電針療法聯(lián)合康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療腦卒中肢體痙攣大鼠的機(jī)制

葛亞博 馮曉東

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院康復(fù)中心，河南 鄭州 450000)

電針療法聯(lián)合康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療腦卒中肢體痙攣大鼠的機(jī)制

葛亞博 馮曉東

(河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院康復(fù)中心，河南 鄭州 450000)

目的 探討電針聯(lián)合康復(fù)運(yùn)動(dòng)對(duì)腦卒中模型大鼠肢體痙攣的治療機(jī)制。方法 取60只SD大鼠，將造模成功者隨機(jī)分為電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組、電針組、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組及正常組和模型組每組10只。建模成功后第3天開始治療，康復(fù)運(yùn)動(dòng)組治療1次/d，30 min/次；電針組治療1次/d，30 min/次；電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組治療時(shí)先進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練治療，再進(jìn)行電針治療，治療方法及時(shí)間與單獨(dú)治療組相同三組均連續(xù)治療1 w。分別于術(shù)后1、3、10 d對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)定，治療前后測(cè)定肌張力實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取各組大鼠脊髓頸膨大、腰膨大和腦干，測(cè)定大鼠突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)水平。結(jié)果 電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組治療后大鼠神經(jīng)功能分?jǐn)?shù)降低最顯著，與單獨(dú)治療比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與電針組和康復(fù)運(yùn)動(dòng)組相比，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組改善模型大鼠肌張力效果更明顯(P<0.05)，各組織中的突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)增多最明顯(P<0.05)。結(jié)論 電針聯(lián)合康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療對(duì)模型大鼠脊髓頸膨大組織、腦干組織及腰膨大組織中的突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)具有明顯的促進(jìn)作用，這可能是聯(lián)合療法改善腦卒中大鼠肢體痙攣神經(jīng)功能及肌肉功能更優(yōu)的內(nèi)在機(jī)制之一。

腦卒中；肢體痙攣；電針；康復(fù)運(yùn)動(dòng)；突觸結(jié)合蛋白Ⅰ

腦卒中后約90%的患者伴肢體痙攣，導(dǎo)致腦卒中后運(yùn)動(dòng)功能障礙成為一個(gè)嚴(yán)重的社會(huì)問題，嚴(yán)重影響生存質(zhì)量〔1，2〕。腦卒中后神經(jīng)功能障礙導(dǎo)致關(guān)節(jié)出現(xiàn)攣縮、甚至畸形，常伴隨不同程度的疼痛不適，對(duì)患者肢體功能的正?；顒?dòng)造成嚴(yán)重妨礙并嚴(yán)重影響肢體功能恢復(fù)，從而對(duì)患者的生活質(zhì)量帶來嚴(yán)重影響。針刺治療腦卒中肢體痙攣主要是影響抑制性遞質(zhì)及其受體。突觸結(jié)合蛋白Ⅰ是囊泡膜融合的Ca2+感受蛋白，位于神經(jīng)元的突觸囊泡上，結(jié)合鈣離子后可以誘導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)的正常釋放，參與突觸囊泡融合過程，起到至關(guān)重要的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 由廣東藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供SPF級(jí)，體質(zhì)量(350±20)g的健康雄性SD大鼠60只，許可證號(hào)SCXK(粵)2015- 0031；購(gòu)回后適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，將其隨機(jī)分為電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組、電針組、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組及正常組和模型組每組10只。本實(shí)驗(yàn)操作過程中及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)各大鼠的處理方法均符合2006年中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》。

1.2 主要試劑及儀器 滾筒式網(wǎng)狀訓(xùn)練器(自制)，G6805- 2型電針儀(中國(guó)青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司)，針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠)，水合氯醛(天津科密歐)，血管內(nèi)栓線(北京沙東生物)，I抗、Ⅱ抗及顯色劑DAB(Sigma公司)。

1.3 大鼠模型的制備 參照文獻(xiàn)〔3，4〕，在Ngaaswaa法基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，使用血管內(nèi)線栓阻斷法造模，制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型：各大鼠禁食12 h后，于腹腔注射10%水合氯醛(0.3 ml/100 g劑量)進(jìn)行麻醉，固定于潔凈手術(shù)操作臺(tái)上，消毒；沿大鼠頸部正中剪開，慢慢剝離組織，使大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈及其分叉處，頸內(nèi)、外動(dòng)脈完全暴露，在頸外動(dòng)脈及頸總動(dòng)脈近心端結(jié)扎，在分叉膨大處開口，將事先浸泡過鹽水的栓線(干燥后)插入頸內(nèi)動(dòng)脈，深度18～20 mm，阻斷大腦中動(dòng)脈的血流。插線完畢后，將頸內(nèi)動(dòng)脈與栓線一起結(jié)扎，然后逐層縫合。術(shù)后為防止出現(xiàn)感染或腦水腫，給予腹腔注射慶大霉素(2萬(wàn)U)及呋塞米(10 μg/100 g劑量)。

1.4 大鼠模型的評(píng)價(jià)方法及模型成功標(biāo)準(zhǔn)〔5〕對(duì)大鼠神經(jīng)功能采用Zealonga標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，采用改良Ashworth標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定大鼠肌張力。

模型成功及入組實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：神經(jīng)功能評(píng)分1～3分者以及肌張力1級(jí)及其以上者為模型建造成功，可以入選分組實(shí)驗(yàn)。

1.5 電針操作及康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練方法〔6，7〕

1.5.1 康復(fù)訓(xùn)練 (1)滾筒訓(xùn)練：對(duì)大鼠進(jìn)行抓握能力及抓力大小、旋轉(zhuǎn)方向、行走功能等運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，采用滾筒式網(wǎng)狀訓(xùn)練器，進(jìn)行訓(xùn)練；(2)平衡訓(xùn)練：訓(xùn)練大鼠的平衡能力，將大鼠輕輕平放于離地15 cm的平衡木上，讓其自由行走；(3)網(wǎng)屏訓(xùn)練：訓(xùn)練大鼠的前爪抓握能力，先將一塊厚的海綿鋪于網(wǎng)屏的下方，將大鼠置于水平放置的網(wǎng)屏上，從網(wǎng)屏一端慢慢將其抬高，2 s內(nèi)轉(zhuǎn)動(dòng)90°，保持5 s。

1.5.2 電針治療 取大鼠右側(cè)申脈(后肢外踝正下方凹陷處)、照海(后肢內(nèi)踝下1 mm)兩個(gè)穴位，用普通30號(hào)0.5寸不銹鋼毫針，于申脈處直刺0.5 mm，照海處直刺1.5 mm。接G6805型電針治療儀，選取連續(xù)波段刺激，強(qiáng)度以肢體肌肉有節(jié)律性收縮為度，頻率50 Hz，調(diào)整輸入電流。

1.5.3 療程 各組治療均于建模成功后第3天開始，康復(fù)運(yùn)動(dòng)組治療1次/d，30 min/次，連續(xù)治療1 w；電針組治療1次/d，30 min/次，連續(xù)治療1 w；電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組治療時(shí)先進(jìn)行康復(fù)訓(xùn)練治療，再進(jìn)行電針治療，治療方法及時(shí)間與單獨(dú)治療組相同；正常組、模型組自由飲水進(jìn)食，不做治療處理。

1.6 療效評(píng)價(jià)

1.6.1 神經(jīng)功能評(píng)定 分別于術(shù)后1、3、10 d對(duì)各組大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能、感覺功能、平衡能力、異常運(yùn)動(dòng)測(cè)定，評(píng)估大鼠神經(jīng)損傷程度，評(píng)定1～6分為輕度損傷，7～12分為中度損傷，13～18分為重度損傷。

1.6.2 肌張力測(cè)定 ①采用改良Ashworth評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定治療前后各組大鼠的肌張力是否異常；②對(duì)各組大鼠股四頭肌肌張力進(jìn)行電生理描記。

1.6.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取各組大鼠脊髓頸膨大、腰膨大和腦干，固定后，石蠟包埋，切片，處理后依次加入一抗、生物素化山羊抗小鼠(或兔)IgG，最后進(jìn)行DAB顯色和蘇木素復(fù)染，鏡下觀察，神經(jīng)細(xì)胞核周和胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色反應(yīng)物即為陽(yáng)性表達(dá)，采用圖文分析軟件。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件，計(jì)量資料組間比較采用LSD方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能測(cè)評(píng)結(jié)果分析 模型組與正常組(0.00±0.00)比較，模型組有神經(jīng)損傷，評(píng)分(11.77±0.91)高(P<0.05)；除正常組外，造模后第1天，其他各組的神經(jīng)功能損傷評(píng)分沒有差異〔電針組(11.81±0.89)、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(11.92±1.01)、電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(11.86±1.11)，P>0.05〕，說明造模對(duì)各組大鼠神經(jīng)損傷影響相同；造模成功后第3天，其他各組的神經(jīng)功能損傷評(píng)分均開始逐漸下降〔模型組(9.83±0.85)、電針組(10.14±0.90)、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(9.94±0.96)、電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(9.85±0.77)〕，但各組間無(wú)差異(P>0.05)；造模成功后第10天，與模型組(7.69±0.93)相比，電針組(5.44±0.96)、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(5.21±0.91)、電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組(3.87±0.88)神經(jīng)功能評(píng)定分?jǐn)?shù)均有降低，結(jié)果顯示對(duì)神經(jīng)功能損傷具有一定的改善效果，而且存在顯著差異(P<0.05)，組間比較顯示，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組神經(jīng)功能分?jǐn)?shù)降低最顯著，與單獨(dú)治療有顯著差異(P<0.05)。

2.2 肌張力檢測(cè)結(jié)果 治療前,模型組與各治療組大鼠比較肌張力差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與正常組相比，模型組肌張力升高顯著(P<0.05)；治療后，與電針組相比，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組大鼠肌張力降低(P<0.05)，康復(fù)運(yùn)動(dòng)組與電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組亦有明顯差異(P<0.05)。綜合評(píng)估比較，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組改善模型大鼠肌張力效果更明顯。見表1。

表1 改良Ashworth評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定肌張力(n,n=10)

2.3 電生理描記結(jié)果 與正常組比較，治療前各模型大鼠的電生理描記數(shù)值明顯下降(P<0.05)；與模型組相比，治療后康復(fù)運(yùn)動(dòng)組、電針組及電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組大鼠的電生理描記結(jié)果明顯升高(P<0.05)，而電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組與單組相比肌張力改善更明顯(P<0.05)。見表2。

2.4 各組大鼠組織突觸結(jié)合蛋白Ⅰ免疫組化檢測(cè)結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠各神經(jīng)組織中的突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)顯著減少(P<0.05)；與模型組相比，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組、電針組、康復(fù)運(yùn)動(dòng)組各組大鼠各神經(jīng)組織中的突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)均顯著增多(P<0.05)；與單獨(dú)治療的康復(fù)運(yùn)動(dòng)組、電針組相比，電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組各組織中的突觸結(jié)合蛋白Ⅰ表達(dá)增多最明顯(P<0.05)。 見表3。

表2 各組電生理描記結(jié)果

與模型組比較：1)P<0.05；與電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組比較：2)P<0.05；下表同

表3 各組大鼠突觸結(jié)合蛋白Ⅰ免疫組化結(jié)果積分光密度(×105)〕

3 討 論

腦卒中后肢體痙攣歸屬于中醫(yī)文獻(xiàn)中的“筋病”范疇，一般認(rèn)為腦中風(fēng)后引起經(jīng)脈肌肉失養(yǎng)，導(dǎo)致肢體痙攣〔8，9〕。現(xiàn)代醫(yī)家研究認(rèn)為，腦卒中后肢體痙攣的主要病因病機(jī)是痰癖痹阻血脈，氣血不足，最終導(dǎo)致筋脈失養(yǎng)，引起肢體拘攣、僵硬〔10，11〕。針灸療法是中醫(yī)傳統(tǒng)療法，具有通絡(luò)關(guān)節(jié)及活血行氣的療效。對(duì)肢體痙攣狀態(tài)的針刺治療顯示，針刺申脈、照海穴對(duì)改善肢體痙攣有明顯效果〔12～15〕，這也是本實(shí)驗(yàn)選取照海和申脈穴的主要原因。本研究顯示，康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療對(duì)腦卒中后神經(jīng)元及突觸結(jié)構(gòu)的影響是神經(jīng)功能提高的基礎(chǔ)。

電針療法結(jié)合滾筒、平衡及網(wǎng)屏3種康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療腦卒中后大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)效果更明顯，對(duì)降低大鼠的肌張力效果更優(yōu)。電針+康復(fù)運(yùn)動(dòng)組后突觸結(jié)合蛋白I表達(dá)增多最明顯，這可能是電針療法聯(lián)合康復(fù)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練治療改善腦卒中大鼠肢體痙攣神經(jīng)功能及肌肉功能的內(nèi)在機(jī)制之一。

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〔2016- 10- 15修回〕

(編輯 徐 杰)

國(guó)家中醫(yī)臨床研究項(xiàng)目(2015ZS102)

葛亞博(1981- )，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事康復(fù)方面研究。

R743

A

1005- 9202(2017)15- 3643- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.002