高效液相色譜法測(cè)定鹽酸氟桂利嗪片的含量

張一男

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了鹽酸氟桂利嗪片中鹽酸氟桂利嗪的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（70∶30）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。鹽酸氟桂利嗪在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鹽酸氟桂利嗪的平均回收率為99.1%，RSD為0.89%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸氟桂利嗪片中鹽酸氟桂利嗪的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：鹽酸氟桂利嗪片；鹽酸氟桂利嗪；含量

鹽酸氟桂利嗪片是一種鈣通道阻斷劑。鹽酸氟桂利嗪片能防止因缺血等原因?qū)е碌募?xì)胞內(nèi)病理性鈣超載而造成的細(xì)胞損害。鹽酸氟桂利嗪片對(duì)血管收縮物質(zhì)引起的持續(xù)性血管痙攣有持久的抑制作用，尤其對(duì)基底動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈明顯，其作用比腦益嗪強(qiáng)15倍。鹽酸氟桂利嗪片主要治療腦供血不足、椎動(dòng)脈缺血、腦血栓形成后等，輔助治療癲癇。本文采用高校液相測(cè)定了鹽酸氟桂利嗪片中鹽酸氟桂利嗪的含量。

1 儀器與試藥

CC-304Bvpc單加熱型高溫不銹鋼槽（北京賽美思儀器設(shè)備有限公司）；HS-1超聲波清洗器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；PTX-FA110萬分之一天平（上海鑫倉電子科技有限公司）；Dura 12/24超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；優(yōu)普杜伯特UP-DBT-III實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)（西安優(yōu)普儀器設(shè)備有限公司）；屹譜儀器U-1810準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；LC3000高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）。鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（南京維之誠化學(xué)試劑有限公司）、乙醇（南京維之誠化學(xué)試劑有限公司）、磷酸氫二鈉（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、磷酸（南京維之誠化學(xué)試劑有限公司）、甲醇（武漢市偉琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（濟(jì)南英出化工科技有限公司）、磷酸二氫鉀（啟東市名成化工有限公司）、三乙胺（啟東市名成化工有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（70∶30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按鹽酸氟桂利嗪峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取鹽酸氟桂利嗪片，研細(xì)，精密稱取，加流動(dòng)相超聲處理5分鐘，放冷，濾過，濾液置25ml量瓶中，用流動(dòng)相分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品約5mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含10μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取除鹽酸氟桂利嗪的原輔料，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在鹽酸氟桂利嗪出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5、10、15、20、25、30、35、40、45、50μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.72%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的鹽酸氟桂利嗪片樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.63%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品鹽酸氟桂利嗪峰面積積分值的RSD為0.75%。結(jié)果表明鹽酸氟桂利嗪至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.1%，RSD為0.89%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定鹽酸氟桂利嗪片三批樣品中鹽酸氟桂利嗪的含量，含量為標(biāo)示量的99.1%、100.3%、98.5%。

3 討論

分別考察甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（70∶30），甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（80∶20），乙腈-甲醇-0.025moL磷酸二氫鉀（磷酸調(diào)節(jié)至pH3.0）（10：10：80），甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至7.0）（75∶25），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調(diào)pH至3.0）（20：80）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（70∶30）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-0.02mol/L磷酸二氫銨（0.1%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（70∶30）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸氟桂利嗪片中鹽酸氟桂利嗪的含量測(cè)定。鹽酸氟桂利嗪片中鹽酸氟桂利嗪的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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