0.01,or P＜0.05), the ECGΔST value was significantly increased(P＜0.01)in the model group.SM injection could improve symptoms mentioned above,but the effectswereslow.SM injection had a significant antagonistic effect on the decreasing of CRPcontent and the increasing of NO content,compared with the model group.The difference was statistically significant(P＜0.01,or P＜0.05).It was concluded that SM injection could improve the physiological indices of Beagle dogs with MI, which might be related to the regulation of CRP and the inhibition of NO secretion.

Shengmai injection,myocardial ischemia,physiological index,CRP,NO

10.11842/wst.2017.05.000

R965.1

A

（責任編輯：張娜娜，責任譯審：王晶）

2017-05-12

修回日期：2017-06-30

＊科學技術部國家“十二五”中藥新藥臨床評價研究技術平臺建設（2012ZX09303-017-001）：中藥新藥Ⅰ期臨床關鍵技術和方法的研究，負責人：李國信。

＊＊通訊作者：李國信，主任醫師，博士生導師，主要研究方向：臨床藥理學。