白花鬼針草總黃酮提取工藝研究

李洪芹

(菏澤學院，山東 菏澤 274015)

白花鬼針草總黃酮提取工藝研究

李洪芹

(菏澤學院，山東 菏澤 274015)

用正交試驗法優選白花鬼針草中總黃酮的提取工藝。以總黃酮得率為評價指標,乙醇濃度、液料比、提取時間、提取溫度為考察因素,采用正交試驗法確定醇提取白花鬼針草中總黃酮的最佳工藝。結果表明最佳提取工藝條件為30倍量50%乙醇，60℃超聲30min，且此條件下黃總酮提取率為6.51%。

白花鬼針草；總黃酮；正交設計

白花鬼針草為菊科鬼針草屬(Bidens L.)一年生草本植物，我國有9種和2變種，全國各地均有分布，是常用的民間藥。《中藥大辭典》[1]載鬼針草具有清熱解毒、散瘀消腫之功效。鬼針草含有黃酮、揮發油、氨基酸、維生素等成分[2]，現代研究證明[3]，鬼針草黃酮化合物具有降壓、降血糖、抗氧化等作用。白花鬼針草資源豐富而且分布廣泛，但未見白花鬼針草總黃酮的相關報道，為了更好地開發利用鬼針草屬植物黃酮類成分的藥用價值，本實驗采用正交優化法對白花鬼針草總黃酮的提取工藝進行研究。

1 試驗儀器與試劑

UV-3010紫外分光光度計(日本島津公司)，FA-1104電子分析天平(上海天平儀器廠)、移液管、容量瓶、濾紙、擦鏡紙、比色皿、超聲儀、回流冷凝管、圓底燒瓶、水浴鍋、錐形瓶、減壓泵、布什漏斗等；蘆丁標準品(濟南市藥檢所提供)、甲醇、乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、氯化鋁、乙酸鉀均為分析純；蒸餾水(自制)。藥材來源于菏澤白花鬼針草。

2 實驗方法與結果

2.1 標準溶液的配制

精密稱取60℃干燥至恒重的蘆丁對照品10.0 mg置100 mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液制備

準確稱取樣品0.5 g，按照不同實驗設計提取，過濾，濾液轉移到50 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容到刻度，搖勻，即得。

2.3 最大吸收波長測定

精密量取對照品溶液及樣品提取液各1.00 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加70% 乙醇至5 mL，精密加入5%的NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6min；加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，振搖，放置6 min；再加入4%NaOH 溶液2 mL，振搖并加水至刻度，放置15min。以相應試劑做空白。照紫外-可見分光光度法，于400～600 nm波長范圍內掃描，對照品溶液在508 nm處有最大吸收，而空白溶液無干擾，參考文獻報道，故選擇510 nm為測定波長。吸收光譜見圖1。

圖1 蘆丁和樣品吸收光譜

2.4 標準曲線的制作

精密量取蘆丁對照品溶液0、1、2、3、4、5、6 mL分別置于10 mL容量瓶中，各加70% 乙醇至5 mL，精密加入5%的NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min；加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，振搖，放置6min；再加入4% NaOH 溶液2 mL，振搖并加70%乙醇至刻度，放置15min。以相應試劑做空白。按分光光度法(中國藥典2015年版通則0401)，在510 nm波長處測定吸光度，以吸光度值為縱坐標，溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。標準曲線及有關數據經統計處理后，其回歸方程為：y=12.71-0.0244(R2=0.999)。對照品在20～60 mg·L-1范圍內呈線性。蘆丁標準曲線參見圖2。

圖2 蘆丁標準曲線

2.5 正交試驗

2.5.1 正交試驗因素水平的確定

取9份白花鬼針草粉末，每份0.5 g，精密稱定，置50 mL燒瓶中，按正交試驗要求進行。試驗采用L9(34)正交設計表對乙醇濃度(A)、液料比(B)、提取時間(C)、提取溫度(D)四個因素進行考察。選定的因素水平見表1。

表1 正交試驗因素水平表

2.5.2 正交試驗結果

表2 正交試驗結果

從表中可知，影響提取工藝因素大小順序為A>D>B>C，即影響最顯著的因素為乙醇濃度，其次為提取溫度，而液料比和提取時間影響不顯著。由分析結果可知最佳提取工藝為A1B2C2D3。即30倍量50%乙醇，60℃超聲 30min。

為考察上述優先提取工藝的穩定性，按該工藝條件進行重復性實驗3次，分析測定鬼針草中總黃酮的含量，測定的結果均等于或優于正交試驗表中的任何一組，RSD(%)小于3%，說明該工藝穩定可行。

2.6 精密度試驗

精密吸取“2.1”項下對照品溶液3 mL，測定6次，按“2.4”項下方法操作，分別測定吸收度，結果見表3，吸收度RSD為0.28%，表明本試驗方法精密度良好。

表3 精密度試驗結果

2.7 穩定性試驗

精密吸取供試品溶液1 mL，按“2.4”項下方法操作，搖勻后于 0、10、20、30、40、50、60min 時分別測定吸收度，結果見表4 。

表4 穩定性試驗結果

2.8 重復性試驗

取藥材粉末，按“2.2”項下方法制備成供試品溶液6份，分別從中精確吸取1 mL，按“2.3”項下方法操作，測定吸收度。結果見表5，吸收度RSD 為0.58%，表明本試驗重現性良好。

表5 重復性試驗結果

2.9 加樣回收率試驗

取藥材粉末5份，準確稱定，再分別加入一定量蘆丁對照品，同法操作，在510 nm波長處測定吸收度，代入回歸方程中計算供試品含量，結果詳見表6。

表6 加樣回收試驗結果

2.10 樣品的含量測定

精密稱取不同批樣品各0.5 g，按最佳提取工藝制備樣品供試液，并根據回歸方程計算總黃酮含量。

表7 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 總黃酮測定方法的選擇

鬼針草藥材中的黃酮類成分主要以雙糖苷為主，根據相關文獻，我們選擇蘆丁為本實驗的對照品。在測定方法選擇上，我們對紫外分光光度法、AlCl3-CH3COOK顯色后比色法及NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色后比色法測定等三種常規的總黃酮含量測定方法進行了考察。

圖3 鬼針草紫外吸收圖譜

圖4 AlCl3-CH3COOK顯色條件下鬼針草、蘆丁紫外吸收圖譜

圖5 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色條件下鬼針草、 蘆丁紫外吸收圖譜

由圖3可知，紫外分光光度法實驗條件下，由于鬼針草藥材提取液的紫外圖譜無明顯的最大吸收，所以無法進行測定；由圖4可知AlC13-CH3COOK顯色條件下鬼針草藥材提取液無明顯的最大吸收；由圖5可知在NaNO2-Al-(NO3)3-NaOH顯色條件下，蘆丁和鬼針草藥材提取液均在510 nm處有最大吸收，所以選為本試驗的測定條件。

3.2 結論

研究表明[3]，鬼針草總黃酮具有顯著抗氧化、抑菌抗炎、保護肝、抗高血脂等作用，白花鬼針草含有豐富的黃酮，有著廣闊的開發前景，現代研究已部分闡明了鬼針草黃酮類成分和生物活性之間的聯系，因此對其化學成分和藥理作用進行深入研究，可進一步闡明其化學成分和臨床應用之間的聯系，對于新藥開發有著重要意義。

[1] 江蘇新醫學院.中藥大辭典(下冊)[M].上海：上海科學技術出版社,1986：1694.

[2] 沈藝瑋，林麗清，林新華，等 鬼針草的化學成分及藥理活性研究進展[J].福建醫科大學學報,2015,49(1):58-61.

[3] 王 祺，張燕娜，陳飛虎.鬼針草總黃酮的化學成分及藥理作用研究進展[J].安徽醫藥,2009,13(9):1011-1013.

(本文文獻格式：李洪芹.白花鬼針草總黃酮提取工藝研究[J].山東化工,2017,46(13):30-32.)

Study on Extraction Process of Total Flavonoids in Herba Bidentis Pilosa

LiHongqin

(Heze University,Heze 274015,China)

To study the optimum ethanol extraction process of total flavonoids in Herba Bidentis Pilosa.The extraction of total flavonoids was choosen as the assessment index. Ethanol volumn, solid-to-iquid ratio,extracting time and temperature were the studing factors. The optimum ethanol extraction process was selected with the orthogonal design. Experimental results showed:the best technological conditions of the experiment was that adding 30 fold of 50% ethanol,ultrasonic temperature of 60 ℃,extracting for 30min. and under the condition of the extraction rate was 6.51%.

Herba Bidentis Pilosa；total flavonoids；orthogonal design

2017-05-03

李洪芹(1987—)，女，助教，碩士，研究方向：生藥、中藥質量控制與品質評價。

TQ460.7

A

1008-021X(2017)13-0030-03