高效液相色譜法測定金果欖中鹽酸藥根堿與鹽酸巴馬汀含量

齊政濤

摘 要：本文采用高校液相測定了金果欖中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（28：72）為流動(dòng)相，檢測波長為348nm；鹽酸藥根堿在10～40μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；鹽酸巴馬汀在50～300μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀的平均回收率分別為99.8%、99.6%，RSD為0.79%（n=6）、0.85%（n=6）；此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于金果欖中鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀的含量測定。

關(guān)鍵詞：金果欖；鹽酸藥根堿；鹽酸巴馬汀

金果欖別名為金楛欖（《藥性考》）、金苦欖（《柑園小識(shí)》）、地苦膽（《四川中藥志》）、金牛膽（廣州部隊(duì)《常用中草藥手冊》）、天鵝蛋（《分類草藥性》）、黃金古（《廣西中草藥》）、九龍膽（《南方主要有毒植物》）、金欖（《陸川本草》）、雪里開（《江西草藥》）等。金果欖，性味苦寒，有清熱解毒，利咽，止痛之功效。《藥性考》記載：“解毒。咽喉痹急，口爛宜服。疽癰發(fā)背，焮赤疔瘯，蛇蝎蟲傷，磨涂。治目痛，耳脹，熱嗽，嵐瘴，吐衄，一切外癥。”金果欖常用于咽喉腫痛、痢疾、癰疽疔毒、泄瀉、脘腹疼痛。金果欖含青牛膽苦素（tinosporine，columbin）、巴馬亭（palmatine）、鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀等成分。本文采用高校液相測定了金果欖中鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的含量。

1 儀器與試藥

HH-601超級恒溫水浴（江蘇金壇市億通電子有限公司）；320 XT 電子分析天平（上海精科天美貿(mào)易有限公司）；U-1901 雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；EX1600四元低壓梯度液相色譜儀（南京科捷分析儀器有限公司）；TBL10-250C雙頻加熱型超聲波清洗器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；Histoon Lab I-05實(shí)驗(yàn)室超純水器（科爾頓（中國）有限公司）。鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（連云港軒源化工有限公司）、醋酸（上海方野化工有限公司）、甲醇（連云港軒源化工有限公司）、磷酸二氫鉀（上海方野化工有限公司）、十二烷基硫酸鈉（連云港軒源化工有限公司）、庚烷磺酸鈉（連云港軒源化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果[1-5]，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（28：72）；檢測波長為348nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按鹽酸巴馬汀峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取金果欖適量，精密稱量，置圓底燒瓶中，加甲醇適量，回流提取1小時(shí)，放置至室溫，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至25毫升容量瓶內(nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿對照品2mg、15mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為10μg·mL-1、15μg·mL-1、20μg·mL-1、25μg·mL-1、30μg·mL-1、35μg·mL-1、40μg·mL-1的鹽酸藥根堿對照品溶液，制備濃度為50μg·mL-1、100μg·mL-1、150μg·mL-1、200μg·mL-1、250μg·mL-1、300μg·mL-1的鹽酸巴馬汀對照品溶液。分別按鹽酸藥根堿、鹽酸巴馬汀的測定參數(shù)繼續(xù)測定。以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，鹽酸藥根堿在10～40μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；鹽酸巴馬汀在50～300μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對照品溶液，分別精密吸取鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀對照品溶液重復(fù)測定6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD分別為0.76%和0.73%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批金果欖樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，RSD值為0.85%，0.81%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4h進(jìn)樣測定，供試品鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀峰面積的RSD分別為0.73%和0.82%。結(jié)果表明鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量，計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率分別為99.8%和99.6%，RSD分別為0.79%和0.85%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定金果欖三批樣品中鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀的含量，結(jié)果三批樣品的鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀含量分別為4.3mg·g-1、4.5mg·g-1、4.2mg·g-1和8.1mg·g-1、8.2mg·g-1、8.3mg·g-1。

3 討論

分別考察乙腈-1.0%醋酸溶液（32∶68），甲醇-乙腈-水（40：30：30），水-乙腈（50∶50，每100mL中含磷酸二氫鉀0.34g，十二烷基硫酸鈉0.17g），乙腈-0.05mol/L KH2PO4緩沖液（30：70），乙腈-0.5%磷酸（20∶80），50mmol.L-1磷酸二氫鈉（pH4.6）-乙腈（70∶30），乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（28：72）洗脫，結(jié)果以乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（28：72）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-25mmoL·L-1庚烷磺酸鈉和50mmoL·L-1磷酸二氫鉀溶液（含0.14%三乙胺，磷酸調(diào)pH至3.0）（28：72）為流動(dòng)相。

參考文獻(xiàn)

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