同一豬只圓環病毒抗體水平與病原檢出率之間的相關性分析

孫華偉，盧鳳英，張敬峰，張曉曦，徐 凱，劉傳敏，張小飛＊

(江蘇省農業科學院獸醫研究所，農業部獸用生物制品工程技術重點實驗室，江蘇省農科院動物疫病診斷檢測中心，江蘇 南京 210014）

同一豬只圓環病毒抗體水平與病原檢出率之間的相關性分析

孫華偉，盧鳳英，張敬峰，張曉曦，徐 凱，劉傳敏，張小飛＊

(江蘇省農業科學院獸醫研究所，農業部獸用生物制品工程技術重點實驗室，江蘇省農科院動物疫病診斷檢測中心，江蘇 南京 210014）

為探索一種鑒別豬圓環病毒（PCV）疫苗抗體與野毒感染的ELISA檢測方法，本研究通過對江蘇省農業科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2017年1—4月接診的接種過PCV疫苗的30頭活豬同時進行PCV抗體和病原的檢測，以分析抗體和病原之間的相關性。結果PCV抗體陽性率為100%，病原陽性率為30.0%（9/30)； 77.8%（7/9）病原陽性豬的PCV抗體S/P值大于1.8，70.0%（7/10）PCV抗體S/P值大于1.8的豬為PCV病原陽性；說明高PCV抗體豬與病原檢出率之間的相關性較高。即通過對群體的抗體檢測能較為準確地判斷豬群是否感染了PCV野毒。由于檢測抗體遠比活體檢測病原容易，本研究結果具有較高的實用價值，為江蘇省乃至全國豬圓環病毒的診斷與防控提供了有效數據參考，具有推廣價值。

豬圓環病毒；疫苗抗體；野毒感染；鑒別

豬圓環病毒 (porcine circoviru，PCV)是DNA病毒，屬于圓環病毒科圓環病毒屬，是當前已知的最小動物病毒之一[1]。1991年加拿大首次報道PMWS后，世界上許多國家相繼報道；2001年我國首次報道PCV感染，之后該病在我國的流行呈逐年上升趨勢[2]。PCV經常和豬細小病毒、偽狂犬病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒混合感染，造成豬免疫機能下降、生產性能降低，是規模化豬場重要的經濟性疫病[3]。PCV又是其他疾病的基礎疾病（“鑰匙病”），成為影響規模化豬場發展的主要因素[4]。由于對同一頭豬同時進行抗體和病原的檢測，分析二者之間相關性的文獻報道極少，遂對江蘇省農業科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2017年1—4月接診的接種過PCV疫苗的30頭活豬同時進行PCV抗體和病原的檢測，旨在通過對比分析檢測豬只PCV的抗體水平和野毒感染之間的關系，進而為PCV的快速診斷提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

來自江蘇省農科院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2017年1—4月份接診的接種過圓環病毒疫苗的30頭活豬，在剖殺前進行前腔靜脈采血，在剖殺后無菌采集肺臟、脾臟、淋巴結和肝臟。上述檢測于2017年5月在江蘇省農科院獸醫所動物疫病診斷檢測中心實驗室進行。

表1 引物序列信息

表2 PCV抗體檢測結果

表3 病料PCV病原檢測結果

圖1 部分樣品的PCR檢測結果

1.2 主要試劑及儀器

PCV抗體檢測試劑盒購自韓國JBT公司；基因組提取及PCR試劑盒等購自上海Sangon公司；酶標儀型號為寶特ExL808，美國寶特公司生產；冷凍離心機型號為Centrifuge5424R，產自德國；CAVOY型電泳儀；Tanon凝膠成像系統（2500）；其他化學試劑為進口產品或國產分析純產品；各種規格移液器，購自德國Eppendorf公司；恒溫箱水浴鍋等。

1.3 方法

1.3.1 抗體檢測

PCV抗體檢測嚴格按照韓國JBT公司生產的PCV抗體檢測試劑盒說明書進行相關操作。結果判定： PCV抗體檢測試劑盒的判斷標準為：被檢樣品 S/P值＜0.30，判為陰性；0.3≤ S/P值＜0.40，判為可疑；S/P值≥0.4，判為陽性。

1.3.2 病原檢測

根據相關文獻設計引物，引物由南京思普金生物科技有限公司合成，該對引物的擴增目的片段大小為569 bp，見表1。

2 結果與分析

2.1 血清PCV抗體檢測結果

30頭接種過豬圓環病毒疫苗現場剖殺活豬血清的PCV抗體結果見表2。

由表2可知：30頭現場剖殺的接種過豬圓環病毒疫苗豬血清的PCV抗體檢測結果均為陽性，抗體陽性率為100%，抗體S/P平均值為1.27。對上述豬只剖殺后采集病料，進行PCV的PCR檢測，以分析抗體和病原之間的相關性。

2.2 病料PCV病原檢測結果

30頭現場剖殺的接種過豬圓環病毒疫苗的豬只病料病原檢測結果見表3和圖1。

由表2、表3可知：上述30頭豬中有9頭PCR檢測結果為陽性，病原陽性率為30.0%（9/30)； 其中77.8%（7/9）病原陽性豬的PCV抗體S/P值大于1.8，70.0%（7/10）的PCV抗體S/P值大于1.8豬為PCV病原陽性；說明高PCV抗體豬與病原檢出率之間的相關性較高。從本次的檢測可以看出：僅僅根據抗體檢測，雖不能精確地判定豬群是否感染了野毒，但通過對群體的檢測能大概率地判斷豬群是否感染了野毒。

3 討論

江蘇省農科院動物疫病診斷檢測中心在日常的抗體檢測和PCR檢測中通過對同一頭豬同時進行豬瘟、豬藍耳病、PCV的抗體和病原的檢測，以分析抗體和病原之間的相關性，結果發現PCV的相關性最好，即高抗體豬只對應病原的PCR檢出率最高，具體原因可能是豬瘟疫苗和豬藍耳病疫苗都是活疫苗，而豬圓環病毒是滅活疫苗，滅活疫苗產生抗體的能力弱于活疫苗。

通過對上述30頭臨床門診接診豬只同時進行PCV的抗體檢測和病原檢測發現，如果檢測豬只抗體的S/P值大于1.8（韓國JBT公司生產的PCV抗體檢測試劑盒），則檢測豬只存在PCV野毒感染的可能性較大，該1.8的數值是根據本次檢測得出的一個大概的值，如果檢測的樣本量足夠大，該數值可能會小幅度的上下浮動。目前獸醫臨床上除豬偽狂犬病病毒 gpI 抗體(野毒)檢測試劑盒外，其余抗體檢測試劑盒尚不能區分檢測到的抗體來自于疫苗免疫還是野毒感染，在本中心日常的臨床檢測中發現，健康狀況正常或良好豬群的PCV抗體S/P值絕大部分小于1.8。因此，如果能夠對常規的檢測方法進行摸索、創新和改進，將會是對目前檢測技術非常有益的補充[5]。

[1] 殷震，劉景華.動物病毒學[M].2版.北京：科學出版社，1997.

[2] 李玲，李國新，周艷君.等.2008-2011年中國部分地區豬圓環病毒2型的分子流行病學調查[J].中國動物傳染病學報，2012，20（2）：1-10.

[3] 蔡高峰，李凱，張黎，等.豬圓環病毒2型江西株的全基因組克隆和序列分析[J].中國畜牧獸醫，2017，44（3）：790-798.

[4] 邵萌，呂亞輝，杜謙，等.2010-2012年陜西地區豬圓環病毒2型分子流行病學調查[J].西北農林科技大學學報：自然科學版，2013，41（10）：19-26.

[5] 孫華偉，張敬峰，趙永前，等.一種鑒別豬偽狂犬母源抗體與野毒感染的檢測方法的建立[J].豬業科學，2016，33（7）：48-49.

2017-05-21）

江蘇省科技成果轉化與推廣資金【編號：KF(17)1033】

孫華偉（1981- ），男，碩士，助理研究員，執業獸醫師，主要從事豬病的臨床診斷及重大疾病流行規律、診斷、監測和控制技術研究。E-mail：sunhuawei66@163.com

*通訊作者：張小飛