豬圓環病毒3型的鑒定與遺傳特征分析

（摘譯自：X. Ku等， Transbound Emerg Dis.2017，64：703-708.）

咸 文，梁海英，曾智勇*（摘譯）

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環病毒3型的鑒定與遺傳特征分析

（摘譯自：X. Ku等， Transbound Emerg Dis.2017，64：703-708.）

咸 文，梁海英，曾智勇*（摘譯）

（貴州大學動物科學學院，貴州 貴陽 550025）

薦語：近兩年來，豬圓環病毒3型（PCV3）在國內多個學術活動中被多次提及，然而關于PCV3的文獻報道卻十分有限。PCV3是在具有豬皮炎腎病綜合征和繁殖障礙的臨床樣品中鑒定出的一種新型圓環病毒。為幫助養豬從業者更好地了解PCV3的相關信息，特對下面這篇PCV3相關研究文獻進行摘譯以饗讀者，并期待能有越來越多的相關研究來盡快揭示PCV3流行病學信息及遺傳特征。

曾智勇，男，1978年9月生，四川威遠人，博士，貴州大學教授、碩士研究生導師、貴州大學學術骨干，貴州省科技特派員，黑龍江畜牧獸醫雜志編委。主要從事動物傳染病及病原分子生物學相關研究，以規?；i場主要病毒性疫病為基礎，開展新型疫苗和病原快速檢測方法及試劑盒的研發。同時，長期面向豬場開展豬病毒性疫病的抗體監測和病原的快速檢測以及規?；i場疾病防控指導，為豬場提供技術支持。

主持國家自然科學基金項目1項，省廳級項目3項；參研貴州省農業科技攻關項目5項，其他各類省廳(局)級項目13項；獲“貴州省科學技術進步獎三等獎”3項。先后發表各類學術論文180余篇，其中SCI論文3篇，一級學報論文12篇，核心期刊90余篇；參編養殖技術叢書3冊，參編專業類編著2冊，參編《畜牧獸醫行政管理學》（國家統編教材）。

豬圓環病毒（Porcine circovirus， PCV）是人類迄今為止所發現的最小的動物DNA病毒，主要分為圓環病毒1型（PCV1）和圓環病毒2型（PCV2）。PCV1對豬有非致病性，PCV2是PCV相關疾病的主要致病因子，臨床上主要是引起仔豬斷奶后多系統衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）和繁殖障礙，對全球豬業造成重大經濟損失。但是自2010年以后，一種新型圓環病毒的初步特征在一些研究中被先后報道。直到2016年，Palinski等將該新型圓環病毒鑒定為與豬疾病相關的病原體，并將其命名為豬圓環病毒3型（PCV3）。同年3月，中國遼寧、江西、重慶3個豬場共計356頭母豬，先后發生繁殖障礙導致新生仔豬急劇減少；3個豬場死胎率為5.02%～20.1%，母豬死亡率為5.4%～10.5%；應用RT-PCR或PCR對相關樣品進行諸如豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、偽狂犬病毒（PRV）、PCV2、豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、輪狀病毒（RV）以及PCV3等相關病原的檢測，結果PCV3是唯一檢出病原。

為了更好地了解我國PCV3的感染狀況、流行情況、地理分布、潛在的致病性和遺傳特征，華中農業大學動物疫病診斷中心對采自11個省市（即安徽、重慶、福建、河北、河南、湖南、江蘇、江西、遼寧、沈陽、浙江）35個豬場的222個樣本（死胎，組織，精液和血清），應用引物F1：5’-TTACTTAGAGAACGGACTTGTAACG-3’，R1：5’-AAATGAGACACAGAGCTATATTCAG-3’，對經勻漿處理后的樣本進行了PCV3的檢測。同時還設計了兩對引物用于整個基因組測序。PCV3檢測的反應條件如下：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環；最終72 ℃延伸10 min。經T克隆測序獲得了9株PCV3的完整基因組序列，以及33株PCV3部分衣殼蛋白基因（474bp）序列，相關序列GenBank登錄號為KY075986.1～KY075994.1，KY075995.1～KY076027.1。應用MEGAv6.06將獲得的9株基因組序列與圓環病毒屬的其他圓環病毒基因組進行比較，繪制了PCV全基因組遺傳進化樹；將GenBank中所有PCV3部分Cap蛋白基因序列進行比較，繪制了PCV3遺傳進化樹。

PCV3在上述調查豬場的總體陽性率為68.6%（24/35），PCV2和PCV3的樣品陽性率分別為62.2%（138/222）和34.7%（77/222），其樣品中PCV3與PCV2的共感染率達15.8%（35/222）。PCV2的檢出被認為是上述豬場中PCV2疫苗免疫失敗的重要因素，PCV3的共感染是否在其中扮演中重要作用還需進一步研究。樣本中PCV3的單一感染率達18.9%（42/222），在所有11個省市的樣本中，腦、肺、淋巴結、扁桃體、精液和血清中均檢測到PCV3，表明PCV3可存在于豬的不同組織中，并在中國廣泛傳播；死胎和精液樣本中檢測到的PCV3表明其存在垂直傳播的風險及引起繁殖障礙的潛在作用。

PCV3中國分離株與美國分離株（KX778720.1）的基因組和Cap蛋白核苷酸相似度分別為99.0%～99.1%和98.4%～98.9%。PCV3中國分離株的基因組和Cap蛋白核苷酸相似度分別為99.0%～100%，98.4%～100%，表明Cap蛋白的基因變異水平高于完整的基因組。在全基因組遺傳進化樹分析中，PCV3中國分離株與美國分離株PCV3-USA-MO2015（KX778720.1）聚在同一簇。所有PCV3中國分離株的遺傳進化樹分析表明，相關分離株存在進化差異，可聚類為2個簇，分別3a和3b，其中美國PCV3分離株PCV3-USA-MO2015（KX778720.1）屬于簇3a。從PCV3中國分離株與中國蝙蝠冠狀病毒株基因組的序列相似性比較圖譜可知，在264～564 nt和714～1148 nt之間存在兩個重組區，表明PCV3可能是由蝙蝠冠狀病毒重組結果。

由于PCV3于2010年才被首次報道，目前對其了解甚少。直到2016年，Palinski等才將PCV3鑒定為豬病相關的病原體。盡管本文對PCV3在中國的流行狀況及遺傳特征進行了初步報道，但仍不十分清楚，需要進一步對PCV3進行分離和鑒定，研究其生物學和致病特征并監測其單一和共感染狀態。

2017-05-08）

國家自然科學基金項目“豬圓環病毒iDNA標記疫苗及其免疫應答效果的研究”（項目批準號31560688）

咸文（1992—）女，在讀碩士，研究方向：動物傳染病病原分子生物學。E-mail:572130309@qq.com

*通訊作者： 曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導師，從事動物傳染病病原分子生物學研究:E-mail：zyzeng@gzu.edu.cn