HPLC法測定口腔潰瘍膜中氫化可的松的含量

孫宇

摘 要：目的：對口腔潰瘍膜里面具有的松含量手段進行了檢測。方法：實驗人員利用高效液相色譜法來對口腔潰瘍膜里面具有的松含量進行檢測的，色譜柱是SinochromODS-BP柱，流動相作為乙腈-水（50∶50），檢測波長設置為245nm，產生的流速是1.0mL·min-1的范圍，進樣量控制在10μL左右。結果：氫化可存在的松進樣量控制在0.2092～1.5690μg的范圍里面都會和鋒面面積分值處于良好的狀態（r=0.9999）；在高處的回收率是102.8%（RSD=1.59%）、在中處得到的回收率是102.4%（RSD=1.35%）、低處得到的回收率是102.9%（RSD=0.77%）。結論：實驗人員采取該方法有著諸多的優勢，例如操作簡單、得到的結果具有準確性等，值得大力的推廣。

關鍵詞：高效液相色譜法；口腔潰瘍膜；氫化可的松；含量測定

通常情況下，氫化可的松屬于激素類藥物之一，有著諸多的優點，例如起到抗炎的作用，達到抗休克的效果，經常使用到腎上腺皮質功能減退癥較為適合，在相關領域得到了普遍的認可。因為口腔潰瘍膜在該醫院的制劑室中進行制備的，可以實現消炎的目的，達到止痛的效果，對患者存在的口腔潰瘍可以起到治療的作用。該制劑是在1990年期間記載的，其質量標準當中不涵蓋含量測量這一項。為了對該制劑的質量做好科學的控制，筆者需要使用了高效液相色譜法（HPLC）來對口腔潰瘍膜中氫化可具有的松含量進行檢測得到幾點結論，現報告如下。

1 試驗準備和方法

1.1 儀器與試藥

600HPLC系統、2996二極管陣列檢測器、717plus自動進樣器、Empower數據管理系統；十萬分之一電子天平；萬分之一電子天平；超聲波清洗儀；超純水器。

氫化可的松對照品；口腔潰瘍膜；甲醇、乙腈為色譜純，水為超純水。

1.2 色譜條件

色譜柱：SinochromODS-BP柱（250mm×4.6mm，5um）；流動相：乙腈-水（50∶50）；檢測波長：245nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：25℃；進樣量：10μL。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取氫化可的松對照品52.3mg，置于100mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成氫化可的松對照品貯備液（氫化可的松濃度為0.5230mg·mL-1）。精密量取對照品貯備液5mL，置于25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成氫化可的松對照品供試液（氫化可的松濃度為0.1046mg·mL-1）。

1.3.2 供試品溶液的制備

取口腔潰瘍膜5片（約相當于氫化可的松9.25mg），置于100mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（氫化可的松濃度為0.0925mg·mL-1）。

1.3.3 線性關系考察

取氫化可的松對照品溶液（0.1046mg·mL-1），經針頭過濾器過濾后進樣，在軟件內設置使自動進樣器將樣品按2、4、8、10、12、15？滋L的體積依次進樣，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標，氫化可的松對照品進樣量（X）為橫坐標，繪制標準曲線，擬合回歸方程，得A=2.70×106X+1.67×104，r=0.999964。結果表明，氫化可的松進樣量在0.2092～1.5690μg范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

1.4 精密度試驗

取氫化可的松對照品溶液（0.1046mg·mL-1）進樣，每次進樣10μL，重復進樣6次。結果，RSD=0.30%，說明精密度良好。

1.5 重復性試驗

取同一批樣品（批號：20100412）適量，共6份，按擬定的含量測定方法制備供試品溶液，按“1.2”項下方法測定供試品溶液和對照品溶液的峰面積，計算氫化可的松的含量。結果，樣品中氫化可的松的平均標示百分含量為101.2%，RSD=1.77%（n=6），表明本法重復性良好。

1.6 樣品含量測定

實驗人員取一定數量的口腔潰瘍膜，并依據1.3.2中采取的方法對溶液進行制備，并依據1.1中的方法來對以下兩種溶液進行提取：一種是供試品溶液；另一種是對照品溶液，實驗人員需要將這兩種溶液注入到HPLC中，對得到的色譜圖進行認真記載，并將含量計算出來。得到的結果為：第一批羊皮陪你的含量是106.5%（RSD=0.42%）；第二批樣品的含量是107.2%（RSD=0.19%）、第三批樣品的含量是91.3%（RSD=0.25%）。

2 結果

取陰性供試品溶液9份，分別精密加入氫化可的松對照品貯備液（0.5230mg·mL-1）4.0、5.0、6.0mL，高、中、低濃度平行3份；按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“1.2”項下方法進樣測定，計算回收率，結果見表1。

3 討論

通過以上內容的論述，可以得到以下幾點結論：實驗人員在對氫化可的松及其制劑中含有的成分進行檢測的時候，主要采取以下幾種方法：第一種是紫外分光光度法；第二種是HPLC法。筆者依據相關藥典對氫化可的松含量測定手段來看，利用HPLC法對口腔潰瘍膜里面含有的氫化可的松數量進行認真的檢測有著顯著的效果，并且樣品在預處理的時候也較為簡單。

由于氫化可的松無論是在乙醇當中還是在丙酮當中都處于略溶的狀態，但是在水中卻保持不變。這個時候筆者依據我國相關藥典記載中對氫化可的松含量的測定手段來看，實驗人員可以直接使用甲醇當作相應的提取溶媒。通過一系列試驗可以得知，甲醇能夠將該藥品溶解掉，與此同時因為在口腔潰瘍膜中存在的大部分物質通過是水溶性基質，實驗人員利用甲醇將口腔潰瘍膜里面存在的樣品氫化可的松含量進行提取的過程中，因為引入的雜質不多，所以會對色譜柱不會帶來不利影響。

總而言之，實驗人員在對色譜條件及其系統進行相關試驗的過程中，需要使用甲醇-水（70∶30）做好相應的試驗工作，這個時候發現了在口腔潰瘍膜里面含有的基質是和主藥氫化可的松處于不分離的狀態，這樣會在某種程度上導致氫化可的松主峰出現了拖尾的情況。這個時候筆者參考了相關文獻資料，將以往的甲醇-水（70∶30）替換成乙腈-水（50∶50）當作相應的流動相，并利用相關系統適用性試驗可以清楚的了解到，在試驗的環境下基線處于平穩的狀態，氫化可的松能夠和雜質峰分離度處于良好的狀態，產生的雜質對其檢測工作不會產生不利影響，并且柱效高，形成的峰形也達到了預期目的。所以實驗人員使用乙腈-水（50∶50）當作相關流動相。依據上述論述可以看出，采取該方法有著諸多的優點，例如操作簡單、得到的結果具有準確性等，值得大力的推廣。

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