貝類標志技術的研究進展

周珊珊，王偉定，豐美萍，畢遠新，梁 君，張洪亮

（浙江海洋大學海洋與漁業研究所，浙江省海洋水產研究所，農業部重點漁場漁業資源科學觀測實驗站，浙江省海洋漁業資源可持續利用技術研究重點實驗室，浙江舟山 316021）

貝類標志技術的研究進展

周珊珊，王偉定，豐美萍，畢遠新，梁 君，張洪亮

（浙江海洋大學海洋與漁業研究所，浙江省海洋水產研究所，農業部重點漁場漁業資源科學觀測實驗站，浙江省海洋漁業資源可持續利用技術研究重點實驗室，浙江舟山 316021）

貝類標志技術已在貝類種群密度、死亡與資源補充、生長和遺傳等研究中廣泛應用，并已成為貝類種群估算、資源評估及分布調查的重要手段。目前，貝類標志技術的研究仍相對較少，且由于貝類多變的形態結構和復雜的生存環境，造成了標志技術的應用仍存在問題。本文對近年來國內外在貝類標志技術方面已取得的進展進行了綜述，并比較分析了幾種標志方法的優缺點，以期為我國貝類標志技術的應用與研究提供依據。

貝類；標志方法；物理標志；化學標志；生物標志；分子標志

世界上現存貝類11萬多種，其中大部分為海洋貝類，而我國目前已知的貝類約4 000余種，其中重要的經濟貝類包括皺紋盤鮑Haliotis discus hannai、文蛤Meretrix meretrix、魁蚶Anadara broughtonii、縊蟶Sinonovacula constricta、扇貝Pecten maximus等[1-2]。自上世紀50年代，英國的HANCOCK et al開展螺類的標志研究后，國內外學者分別開展了多種貝類標志方法的研究[3]。貝類標志是指在貝類內部或外部通過懸掛、卡入或染色等方式產生某種標識，從而進行標志個體間、標志種群與野生種群等進行區分，進而開展貝類生長、行為、死亡、種群動態、遺傳學等領域的后續研究。隨著近年來海洋牧場建設的興起，標志技術也作為貝類增殖放流效果評價的重要手段[4-5]。由于貝類種類多樣，存在貝殼形態、行為學、棲息環境的差異，且不同研究目的需要的標志保持時間不同，造成貝類標志技術的應用仍存在較大的問題。近年來，在浙江、山東、遼寧等地開展了文蛤、魁蚶、縊蟶、皺紋盤鮑等貝類的增殖放流,并已取得了明顯的經濟和生態效益[6-8]，但尚缺乏貝類標志技術的系統研究。

目前，國內外貝類常用的標志技術可以分為四類：（1）物理標志法（a.外部標志法，b.內部標志法）；（2）化學標志法；（3）生物標志法；（4）分子標志法。本文綜述了國內外四種標志方法的相關研究，并對其優缺點進行了比較，以期為今后貝類增殖放流標志技術的選擇提供依據，為貝類標志技術的研究奠定基礎。

1 物理標志法

1.1 外部標志法

掛牌標志方法是應用最廣泛的貝類標志技術，主要利用在殼上打孔或粘結劑黏貼等方式，將印有編碼的塑料標志掛于或粘貼于貝殼表面。JEREMY[9]最早利用鉚釘將編碼的塑料圓盤掛于鮑魚Haliotis rubra殼上，1 a后的脫簽率為4%～35%，標志易操作，對鮑魚刺激小，可作為鮑魚的有效標志方法。KIM et al[10]比較鉆孔標志、金屬線碼（銅絲）標志、螺母標志（圍鰓腔）、殼面粘貼螺母四種標志方法對鮑魚的標志效果，研究表明螺母標志法的標志率達96.6%，且對生長存活影響較小，是鮑魚的有效標志方法。利用貝類部分突出部位進行打孔掛牌標志，主要應用于扇貝、螺類等殼上具有突起的貝類的標志活動中[11,12]。通過在扇貝翼狀突起上打孔，將帶有編碼信息的lock塑料標簽穿于孔中，6個月的脫簽率為10%，這種標志方法俗稱為“打耳標志”[11]；在蛾螺Buccinum undatum螺殼邊緣打孔掛牌，也獲得了100%的標志保持率[12]。利用黏貼劑粘貼標志牌也是較常用的掛牌方法，其中常用的黏貼劑有氰基丙烯酸酯膠粘劑、環氧樹脂、牙粘固粉等[13]。LEMARIE et al[13]利用氰基丙烯酸酯膠粘劑進行珠蚌科貝類的貼牌標志，2年內的脫簽率僅為0.46%。ROSS et al[14]比較了刻畫標志、微型金屬絲、貼牌標志3種標志方法標志扇貝的標志效果，發現貼牌標志效果較好，且6種粘貼劑（標準環氧樹脂、快速環氧樹脂、防水環氧樹脂、牙粘固粉、氰基丙烯酸鹽粘合夜、氰基丙烯酸鹽粘合膠）中，快速環氧樹脂、氰基丙烯酸鹽粘合夜、氰基丙烯酸鹽粘合膠與貝殼的粘合速度快（1～3 min），其中氰基丙烯酸鹽粘合膠因操作簡單，對扇貝生長存活影響小，被認為是扇貝的最佳粘貼劑。VASCONCELOS et al[15]利用Dymo標牌標志骨螺Hexaplex trunculus，去除表面海水后，使用氰基丙烯酸鹽粘合劑粘貼標牌，再在標簽表面覆蓋一層環氧基樹脂。貼牌標志應注意選擇合適的標志牌黏貼部位，殼邊緣有放射肋凹槽的部位與平滑的殼頂部位相比，其標簽粘合更牢固[13-14]。國內學者發明了粘結粉和粘結液相混合的新型粘結方法、無毒透明環氧樹脂膠液直接涂覆于貝殼表面的標志方法[16-17]。掛牌標志方法具有以下優點：（1）無毒；（2）標志易辨別；（3）對被標志個體的生長發育無顯著影響；（4）攜帶詳細標志信息。缺點主要為：（1）操作繁瑣，需要化學腐蝕在貝殼表面形成凹陷來黏貼標簽；（2）貝類與底質的機械作用下標牌易脫落或標志信息易磨損；（3）不適用于小型貝類及幼貝的標志；（4）部分掛牌方法僅適用于特定貝類而難以推廣；（5）標牌過于明顯而導致標志個體易被敵害生物捕食。

標簽標志通常利用具有抗腐蝕耐磨特性的金屬標簽，將標簽卡入貝殼邊緣，標簽能隨著殼的生長逐漸被外套膜分泌的珍珠質包裹，從而與貝殼融為一體。MENKE[18]發明了“一種螺旋狀CLIP標簽”的標志方法，可應用于皺紋盤鮑、扇貝等貝類的標志放流。國內已利用不銹鋼簽在山東等地開展了鮑魚的標志工作，但尚未見相關的文獻報道。周珊珊[19]利用倒刺型不銹鋼標簽標志魁蚶幼貝，標簽保持率為64.25%（160 d），標簽對魁蚶幼貝的生長存活存在一定的負面影響。標簽標志方法具有以下優點：（1）無毒；（2）標志易辨別；（3）攜帶詳細標志信息。（4）標簽不易腐蝕、磨損。缺點主要為：（1）操作繁瑣，雙殼貝類麻醉開殼后才能進行卡簽操作；（2）標志初期，標簽易脫落；（3）對小型貝類及幼貝進行卡簽操作，易造成貝殼的破損；（4）損傷貝類軟體部，影響被標志個體的生長發育。

刻劃標志法是指利用電動砂輪、電刻筆等工具，刻劃貝殼表面或貝殼邊緣，從而形成缺刻、凹陷等標志信息，可以避免標志過于明顯而造成的標志個體被捕食的現象[20-21]。1970年ROPES et al[22]最早開展浪蛤Spisula solidissima的刻畫標志，ROSS et al[14]利用刻畫標志扇貝，KIM et al[10]開展了鮑魚的鉆孔標志。我國學者游奎等[4]利用電動砂輪對貝類殼邊緣進行缺刻標志，付龍龍等[23]利用電刻筆對三角帆蚌進行刻劃標志，顧炎斌[5]利用電刻筆對文蛤進行標志，刻畫標志通常在短期內標志清晰可見，標志保持率為100%?？虅潣酥揪哂幸韵聝烖c：（1）操作簡單，成本低廉；（2）應用廣泛，可用于多種貝類的標志；（3）無毒，不影響標志生物的生長存活。缺點主要為：（1）缺乏全面的標志信息；（2）易造成貝殼破碎等物理損傷。（3）破壞貝殼的角質層，碳酸鈣層易腐蝕造成標志模糊。

激光標志是一種新興的刻劃標志技術，利用激光發射器發射的高能激光束照射標志生物表面，將光能快速轉化為熱能，激光照射位置在高溫作用下瞬間熔融或氣化而形成標志，已廣泛應用于海洋捕撈、水產品加工、水產養殖、魚類激光標志等領域[24-25]。2012年，付龍龍等[26-27]首次利用四種強度的激光標志了三角帆蚌Hyriopsis cumingii，研究發現標志的位置和大小、激光強度會影響帆蚌的生長存活，標志大小0.65 cm，激光強度0.30 A，標志幼貝85日齡以上為三角帆蚌的最佳標志方法。2013年，顧炎斌利用激光雕刻機對文蛤進行激光標志，實現了計算機控制的自動化激光標志，激光標志速度可達30只/min，標志后60 d的標志保持率為100%，對文蛤生長存活無顯著影響[5]。目前激光標志貝類的研究仍較少，與傳統的刻劃標志相比，激光標志具有以下優點：（1）非接觸性標志，不產生機械損傷；（2）自動化程度高，標志速度快，成本低廉，可自定義標志信息。其缺點是：（1）標志操作人員素質要求高，需具備計算機操作能力；（2）不適于表面不光滑、具放射肋的種類；（3）對標志貝類造成一定程度的熱損傷。

1.2 內部標志法

新興的內部標志技術利用注射器、標志槍等標志設備將標志物植入貝類體內，再利用接收器進行標志識別。內部標志可以有效避免傳統外部標志法存在的標簽易脫落、磨損等缺點，而逐漸應用于貝類的標志放流活動，其主要包括微編碼線標志技術（CWT）、被動整合雷達標志技術（PIT）等。CWT為攜帶編碼的不銹鋼金屬絲，通過金屬探測器進行標志的識別，選擇適當的標志部位，掌握正確的操作技術可有效提高標志保持率[28-29]。貝類CWT標志的報道最早見于日本河蜆Corbicula japonica，CWT標志注入河蜆鉸合部肌肉后對其生存、軟體重、殼長、肥滿度無顯著影響，標簽保持率高達93%[28]。LAYZER et al[29]利用注射器將CWT標志注射到黑檀貝Fusconaia ebena鉸合部肌肉中，標志2 a后其存活率和標志保持率均為100%。鉸合部肌肉是雙殼貝類較常見的CWT標志注射位置，而利用黏貼劑粘貼金屬片至螺類殼頂部位具有較好的標志效果[30]。CWT具有以下優點：（1）金屬絲規格小，對貝類損傷較??；（2）標簽保持時間長；（3）無需捕撈標志個體，即可得到標志信息。缺點為：（1）金屬絲材質要求高，忌生銹；（2）植入過程繁瑣；（3）檢測距離限制，對穴居、底棲貝類的探測效果不佳。（4）檢測設備較貴。

PIT利用注射器將芯片植入貝類外套膜、組織中，通過固定或手持的無線電探測裝置激活芯片，激活后的芯片發射出編碼信息，再利用PIT探測裝置檢測水深2 m以內的芯片信號。LAYZER et al[31]將芯片植入北美珍珠蚌Lampsilis cariosa外套膜組織，標志保持率為93%，死亡率小于2%，回捕率高達95%。HALE et al[32]研究了3種芯片植入方式（殼背部粘貼、殼腹部粘貼、足部注射）對平托鮑魚Haliotis kamtschatkana標志效果的影響，發現不同植入方式對鮑魚的生長存活均無影響，而注射芯片法的標志保持率顯著低于粘貼法的標志保持率；殼腹部粘貼芯片的標志效果較好，主要是由于腹部的PIT逐漸被外套膜分泌的珍珠質層包裹，且包裹后不影響標志的識別，獲得了較高的標志保持率。PIT標志的主要優勢包括：（1）可以有效提高放流個體的回捕率；（2）標簽保持時間長；（3）無需捕撈標志個體，即可得到標志信息，可實時監測標志貝類的活動情況。缺點為：（1）芯片、探測設備價格昂貴；（2）芯片植入過程繁瑣；（3）植入芯片對貝類造成生理損傷；（4）芯片規格較大，僅適用于大個體貝類，應用具有局限性；（5）有檢測距離限制2～150 cm），對穴居、底棲貝類的探測效果不佳。

2 化學標志法

2.1 熒光染料標志

化學標志法通常利用染料涂抹或浸泡貝殼，從而在貝殼上形成顏色標志，目前主要利用的化學染料包括油漆涂抹、鐵銹覆蓋、熒光染料等。其中，熒光標志法是大規模標志活動中應用最廣泛的標志方法，通常選用無毒或毒性甚微的熒光染料，通過浸泡、注射等方式使熒光染料與鈣離子發生絡合反應，可在貝殼表面形成長久的顏色標志，顏色標志在一定波長光源照射下激發出熒光[33]。常用的熒光染料包括茜素紅S（alizarin red S）、鈣黃綠素（calein）、茜素絡合指示劑（alizarin complexone）等，而氧四環素（oxytetracycline）、四環素（tetracycline）等抗生素藥物因不利于水產品安全而逐漸被淘汰[34-36]。國外學者利用熒光標志后標志殼與新生組織、新生殼顏色的差異，開展了貝類幼體器官、貝殼的分化生長過程的研究[34-35,37]。熒光染料對貝類不同生長階段的標志效果不同，如中性紅染色標志斧蛤D型幼蟲的標志效果較好，而斧蛤、布氏蚶稚貝則以茜素紅S標志效果最佳[34]。鈣黃綠素是標志浪蛤最好的生長標志物，不影響浪蛤的存活生長，生長速度為20 d生長23 mm，SrCl2、茜素紅的標志效果則無法觀察或較不清晰[35]。此外，國內外學者利用鈣黃綠素成功標志了扇貝幼貝[37]、小型貝類滿月蛤Loripes lacteus[38]、貽貝Mytilus trossulus幼蟲[39]、澳大利亞河蚌Westralunio carteri[40]、青口貝Perna canaliculus幼蟲[41]，利用鈣黃綠素和考馬斯亮藍成功標志珠母貝Pinctada mazatlanica[42-43]。

目前國內外將熒光標志應用于貝類增殖放流的研究較少，可能與貝類增殖放流活動興起時間較晚有關。相比于生長速度的相關研究，應用于增殖放流活動的熒光標志方法應具有標志色保持時間更持久的特性，因此相關研究中熒光染料的濃度、浸泡時間、標志色保持時間等均有相應的增加或提高。LUCAS et al[44]首次將熒光標志應用于增殖放流工作，利用氧四環素（500 mg/L）、茜素紅S（10～20 mg/L）、鈣黃綠素（10～50 mg/L）三種熒光染料標志碟扇貝Amusium balloti幼蟲（2～15 mm），研究表明氧四環素可以有效標志碟扇貝，且熒光標志可保持10個月；鈣黃綠素標志的熒光標志幾個月后衰減消失，使用高濃度的鈣黃綠素標志可能增加鈣黃綠素熒光標志的保持時間；茜素紅S標志造成了扇貝幼蟲的大量死亡，未能有效標志扇貝幼蟲。此外，國內外學者成功利用鈣黃綠素（250 mg/L）標志了河蚌，茜素紅S（200、300 mg/L）和鈣黃綠素（200、300 mg/L）成功標志了魁蚶幼貝，獲得了較長的標志保持時間，可以用于后續增殖放流的標志活動。

熒光標志的標志效果，與染料種類、貝類種類、貝類大小等因素決定。鈣黃綠素標志鮑魚幼貝[33]、浪蛤[35]、碟扇貝[45]等貝類的標志效果優于四環素類染料、茜素紅S等，主要與四環素類染料、茜素紅S等染料產生的熒光與這些貝類貝殼的自身熒光波長接近，無法準確區分有關；鈣黃綠素可以成功標志含有黑色角質層的貝類，如澳大利亞河蚌、綠唇貝Perna canaliculus等[40-41]，但尚沒有茜素紅S成功標志黑色角質層貝類的相關報道；鈣黃綠素標志對魁蚶幼貝、鮑魚幼貝、貽貝幼蟲、扇貝幼蟲、青邊貽貝Perna perna等多數貝類的生長存活無顯著影響，茜素紅S標志對魁蚶幼貝、鮑魚幼貝的生長存活無顯著影響，而茜素紅S標志青邊貽貝則具有較高的死亡率[33,39,44-47]。因此，針對目標貝類進行熒光標志時，應選擇適宜的染料和貝類規格，并開展染料毒性試驗以獲得好的標志效果。熒光標志主要具有以下優點：（1）具有操作方法簡單快速，價格低廉；（2）毒性小；（3）標志保持率高、保留時間長，適用于進行貝類增殖放流大規模標志。其缺點是：（1）攜帶信息量低，只能標志放流群體，無法區分放流個體；（2）其標志色影響其食用和經濟價值；（3）標志初期鮮明的標志色導致標志貝類易被敵害生物捕食。

2.2 其它染料標志

油漆、染料、鐵銹等染料涂抹于貝類表面，形成顏色標記也是目前應用較廣泛的標志方法。HANCOCK et al[3]最早利用油漆涂于海螺Buccinum undatum殼面進行標記；ITO[48]利用貼牌-油漆標記、掛牌-油漆標記進行日本浪蛤Pseudocardium sybillae的標志，發現兩種標志方法結合的標志效果優于單一標志方法，貼牌-油漆標記法為浪蛤的最佳標志方法；KESLE et al[49]利用krylon染料（白底漆和熒光橙）成功標志淡水貝類（Elliptio complanata、Lampsilis radiata）。染料覆蓋標志具有以下優點：（1）成本低廉，應用廣泛，可用于多種貝類的標志；（2）對貝類生長存活影響?。唬?）標志易辨認。其缺點是：（1）操作繁瑣，攜帶標識信息少；（2）染料易受海水腐蝕或貝類移動而磨損脫落。KOSHIKAWA et al[50]利用鐵銹附著法標志雜色蛤Ruditapes philippinarum，標志蛤附著的鐵銹厚度約16 μm，可以肉眼識別標志貝，且鐵銹標志法對雜色蛤的生長存活無顯著差異，標志雜色蛤底播于潮間帶270 d后的標志保持率為83.7%，獲得了較好的標志效果和較高的回捕率。鐵銹標志法具有無毒、易肉眼辨認、操作方便快速等顯著優勢，但國內尚無鐵銹法應用于增殖放流標志、貝類生長的相關研究報道，應加強鐵銹法在我國增殖放流標志活動中的應用。

3 生物標志和分子標志法

生物標志利用生物的形態學、生態分布等特征差異來區分不同生物群體，其對標志生物的生長存活無影響、標志成本低或無成本，具有一定的標志優勢，但目前報道的生物標志的方法較少。國內外學者利用文蛤不同種群殼色花紋的差異進行文蛤的生物標志，利用餌料造成的貝殼顏色差異標志蠑螺屬Turbo spp.、鮑螺屬Haliotis spp.貝類，利用光照造成的貝殼顏色差異標志紫貽貝Mytilus edulis[51-54]。生物標志方法的優點是：（1）標志成本低廉，不影響標志個體的生長發育；（2）無毒，不影響標志貝類經濟價值；（3）標志色永久保持。缺點是：（1）只能標志特定種類的貝類，應用局限；（2）缺乏全面的標志信息；（3）標志所需時間長。

分子標志技術伴隨分子生物技術的產生而迅速發展，利用生物的DNA水平多態性特征，可以用于追蹤放流生物、區分不同放流群體及分析回捕群體與放流群體間親緣關系等研究，可以準確評估增殖放流效果[55-57]。目前應用較多的兩種分子標志技術為線粒體DNA標志（mtDNA）和微衛星標志（SSR），主要應用于長牡蠣Crassostrea gigas[58]、海灣扇貝Argopecten irradians[59]、皺紋盤鮑[60]、蝦夷扇貝Patinopecten yessoensis[61]、魁蚶[62]等貝類的標志。分子標志具有受環境影響小，穩定性高，比形態標志更準確的優點，但存在需要進行微衛星、線粒體DNA標志位點篩選且檢測成本高等缺點，這就制約了分子標志技術在增殖放流活動中的廣泛應用。

4 貝類常用標志方法圖示

由于貝類增殖放流成活率高，近年來貝類的增殖放流均取得了較好的經濟和生態效益，在浙江省各種海珍品與貝螺類底播增殖中，以厚殼貽貝比重較大，成為新增主流放流品種，其放流數量在“十一五”期間得到了快速增長[63]。此外，從東海區的情況出發，應根據海域環境條件選擇適宜的貝類增殖品種，目前浙江沿岸放流較多的品種還包括荔枝螺、縊蟶等沿岸灘涂底播增殖貝類[64]。山東省的貝類增殖品種則較為豐富，主要增殖品種包括文蛤、菲律賓蛤仔Ruditapes philippinarum、青蛤Cyclina sinensis、毛蚶Scapharca subcrenata、牡蠣 Ostrea gigas thunberg、魁蚶、竹蟶 Solen strictus、縊蟶等沿海護養的灘涂貝類，櫛孔扇貝Chlamys farreri、蝦夷扇貝、皺紋盤鮑、刺參Stichopus japonicus、海膽、紫石房蛤Saxidomus purpuratus等底播增殖的海珍品。然而國內對貝類標志技術的研究仍然停留在簡單的物理標志技術，主要應用的包括打孔掛牌標志、黏貼掛牌標志、缺刻標志等，通常具有標志簡單、成本低的特點，但又存在標志易脫落、攜帶的標志信息少等缺陷，而科技含量高的物理標志如微編碼線標志技術（CWT）、被動整合雷達標志技術（PIT）、激光標志等方法較大程度提高了標志的保持效果，并具備了一定的標志追蹤功能，但存在費用較高等應用瓶頸。國內在化學標志、生物標志及分子標志的應用更加欠缺。作為理想的貝類標志方法應該有如下的特點：（1）標志保持時間長，不易脫落、褪色；（2）標志易識別；（3）對標志貝類生理行為等損傷??；（4）標志過程易操作；（5）標志成本低；（6）標志攜帶信息量大；（7）可以在不殺死貝類的情況下跟蹤標志信息。目前所采用的貝類標志方法大多只能滿足部分研究的要求，迄今為止還未發現一種可以適用于貝類各方面研究的理想標志方法，仍有待于科技工作者進一步探索。

圖1 幾種標志方法示意圖Fig.1 Shells with different marking method

[1]孫振興,常林瑞.貝類種質資源保護研究進展[J].海洋湖沼通報,2005(3):103-108.

[2]王如才,王昭萍,張建中.海水貝類養殖學[M].青島:青島海洋大學出版社,1993.

[3]HANCOCK D A,Urquhart A E.Methods for marking whelks(Buccinum undatum L.)[J].Journal du Conseil,1959,24(3):494-496.

[4]游 奎,遲旭朋,馬彩華,等.一種貝類標志放流貝殼缺刻標記方法:中國,102428886A[P].2012-05-02.

[5]顧炎斌.東營文蛤生態學調查及其標志放流技術研究[D].青島:中國海洋大學,2013.

[6]尤仲杰,徐善良,謝起浪.浙江沿岸的貝類資源及其增養殖[J].東海海洋,2000,18(1):50-56.

[7]高緒生,張 明,李世英,等.大連近海皺紋盤鮑的放流增殖效果[J].水產科學,1996,15(1):7-9.

[8]劉莉莉,萬 榮,段媛媛,等.山東省海洋漁業資源增殖放流及其漁業效益[J].海洋湖沼通報,2008(4):91-98.

[9]PRINCE J D.A new technique for tagging abalone[J].Australian Journal of Marine and Freshwater Research,1991,42(1):101-106.

[10]KIM B S,LEE Y H,PARK D W.Effects of the tagging methods on the growth and survival of abalone juvenile,Haliotis discus hannai[J].Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences,2002,35(3):282-288.

[11]BRAND A R,MURPHY E J.A tagging study of north Irish Sea scallop(Pecten maximus)populations:comparisons of an inshore and an offshore fishing ground[J].Journal of Medical and Applied Malacology,1992,4:153-164.

[12]KIDEYS A E.Effect of tagging on the growth rate of the neogastropod,Buccinum undatum in the laboratory[J].Fisheries research,1994,20(2/3):283-289.

[13]LEMARIE D P,SMITH D R,VILLELLA R F,et al.Evaluation of tag types and adhesives for marking freshwater mussels(Mollusca:Unionidae)[J].Journal of Shellfish Research,2000,19(1):247-250.

[14]ROSS K A,THORPE J P,NORTON T A,et al.An assessment of some methods for tagging the great scallop,Pecten maximus[J].Journal of the Marine Biological Association of the UK,2001,81(6):975-977.

[15]VASCONCELOS P,GASPAR M B,PEREIRA A M,et al.Growth rate estimation of Hexaplex(Trunculariopsis)trunculus(Gastropoda:Muricidae)based on mark/recapture experiments in the Ria Formosa lagoon(Algarve coast,southern Portugal)[J].Journal of Shellfish Research,2006,25(1):249-256.

[16]駱 軒,柯才煥.一種用于貝類標記的粘結劑及其制備方法:中國,101070457[P].2007-11-14.

[17]丁 君,常亞青,郝振林,等.貝類標記方法:中國,102835337A[P].2012-12-26.

[18]MENKE G.Method of tagging a shellfish and a detectable shellfish produced by such a method:US,7552700[P].2009-06-30.

[19]周珊珊.魁蚶幼貝生境選擇及標志技術研究[D].青島:中國海洋大學,2015.

[20]VILLELLA D R,WELLER D A.Evaluation of tag types and adhesives for marking freshwater mussels[J].Journal of Shellfish Research,2000,1(19):247-250.

[21]LAYZER J B,HEINRICHER J R.Coded Wire Tag Retention in Ebonyshell Mussels Fusconaia ebena[J].North American Journal of Fisheries Management,2004(24):228-230.

[22]ROPES J W,MERRILL A S.Marking Surf Clams[J].Proc Natl Shellfish Ass,1970,60:99-106.

[23]付龍龍,李家樂,白志毅,等.四種物理標志對三角帆蚌生長存活的影響[C]//中國水產學會學術年會論文摘要集,2011(1):137.

[24]HAYAKAWA H.A laser method for marking bar codes on glass substrates[M]//Proceedings of SPIE.Bellingham,Wash,USA:SPIE,2000,4088:363-366.

[25]張堂林,李鐘杰,舒少武.魚類標志技術的研究進展[J].中國水產科學,2003,10(3):246-253.

[26]李家樂,付龍龍,白志毅,等.一種貝類激光標記方法:中國，102124971A[P].2011-07-20.

[27]FU Longlong,BAI Zhiyi,JIN Wu,et al.Evaluation of laser labeling on growth and survival of the freshwater pearl mussel,Hyriopsis cumingii[J].Aquaculture International,2012,20(3):431-441.

[28]LIM B K,SAKURAI N.Marking Method for Brackish Water Clam,Corbicula japonica,with Coded Wire Tag[J].水産増殖,1999,47(2):303-304.

[29]LAYZER J B,HEINRICHER J R.Coded Wire Tag Retention in Ebonyshell Mussels Fusconaia ebena[J].North American Journal of Fisheries Management,2004(24):228-230.

[30]CROWE T P,DOBSON G,LEE C L.A novel method for tagging and recapturing animals in complex habitats and its use in research into stock enhancement of Trochus niloticus[J].Aquaculture,2001,194(3):383-391.

[31]LAYZER J,LOFTIN C,ZYDLEWSKI J,et al.PIT tags increase effectiveness of freshwater mussel recaptures[J].Journal of the North American Benthological Society,2007,2(26):253-260.

[32]HALE J R,BOUMA J V,VADOPALAS B,et al.Evaluation of passive integrated transponders for abalone:Tag placement,retention,and effect on survival[J].Journal of Shellfish Research,2012,31(3):789-794.

[33]DAY R W,WILLIAMS M C,HAWKES G P.A comparison of fluorochromes for marking abalone shells[J].Marine and Freshwater Research,1995,46(3):599-605.

[34]林元華.海洋生物標志放流技術的研究狀況[J].海洋科學,1985,9(5):54-58.

[35]HERRMANN M,CARSTENSEN D,FISCHER S,et al.Population structure,growth,and production of the wedge clam Donax hanleyanus(Bivalvia:Donacidae)from northern Argentinean beaches.[J].Journal of Shellfish Research,2009,28(8):511-526.

[36]MONAGHAN J P Jr.Comparison of Calcein and Tetracycline as Chemical Markers in Summer Flounder[J].Transactions of the American Fisheries Society,1993,122(2):298-301.

[37]THEBAULT J,CHAUVAUD L,CLAVIER J,et al.Evidence of a 2-day periodicity of striae formation in the tropical scallop Comptopallium radula using calcein marking[J].Marine Biology,2006,149(2):257-267.

[38]VAN DER GEEST M,VAN GILS J A,VAN DER MEER J,et al.Suitability of calcein as an in situ growth marker in burrowing bivalves[J].Journal of Experimental Marine Biology and Ecology,2011,399(1):1-7.

[39]MORAN A L,MARKO P B.A simple technique for physical marking of larvae of marine bivalves[J].Journal of Shellfish Research,2005,24(2):567-571.

[40]KLUNZINGER M W,BEATTY S J,MORGAN D L,et al.Age and growth in the Australian freshwater mussel,Westralunio carteri,with an evaluation of the fluorochrome calcein for validating the assumption of annulus formation[J].2014,33(4):1 127-1 135.

[41]FITZPATRICK M P,JEFFS A G,DUNPHY B J.Efficacy of calcein as a chemical marker of green-lipped mussel(Perna canaliculus)larvae and its potential use for tracking larval dispersal[J].Aquaculture Research,2013,44(3):345-353.

[42]LORIA P L M,HUATO-SOBERANIS L.Efficacy of calcein and Coomassie Blue dyeing of shell growing-edges and micro growth-bands:Ageing juvenile of Pinctada mazatlanica(Pterioida:Pteriidae)[J].International Journal of Tropical Biology and Conservation,2014,62(3):957-968.

[43]LINARD C,GUEGUEN Y,MORICEAU J,et al.Calcein staining of calcified structures in pearl oyster Pinctada margaritifera and the effect of food resource level on shell growth[J].Aquaculture,2011,313(1/4):149-155.

[44]LUCAS T,PALMER P J,WANG Sizhong,et al.Marking the shell of the saucer scallop Amusium balloti for sea ranching using oxytetracycline,calcein and alizarin red S[J].Journal of Shellfish Research,2008,27(5):1 183-1 188.

[45]ZHOU Shanshan,ZHANG Xiumei,LI Wentao,et al.Experimental evaluation of fluorescent(alizarin red S and calcein)and clip-tag markers for stock assessment of ark shell,Anadara broughtonii[J].Chinese Journal of Oceanology and Limnology,2017,35(2):265-274.

[46]KAEHLER S,MCQUAID C D.Use of the fluorochrome calcein as an in situ growth marker in the brown mussel Perna perna[J].Marine Biology,1999,133(3):455-460.

[47]CHICK R C.Batch-tagging blacklip abalone(Haliotis rubra)for identification of hatchery-reared individuals on natural coastal reefs in New South Wales,Australia[J].Journal of Shellfish Research,2010,29(1):209-215.

[48]ITO H.Marking methods for japanese surf clams,Pseudocardium sybillae[J].Bull Hokkaido Reg Fish Res Lab,1985,50:117-129.

[49]KESLER D H,DOWNING J A.Internal shell annuli yield inaccurate growth estimates in the freshwater mussels Elliptio complanata and Lampsilis radiata[J].Freshwater Biology,1997,37(2):325-332.

[50]KOSHIKAWA Y,HAGIWARA K,LIM B K,et al.A New Marking Method for Short Necked Clam Ruditapes philippinarumwith Rust[J].Fisheries Science,1997,63(4):533-538.

[51]李太武,張安國,蘇秀榕.文蛤花紋的形態及形成觀察[J].動物學雜志,2008,43(6):83-87.

[52]OLSEN D.Banding patterns of Haliotis rufescens as indicators of botanical and animal succession[J].Biological Bulletin,1968,134:139-147.

[53]SEED R.The ecology of Mytilus edulis L.(Lamelli branchiata)on exposed rocky shores I.Breeding and settlement[J].Oecologia,1969,3(3):277-316.

[54]HAHN K O.Handbook of the culture of abalone and other marine gastropods[M].Florida,USA:Boca Raton,1989.

[55]SEKINO M,SAITOH K,YAMADA T,et al.Genetic tagging of released Japanese flounder(Paralichthys olivaceus)based on polymorphic DNA markers[J].Aquaculture,2005,244:49-61.

[56]村上倫哉,相田聡,吉岡孝治,等.放流メバルの識別標識としてのミトコンドリアDNA塩基配列およびマイクロサテライトDNA多型の有効性[J].Nippon Suisan Gakkaishi,2006,72(4):710-716.

[57]OBATA Y,IMAI H,KITAKADO T,et al.The contribution of stocked mud crabs Scylla paramamosain to commercial catches in Japan,estimated using a genetic stock identification technique[J].Fisheries Research,2006,80:113-121.

[58]李 琪,木島明博.長牡蠣(Crassostrea gigas)微衛星克隆快速分離及特性分析[J].海洋與湖沼,2004,35(4):364-370.

[59]ZHAN Aibin,BAO Zhenmin,WANG Xiaolong,et al.Microsatellite markers derived from bay scallop Argopecten irradians expressed sequence tags[J].Fisheries Science,2005,71(6):1 341-1 346.

[60]曹 潔,常亞青,丁 君,等.皺紋盤鮑(Haliotis discus hannai)微衛星DNA的篩選與引物設計[J].農業生物技術學報,2006,14(3):448-449.

[61]李春艷,丁 君,常亞青,等.蝦夷扇貝微衛星標記的分離及其養殖群體的遺傳結構分析[J].中國水產科學,2009,16(1):39-46.

[62]孔曉瑜,姜艷艷,相建海,等.魁蚶線粒體16S rRNA和COI基因片段序列測定及其應用前景[J].海洋科學,2001,21(12):46-48.

[63]陶 蕾,王偉定.舟山海域“十一五”漁業資源增殖放流現狀對策分析[J].浙江海洋學院學報:自然科學版,2011,30(5):436-442.

[64]王偉定,俞國平,梁 君,等.東海區適宜增殖放流種類的篩選與應用[J].浙江海洋學院學報:自然科學版,2009,28(4):379-383.

A Review of the Marking Methods Used in the Study of Shellfish

ZHOU Shan-shan,WANG Wei-ding,FENG Mei-ping,et al
(Marine and Fishery Institute of Zhejiang Ocean University,Marine Fisheries Research Institute of Zhejiang Province,Scientific Observing and Experimental Station of Fishery Resources for Key Fishing Grounds,MOA,Key Laboratory of Sustainable Utilization of Technology Research for Fishery Resources of Zhejiang Province,Zhoushan 316021,China)

Shellfish marking technology was widely used in shellfish population density,and resource recruitment,growth and genetic researches,and has become a shellfish population estimates,resource assessment,as well as an important means of migration and distribution.Nowadays,the studies in shellfish marking methods was relatively few,and still have difficult in shellfish marking because of the different shell type and complex habitat.This review briefly summarized the progress of research on shellfish marking methods,and the advantages and disadvanlages of using each marking method was discussed.We hope this review will support the application and research of shellfish marking method.

shellfish;marking methods;physical marking;chemical marking;biological marking;molecular marking

S932.6

A

1008－830X(2017)02－0172－08

2017-01-10

農業部公益性行業（農業）科研專項經費（201303047）

周珊珊（1988-），女，青海西寧人，博士，研究方向：海洋生態修復.E-mail:muxihuashan@126.com

王偉定.E-mail:wdwang@sohu.com