談化工檢驗薄層色譜分離技術

尹輝

摘 要：薄層色譜與紙色譜相比，具有分析時間較短、分離能力較強，檢出靈敏度較高的特點。薄層色譜實現了儀器化，自動化程度提高，測定精度及靈敏度都有很大提高，至今仍充滿活力。

關鍵詞：化工；檢驗；薄層；色譜；分離技術

平面色譜法又包括紙色譜法和薄層色譜法。薄層色譜法是用載板上涂布或燒結一薄層物質作為固定相的液相色譜法。應用最多的是以硅膠為固定相的吸附薄層色譜法。

薄層色譜與紙色譜相比，具有分析時間較短、分離能力較強，檢出靈敏度較高的特點。60年代以來已取代了部分紙色譜的工作。又由于薄層色譜實現了儀器化，自動化程度提高，測定精度及靈敏度都有很大提高，至今仍充滿活力。

1 薄層色譜分離原理

將樣品溶液點于預先涂布有固定相（如硅膠）薄層板一端適當的位置，將板置于層析缸中，使點有試樣的一端浸人流動相（展開劑）中，由于薄層的毛細管作用，展開劑沿薄層漸漸上升，試樣的各組分沿著薄層在固定相和流動相之間不斷發生溶解、吸附、再溶解、再吸附。由于各組分的分配系數不同使它們在薄層上移動的距離也不同，從而達到分離。展開劑上升到一定距離時，從層析缸中取出薄層板。如果組分是有色的，就可以看到各個色斑，如果組分無色，要用物理的或化學的方法顯色，得到一個薄層色譜圖。

2 薄層色譜操作方法

薄層色譜的實驗步驟有：制板、點樣、展開、顯色、定性和定量。

2.1 薄層板的制備

將平板玻璃裁成正方形或長方形，一般分析用20cm×20cm和20cm×10cm兩種。將玻璃片洗凈烘干。通常采用濕法制板，它具有薄層牢固、可批量制備、展開后便于保存、分離效果好等優點。

2.2 點樣

樣品用適當的有機溶劑制成溶液，濃度約為0.5～2mg/mL。點樣量為0.5-5uL，在距薄層板底邊1cm處點樣，原點直徑在3～4mm。手工點樣用微量注射器。如用點樣儀點樣，樣量精確、形狀整齊一致，能提高定量分析的準確度。

2.3 展開

展開的實驗操作是，將點樣后的薄層板置于密閉的層析槽中，下端浸入展開劑高度不應超過0.5cm。展開距離一般為10～15cm，根據溶劑移動的方向分為上行展開和下行展開。另外，還可利用多次展開、雙向展開等方法得到不同的層析結果。

2.4 定位與顯色

確定被分離組分的位置稱為定位。展開后的薄層板自槽中取出，室溫下揮發去溶劑。若被分離組分本身有顏色，它們的位置根據有色的斑點即可確定。無色的化合物可采用物理檢出法、化學檢出法、酶與生物檢出法和放射檢出法來定位。

2.5 定性

試樣與標準品同板作對照試驗，二者只f值相同且顯色特性相同，可初步認為是同一化合物。必要時采用其他方法加以驗證。

2.6 定量

樣品組分經薄層分離后，可用以下兩種方法定量。

2.6.1 洗脫法。把組分斑點的吸附劑取出，用溶劑洗脫后，用其他方法測定。如分光光度法、熒光等方法測定。此法操作復雜，效率較低。

2.6.2 原位法。即在薄層上組分斑點位置進行測定。又分為目測法、測面積法和薄層掃描儀掃描定量法。

結束語

薄層色譜用于定量分析時，最好采用高效薄層色譜法，即采用分離效率高、展開距離短，靈敏度高的高效薄層板。且點樣、展開、顯色、定量均使用儀器。高效薄層色譜法的應用大大提高了薄層分析的重現性和準確度。

參考文獻

[1]懷義.談化工檢驗標準[M].北京：中國石化出版社.

[2]孫秀敏.張敏.薄層色譜分離技術[M].甘肅科技，2009.25（3）.