快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測定兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類環(huán)境雌激素*

黃何何，黃永輝，王征，陳永煊

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，福建 福州 350002）

快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法測定兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類環(huán)境雌激素*

黃何何，黃永輝，王征，陳永煊

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗研究院，福建 福州 350002）

建立了采用快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜（ASE-GC-MS）測定兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類（PAEs）環(huán)境雌激素的含量的分析方法。樣品以正己烷為溶劑，在溫度為90℃條件下，使用ASE萃取，毛細管柱HP-5 MS（30m，0.25mm×0.25μm）分離，采用選擇離子（SIM）進行定量分析。17 種環(huán)境雌激素在線性范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，且相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.99；方法的檢出限為：除鄰苯二甲酸二異壬酯為0.5 mg/kg，其余均為0.05 mg/kg，定量限：除鄰苯二甲酸二異壬酯為1.0 mg/kg，其余均為0.1 mg/kg，實際樣品加標回收率范圍為77.8%～109.9%，方法的相對標準偏差（n=6）為1.1%～7.2%。該方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于兒童用品中17種鄰苯二甲酸酯類（PAEs）環(huán)境雌激素的含量的分析測定。

快速溶劑萃取-氣相色譜/質(zhì)譜；鄰苯二甲酸酯；環(huán)境雌激素；兒童用品

環(huán)境雌激素類化合物( Environmental estrogens，EEs)是指一類具有雌激素作用的化合物，能模擬或干擾天然激素的生理、生化作用，對生物體產(chǎn)生各種毒效應(yīng)，包括干擾體內(nèi)正常內(nèi)分泌物質(zhì)的合成、釋放、運輸、結(jié)合、代謝等過程，激活或抑制內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)控功能等。EEs主要包括：鄰苯二甲酸酯類（PAEs）、多氯聯(lián)苯類（PCBs，polychlorinated Biphenyls）、農(nóng)用化學品類（Agricultural Chemicals）、二噁英類（Diopxinlike chemicals）、雙酚類（BPs，Bisphenols）和烷基酚類等，這些化合物廣泛分布于生活環(huán)境中，而且會通過食物鏈在動物和人體內(nèi)富集。極低濃度的環(huán)境雌激素就可能對動物和人生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)造成嚴重損害。EEs對兒童健康的潛在危害是可通過食物鏈或直接接觸等途徑進入嬰幼兒體內(nèi)，干擾機體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，及血漿中正常激素水平的維持，從而對機體生長發(fā)育、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)等產(chǎn)生多方面的影響。發(fā)育中的兒童對環(huán)境雌激素更具有易感性，其中泌尿生殖系統(tǒng)尤為明顯。研究人員發(fā)現(xiàn)含有PAEs的塑料玩具及兒童用品有可能被小孩放進口中，如果放置的時間足夠長，就會導致PAEs的溶出量超過安全水平，危害兒童的肝臟和腎臟，也可引起兒童性早熟[1]。

目前，對鄰苯二甲酸酯類化合物的測定方法主要有氣相色譜法[2-3]、氣相色譜-質(zhì)譜法[4-5]、液相色譜法[6-7]、液相色譜-質(zhì)譜法[8-9]等。而當前采用ASE技術(shù)對兒童用品中PAEs類環(huán)境雌激素進行分析測定的研究較少，鑒于環(huán)境雌激素對兒童的影響，文章針對兒童用品如奶嘴、奶瓶、兒童玩具等開展鄰苯二甲酸酯類環(huán)境雌激素含量測定方法的研究，研究成果將對我國兒童用品中環(huán)境雌激素檢測標準的建立提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜儀：Agilent GC-MS 5975（Agilent公司，美國）；Dionex-ASE-350 快速溶劑萃取儀（Termo公司，美國）；HP-5 MS（30m， 0.25mm×0.25μm）毛細管色譜柱；正己烷（Thermofisher，美國），色譜純。

17種PAEs混合標準溶液：鄰苯二甲酸二甲酯(DMP)、鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、鄰苯二甲酸二異丁酯(DIBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、鄰苯二甲酸二戊酯(DPP)、鄰苯二甲酸二己酯(DHXP)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)、鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、鄰苯二甲酸二苯酯、鄰苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、鄰苯二甲酸二壬酯(DNP)、鄰苯二甲酸二異壬酯(DINP)均為1000 μg/mL（O2SI公司，美國）。

1.2 樣品前處理

1.2.1 準確稱取5 g樣品至22 mL萃取池中，使用ASE進行萃取。

1.2.2 ASE條件：

萃取溶劑：正己烷；壓力：1500 psi；溫度：90 ℃；靜態(tài)萃取時間：6 min；預加熱平衡時間：5 min；循環(huán)次數(shù)：2次。

萃取完成后，將提取液以正己烷定容至25 mL。

1.3 氣相色譜與質(zhì)譜條件

1.3.1 氣相色譜條件：色譜柱為HP-5 MS（30m，0.25mm×0.25μm）；進樣口溫度250℃；柱溫：柱溫箱初始溫度為60℃，保持1min；以20℃/min升至220℃，保持1min；以5℃/min升至280℃，保持3min；進樣方式：分流進樣，分流流量5 mL/min，分流比為：5：1；進樣量：1 μL；載氣：高純氦氣（99.999%），恒定流速：1 mL/min。

1.3.2 質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源（EI源）；離子源電壓：70eV；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；溶劑延遲7min；17種PAEs的保留時間、特征離子、定量離子信息見表1，17種PAEs混合標準溶液總離子流色譜圖見圖1。

圖1 17種PAEs總離子流色譜圖（TIC圖）

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

相較于傳統(tǒng)的索氏提取，采用快速溶劑萃取可以縮短分析周期，節(jié)約萃取溶劑。而影響ASE萃取效率的因素包括：萃取溶劑、溫度、壓力、時間等。研究選正己烷作為提取溶劑，設(shè)定萃取壓力為10.3Mpa，優(yōu)化了ASE萃取時間和萃取溫度。

2.1.1 萃取時間的優(yōu)化

取空白樣品進行加標平行實驗，考察了不同靜態(tài)同萃取時間（2，4，6，8和10min）對PAEs萃取效率的影響，萃取效率對比圖見圖2。結(jié)果表明，隨著萃取時間的增加，萃取效率呈上升趨勢，但萃取時間為6min，8min，10min時，添加回收率無顯著差異。因此，選擇靜態(tài)萃取時間設(shè)定為6min。

表1 17種PAEs質(zhì)譜信息

表2 17種PAEs的線性方程、相關(guān)系數(shù)及靈敏度

2.1.2 萃取溫度的優(yōu)化

對空白樣品進行加標實驗，考察不同溫度（60，70，80，90，100，110和120℃）對PAEs萃取效率的影響。結(jié)果表明，隨著溫度的升高，回收率也升高，當溫度達到90℃時，17種PAEs的回收率均大于90%，溫度再升高，萃取效率沒有顯著提高，因此，設(shè)定90℃為萃取溫度。

圖2 不同靜態(tài)萃取時間的萃取效率

表3 空白樣品中17種PAEs加標回收率實驗結(jié)果（n=6）

2.2 線性范圍和靈敏度

以濃度為1000 μg/L的17種PAEs混合標準溶液為母液，逐步稀釋成濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、5.00 和10.0μg/mL系列溶液，在本文設(shè)定的GC-MS條件下運行。方法的線性關(guān)系、檢出限和定量限結(jié)果見表2。結(jié)果表明，DINP在0.1～10.0 μg/mL，其余16種PAEs在0.01～10.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r2）均大于0.99；DINP的檢出限和定量限分別為0.50mg/kg和1.00mg/kg，其余16種PAEs的檢出限均為0.05mg/kg，定量限為0.10mg/kg。

2.3 方法回收率及精密度

向空白樣品中添加不同濃度水平標準溶液，添加水平參照GB/T 27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》要求進行選擇，按照本研究方法進行實驗，每個濃度做6個平行，并做空白對照，計算加標回收率和相對標準偏差，17種PAEs回收率和精密度結(jié)果如表3所示。從表中可以看出，17種鄰苯二甲酸酯的回收率為77.8%-109.9%，相對標準偏差（RSD）為1.1%-7.2%，結(jié)果符合分析檢測的要求，本方法能夠準確、精密地應(yīng)用于兒童用品中17種PAEs的檢測分析。

3 總結(jié)

研究建立了兒童用品中17種PAEs同時測定的ASE-GC-MS的分析方法。方法通過優(yōu)化ASE條件進行前處理，采用正己烷提取目標化合物后，毛細管柱HP-5 MS（30m， 0.25mm×0.25μm）分離，采用選擇離子（SIM）進行定量分析。17種PAEs在線性范圍內(nèi)相關(guān)性良好，檢出限和定量限滿足檢測分析的要求。方法前處理簡單，耗時少、成本低，提取效率較高，可應(yīng)用于兒童用品中17種PAEs的簡便、快速、準確的定性定量。

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O657.63

A

1007-550X（2017）01-0045-05

10.3969/j.issn.1007-550X.2017.01.003

福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局科技項目（FJQI2014037）

2016-12-07

黃何何（1987-），男，福建龍巖人，碩士研究生，主要從事食品檢測技術(shù)研究。