CYP4F2基因多態性與冠心病的相關性

趙 平 常培葉 蔣 鵬 格日勒

(內蒙古自治區人民醫院心內科，內蒙古 呼和浩特 010017)

·心、腦血管及代謝性疾病·

CYP4F2基因多態性與冠心病的相關性

趙 平 常培葉1蔣 鵬 格日勒

(內蒙古自治區人民醫院心內科，內蒙古 呼和浩特 010017)

目的 研究CYP4F2基因多態性與冠心病(CAD)的相關性。方法 對285例漢族CAD患者(冠心病組)和264例非CAD患者(對照組)進行問卷調查，采用高溫連接酶檢測反應技術進行基因擴增和基因分型，分析CYP4F2基因的2個單核苷酸多態性位點rs1558139和rs2108622多態性與CAD的相關性。結果 CAD組吸煙史和體重指數(BMI)均顯著高于對照組(P<0.05)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL- C)CAD組顯著低于對照組(P=0.000)，CAD組男性患者比例明顯高于女性(P=0.001)；CAD組CYP4F2基因rs1558139的基因型頻率和等位基因頻率與對照組無顯著差異(P>0.05)，rs2108622的CC基因型頻率在CAD組和對照組間差異顯著(P<0.05)。結論 CAD患者的危險因素是男性、有吸煙史、高BMI；CYP4F2基因rs1558139多態性與CAD無明顯相關性，CYP4F2基因rs2108622多態性與CAD相關，攜帶CC基因型的患者發生CAD的風險增加。

冠心病；CYP4F2基因；rs1558139;rs2108622

冠心病(CAD)的發病機制與一些基因的表達和調控有關。探討遺傳因素在CAD 發病機制中的作用已成為當前研究的熱點。有研究發現細胞色素氧化酶 P450(CYP)基因多態性在CAD發病過程中起著重要作用〔1〕。CYP 是廣泛存在于生物體內的一種血紅素- 硫鐵蛋白酶系。研究證實花生四烯酸在內源性CPY家族基因作用下的產物20- 羥基二十碳四烯酸(20- HETE)在CAD的發生發展中起著重要作用〔2〕。一項研究〔3〕在日本人群中發現CYP4F2基因rs1558139的多態性會影響20- HETE的生成。CYP4F2在基因水平上對冠心病遺傳易感性影響的具體調控機制尚需進一步研究。內蒙古自治區是CAD高發地區，且有鮮明的區域聚集特征，可能具有不同的遺傳和環境背景。本研究探討內蒙古自治區漢族人群CYP4F2基因多態性與CAD的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 內蒙古自治區人民醫院2013年6月至2014年6月住院的漢族患者開展CAD流行病學調查，研究對象均無血緣關系，無異族通婚史，25～65歲，至少三代(祖父/母、父/母和子/女)從小生活在調查所在地區。所有參與者均知情同意。調查內容包括一般情況和病史，包括性別、年齡、是否出現胸悶或胸痛、胸悶/胸痛發作頻率、次數、誘發因素、緩解因素、發作持續時間、心電圖特征、是否具有冠心病家族史、吸煙、飲酒史及血脂狀況。

1.2 病例組和對照組的診斷納入標準 冠狀動脈造影結果，嚴格依據以下診斷標準選取陽性病例(CAD組)：①心肌梗死患者；②冠狀動脈造影顯示冠脈狹窄≥70%，并有心肌缺血表現〔ST改變及(或)心絞痛〕。次選標準：冠狀動脈造影顯示：70%>冠脈狹窄≥50%，全部病例均符合1979年WHO缺血性心臟病的診斷標準。對照組納入標準：在內蒙古自治區人民醫院就診的擬診CAD患者，經冠脈造影檢查證實無狹窄病變；心電圖顯示沒有缺血性改變變。研究中排除了過量飲酒、腦卒中、嚴重肝腎疾病、甲狀腺疾病病史及惡性腫瘤的對象。共收集CAD組285例，對照組264例。

1.3 方法

1.3.1 血樣DNA的提取 采用試劑盒法進行基因組DNA的提取并進行DNA濃度、純度檢測。

1.3.2 連接酶檢測反應(LDR)檢測rs1558139和rs2108622多態性

1.3.2.1 PCR擴增SNP所在片段 PCR反應體系如下：1倍緩沖液2 μl，20 ng模板1 μl，3 mmol/L Mg2+0.6 μl，2 mmol/L dNTP 2 μl，1 U Taq酶0.2 μl，1倍Q溶液4 μl，0.5p引物混合液2 μl，H2O 8.2 μl，總體積20 μl。PCR 反應條件：起始95℃變性15 min，然后94℃ 30 s，62℃ 1 min，72℃ 1 min，反應35個循環，最后72℃延伸10 min。反應結束后用3%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物。

1.3.2.2 LDR進行基因分型 反應體系如下：1倍緩沖液1 μl，12.5 pmol/μl探針混合液1 μl，2 U連接酶0.05 μl，100 ng/μl PCR產物1 μl，H2O 6.95 μl，總體積10 μl。反應條件：95℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃ 2 min，反應35個循環。反應結束后，用GeneMapper 3.0軟件進行數據分析和基因分型。

1.4 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件對數據的組間比較進行t及χ2檢驗。

2 結 果

2.1 兩組臨床相關指標比較 CAD組與對照組平均年齡、總膽固醇(TC)、 甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL- C)無統計學差異(P>0.05)。CAD組吸煙史、體重指數(BMI)均顯著高于對照組(P<0.05)。CAD組高密度脂蛋白膽固醇(HDL- C)顯著低于對照組(P=0.000)，CAD組男性患者比例明顯高于女性(P<0.01)，見表1。

2.2 兩組CYP4F2基因多態性 CAD組和對照組CYP4F2基因rs1558139和rs2108622等位基因頻率和基因型頻率的分布符合Hardy- Weinberg平衡。CAD組和對照組CYP4F2基因rs1558139的等位基因頻率和基因型頻率均無統計學差異(P>0.05)，rs2108622的CC基因型頻率在CAD組明顯高于對照組(P<0.05)，rs2108622的等位基因頻率在CAD組和對照組差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 兩組臨床相關指標比較

表2 兩組CYP4F2基因等位基因和基因型頻率比較〔n(%)〕

3 討 論

CAD是在遺傳和環境因素基礎上，多種危險因素共同作用下發病的。傳統危險因素包括年齡、性別、家族史、吸煙、高血壓、糖尿病、肥胖、高膽固醇血癥等。近來研究發現新的危險因素如感染及炎癥、促凝物質、載脂蛋白(LP)a、高同型半胱氨酸(HCY)血癥等〔4〕。目前多個研究表明細胞色素酶P450基因與冠心病的發病有關〔5～7〕。有研究對花生四烯酸代謝途徑上的 CYP家族基因進行多態性分析發現CYP4F2基因的多態性和CAD等疾病的發生關聯密切〔8〕。研究發現 CYP4F2 基因的多態位點會影響該基因的功能，從而影響花生四烯酸生成20- HETE〔9〕，而20- HETE在CAD發生發展中起重要作用〔2〕。

研究表明男性雄激素水平與心血管疾病相關，過高的激素水平可增加CAD的風險〔10〕。另外，男性是心血管事件的獨立危險因素〔11〕。女性CAD發病率較低，這和雌激素具有抗動脈粥樣硬化作用相關，但在絕經期后發病率明顯增加〔12〕。吸煙是心血管疾病重要的危險因素，煙草中的尼古丁作用于動脈內膜，促進動脈粥樣硬化的發展。煙草煙霧中的一氧化碳、一氧化氮、氧自由基等物質損害血管內皮功能，促進CAD的形成〔13〕。研究顯示戒煙可使心血管疾病患者死亡相對風險下降36%〔14〕。血脂代謝紊亂是CAD的重要危險因素，血脂水平在動脈粥樣硬化的發生和發展方面起到了重要的作用。有研究發現低 HDL- C 可增加心血管事件的發病率〔15〕。本研究結果顯示，除HDL- C外CAD組與對照組各血脂比較均無統計學差異，可能與患者前期使用他汀類等降脂藥物有關。超重與主要心腦血管的發病密切相關，BMI增加引起CAD和高血壓，并被認為是高血壓、CAD的重要危險因素〔16〕。

本研究提示CYP4F2基因的rs2108622與CAD相關，攜帶CC基因型的患者發生CAD的風險增加。欲證實CYP4F2基因在CAD中的作用需要擴大樣本量進行相關的功能研究，以明確CAD的遺傳易感基因，進而對易感人群進行有效的疾病預防。

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〔2015- 12- 07修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

內蒙古自治區自然科學基金面上項目(2013MS1154)

趙 平(1973- )，男，副主任醫師，主要從事冠心病、高血壓發病機制的研究。

R394.5

A

1005- 9202(2017)15- 3703- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.026

1 內蒙古醫科大學附屬醫院核醫學科