P21及CDK6與宮頸鱗狀細胞癌的關系

劉 靜,江 葉,閔 敏,許建瓊,袁 華,曾 淋,宋大萍

(四川省綿陽市第三人民醫(yī)院病理科 621000)

P21及CDK6與宮頸鱗狀細胞癌的關系

劉 靜,江 葉,閔 敏,許建瓊,袁 華,曾 淋,宋大萍△

(四川省綿陽市第三人民醫(yī)院病理科 621000)

目的 觀察P21、CDK6在宮頸鱗狀細胞癌中的表達情況，探討其與宮頸鱗狀細胞癌的關系。方法 采用免疫組織化學ABC法檢測100例宮頸鱗狀細胞癌、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及20例正常宮頸組織中P21及CDK6的表達情況，分析他們與癌組織分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期的關系。結果 宮頸鱗狀細胞癌組織的P21及CDK6表達率均明顯高于CIN組及正常組；P21的低表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期(P<0.05)有關，與腫瘤分化程度(P>0.05)無關；CDK6的高表達與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及臨床分期(P<0.05)均有關。結論 P21及CDK6表達異常可能在宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用；且二者對判斷宮頸鱗狀細胞癌的預后有一定意義。

P21；細胞周期蛋白依賴激酶6；宮頸腫瘤;腫瘤,鱗狀細胞

近年來對于腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機制研究很多，發(fā)現(xiàn)細胞癌變與細胞周期調控異常密切相關，細胞周期素依賴性激酶(CDK)推動細胞過度增殖，細胞CDK抑制劑抑制細胞過度增殖[1]。宮頸癌是一漸進性的細胞周期調控機制破壞的疾病，其發(fā)生是細胞增殖生長的調控與調節(jié)嚴重紊亂的結果[2]。本研究檢測CDK6及CDKⅠ P21在宮頸鱗狀細胞癌中的表達情況，探討其與宮頸鱗狀細胞癌的關系，評價其對于宮頸癌患者的預后意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有病例及標本均為本院2011年1月至2015年1月經(jīng)病理診斷為宮頸鱗狀細胞癌和宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CIN)的組織，以及因其他原因行子宮全切術而宮頸正常組織，并經(jīng)過復驗證實。病理診斷、分類均參照WHO的分類標準，臨床病理分期均按宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟2000年(FIGO 2000)標準。選擇對象均無術前放、化療史，術后均有隨訪。其中宮頸鱗狀細胞癌組100例，CIN組20例，正常宮頸組20例。宮頸鱗狀細胞癌組低分化19例，中高分化81例；臨床病理分期Ⅰ、Ⅱ期83例，Ⅲ、Ⅳ期17例；有淋巴結轉移16例，無淋巴結轉移84例。全部標本均為5%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片。

1.2 方法 采用免疫組織化學ABC法對標本進行P21、CDK6檢測。即用型非生物素聚合物免疫組織化學Polink-1檢測試劑盒(PV-6000)及鼠抗P21、CDK6單克隆抗體(工作液)均來自北京中杉金橋公司。以PBS液代替一抗作為陰性對照，以已知的多次試驗對照有效的宮頸癌標本作為陽性對照。全部切片均厚4 μm。

1.3 判斷標準 P21陽性著色定位于細胞核，細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒則為陽性細胞；反之，則為陰性細胞。CDK6陽性著色定位于細胞核、細胞質，細胞核、細胞質出現(xiàn)棕黃色顆粒則為陽性細胞；反之，則為陰性細胞。隨機抽取20個高倍視野，計數(shù)大于或等于500個腫瘤細胞，按陽性細胞所占百分比分級如下：陽性細胞數(shù)小于10%為陰性表達；陽性細胞數(shù)大于或等于10%為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析,計數(shù)資料用率表示，率的比較采用四格表χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 P21與CDK6在各組中表達 P21在正常宮頸組、CIN組及宮頸鱗狀細胞癌組中的陽性表達率逐漸升高(依次為0、15.0%、44.0%),宮頸鱗狀細胞癌組與正常宮頸組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),宮頸鱗狀細胞癌組與CIN組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CDK6在正常宮頸組、CIN組及宮頸鱗狀細胞癌組中的陽性表達率逐漸升高，宮頸鱗狀細胞癌組與正常宮頸組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，宮頸鱗狀細胞癌組與CIN組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),見圖1、2及表1。

A:正常宮頸組；B：CIN組；C：鱗狀細胞癌組

圖1 P21在各組中的表達(×400)

A:正常宮頸組；B：CIN組；C：鱗狀細胞癌組

圖2 CDK6在各組中的表達(×400)

表1 P21與CDK6在各組中的表達情況[n(%)]

表2 P21、CDK6陽性表達與臨床病理特征的關系[n(%)]

2.2 P21及CDK6的表達與腫瘤臨床病理特征的相關性 P21在高中分化及低分化宮頸鱗狀細胞癌組中的陽性表達率逐漸降低(分別為48.1%、28.6%)，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；P21的陽性表達降低與腫瘤浸潤深度(P<0.05)及淋巴結轉移(P<0.05)相關；在FIGO分期中，Ⅰ、Ⅱ期P21表達與Ⅲ、Ⅳ期相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CDK6的陽性表達與腫瘤分化程度(P<0.05)、浸潤深度(P<0.05)、淋巴結轉移(P<0.05)相關；在FIGO分期中，Ⅰ、Ⅱ期CDK6表達與Ⅲ、Ⅳ期比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

3 討 論

腫瘤是一種細胞周期性疾病，細胞周期主要依靠細胞周期素(cyclin)、CDK及周期蛋白依賴性激酶抑制因子CKI三者的相互作用進行調控，cyclin和CDK是細胞周期正調節(jié)蛋白，CKI是細胞周期負調節(jié)蛋白[3]。

CDKs處于細胞周期調控中心，在細胞周期的特定時相激活或失活，其異常表達可使細胞周期調控發(fā)生障礙，導致腫瘤發(fā)生[4]。許多研究一致表明胃癌[5]、肝癌[6]、子宮內(nèi)膜腺癌[7]、口腔鱗狀細胞癌[8]等的CDK6蛋白水平表達增高。本研究在67%的宮頸鱗狀細胞癌組織標本中檢測到CDK6蛋白水平也異常增高，并發(fā)現(xiàn)CDK6的陽性表達與宮頸鱗狀細胞癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移情況及臨床分期相關，提示CDK6有可能成為預測宮頸鱗狀細胞癌預后的新指標，并為腫瘤的基因治療提供新途徑。

CKIs家族成員包括P16、P21、P27、P15。1993年，Harper分離出P21的cDNA[9]。P21蛋白可抑制CDK2和CDK4/6的活性，使去磷酸化Rb水平升高，抑制轉錄因子E2F所調控基因的激活，使細胞周期停滯于G2期[10]。所以理論上P21的表達水平在腫瘤中應該降低。但對現(xiàn)有的關于肝癌[11]、直腸癌[12]、淋巴瘤[13]、外陰癌[14]等P21的表達情況及意義的文獻進行分析，結果尚不一致。本研究發(fā)現(xiàn)P21在宮頸鱗狀細胞癌中高表達，但隨著腫瘤的分化程度變差，浸潤深度加深，有淋巴結轉移及臨床分期晚時，P21的表達逐漸降低，且除了分化程度外(P>0.05)，均有明顯相關性(P<0.05)，這與張宏等[15]的研究結果一致。P21在宮頸鱗狀細胞癌中表達升高的發(fā)生機制有待進一步研究探討。

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Expression and significance of P21 and CDK6 protein in cervical squamous cell carcinoma

LiuJing,JiangYe,MinMin,XuJianqiong,YuanHua,ZengLin,SongDaping△

(DepartmentofPathology,theThirdPeople′sHospitalofMianyangcity,Mianyang,Sichuan621000)

Objective To observe the expression of P21 and CDK6 in cervical squamous cell carcinoma,and to investigate the relationship between their expression and cervical squamous cell carcinoma.Methods The expression of CDK6 and P21 in 100 cases of cervical squamous cell carcinoma,20 cases of cervical CIN lesions and 20 cases of normal cervical tissues were detected by immunohistochemical ABC method,and the relationship between them and tumor differentiation,invasion depth,lymph node metastasis and clinical stage were analyzed.Results The expression rates of P21 and CDK6 in cervical squamous cell carcinoma tissues were significantly higher than those in CIN lesions and normal cervical tissues;The low expression of P21 was associated with the depth of tumor invasion,lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05),and was not associated with the degree of tumor differentiation (P>0.05);The high expression of CDK6 was associated with tumor differentiation,invasion depth,lymph node metastasis and clinical stage (P<0.05).Conclusion The abnormal expression of P21 and CDK6 may play an important role in the occurrence and development of cervical squamous cell carcinoma,and the two may have a certain significance in the prognosis of cervical squamous cell carcinoma.

P21 protein;cyclin-dependent kinase 6;uterine cervical neoplasms;neoplasms,squamous cell

劉靜(1980-)，主治醫(yī)師，本科，主要從事腫瘤病理研究。

△通信作者，E-mail:809906@qq.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.23.020

R737.33

A

1671-8348(2017)23-3231-03

2017-03-20

2017-05-11)

論著·臨床研究