糖尿病患者尿中nephrin蛋白的表達及臨床意義

張 洋,肖慶飛,趙永利,陳 燕,屈智慧

(吉林大學第一醫院二部 腎病科,吉林 長春130031)

糖尿病患者尿中nephrin蛋白的表達及臨床意義

張 洋,肖慶飛,趙永利,陳 燕,屈智慧*

(吉林大學第一醫院二部 腎病科,吉林 長春130031)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病最嚴重的微血管合并癥，其早期臨床標志物是微量白蛋白尿，而蛋白尿的產生與足突裂孔蛋白nephrin表達異常有關，足細胞功能障礙是糖尿病腎病發生發展的重要因素[1]。有研究表明：Nephrin是由腎小球足細胞表達，定位于腎小球裂孔膜上的跨膜蛋白，其參與維持腎小球濾過膜的完整性[2]。DN早期出現足細胞損傷，其表面nephrin蛋白與骨架蛋白結合減弱，nephrin從足細胞脫落，隨尿液排出體外[3]。本文探討nephrin蛋白對早期糖尿病腎病的預測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例來源于2010年至2016年于我院內分泌科及腎病科住院診斷為2型糖尿病的患者88例，所有病例病程10年以上，男性40例，女性48例，2型糖尿病診斷符合1999年WHO糖尿病的診斷標準，年齡在18歲以下，80歲以上的予以排除,所有患者均排除心臟、肝臟、其他腎臟疾病以及感染性疾病，排除腫瘤、外傷、風濕性疾病,且近期未發生糖尿病酮癥酸中毒或高滲性昏迷，同時近2個月未使用過ACEI或ARB類降壓藥物。為減少尿液濃度對檢測結果的影響，尿白蛋白及尿nephrin蛋白均除以尿肌酐校正。借鑒Mogensen分型標準分為糖尿病組(DM)：UAER<20 μg/min[相當尿白蛋白的排泄率(ACR)<30 μg/mg];早期糖尿病腎病組(DN1)：20 μg/min≤UAER<200 μg/min(相當于ACR30-300 μg/mg);臨床糖尿病腎病組(DN2):UAER≥200 μg/min(相當ACR>300 μg/mg);正常對照(N)組40例，男性18例，女性22例，均為我院健康體檢者，平均年齡48.55±18.54歲。

1.2 標本收集

所有患者留取晨尿10 ml，2 000 r/min離心5分鐘，收集上清液，-20℃保存備用，用于尿nephrin蛋白的測定。

1.3 主要試劑與儀器

人nephrin蛋白酶聯免疫分析試劑盒(美國R&D System公司產品)，酶標儀，全自動生化分析儀，-70℃冰箱，離心機。

1.4 方法

1.4.1 血指標的檢測 各組患者均在晨起空腹情況下檢測，用全自動生化分析儀檢測血清空腹血糖、總膽固醇、甘油三酯。采用免疫分析法測定糖化血紅蛋白。同時測量患者的血壓，計算其體重指數。

1.4.2 尿液白蛋白的檢測 各組患者均用免疫透射比濁法檢測尿蛋白，每個月1次，共2次，取平均值。用全自動生化分析儀檢測尿肌酐。

1.4.3 尿液nephrin蛋白的檢測 采用酶聯免疫分析法(具體步驟見操作說明書)檢測尿中的nephrin,為減少受試者尿液濃度變化對測試結果的影響，結果均除以尿肌酐的結果表示，即尿nephrin/尿肌酐(μg/mg)表示，每個樣本檢測兩次，取平均值。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 各組一般臨床資料比較 見表1。DM組、DN1組、DN2組與NC組相比，在年齡、性別，體重指數方面差異無顯著意義。但收縮壓、舒張壓明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 各組生化指標的比較 見表2。DM組、DN1組、DN2組與NC組相比，在空腹血糖、糖化血紅蛋白、膽固醇及甘油三酯方面明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。各組相比，僅DN2組的血尿素氮與血肌酐高于其他各組，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 各組臨床指標比較

*與NC組相比P<0.05

表2 各組生化指標比較

*與NC組相比P<0.05

2.3 各組Unephrin/UCR與ACR 的比較 見表3。NC組患者尿中檢測到少量nephrin蛋白，與DM組相似，但DN1組尿nephrin蛋白的排泄量(Unephrin/UCR)較NC組與DM組進一步升高，差異有顯著意義(P<0.01)。DN2組Unephrin/UCR較DN1組有顯著升高，差異顯著(P<0.01)。 DM組尿白蛋白的排泄率與NC組相似，DN1組ACR較DM組與NC組明顯增高，差異有顯著意義(P<0.01)。DN2組ACR較DN1組進一步升高，差異有顯著意義(P<0.01)。Unephrin/UCR與ACR有相關性，r=0.539(P<0.05)。

表3 各組Unephrin/UCR與ACR 的比較

*與NC組相比P<0.01，▲與DN1相比P<0.01

3 討論

Nephrin蛋白是1998年瑞典著名教授Karl Tryggvason在研究先天性腎病綜合征芬蘭型時發現的,它是腎小球濾過屏障上皮細胞足突之間裂孔隔膜上第一個被確定的蛋白[4]。其在足突裂孔膜處形成“拉鏈樣結構”，它的缺失或氨基酸序列的改變，會導致裂孔膜的破壞，進而產生大量尿蛋白[5]。

Doublier等[6]證實糖尿病早期腎小球nephrin蛋白代償性增加，足細胞骨架蛋白重新分布導致其與nephrin蛋白的解離，從而nephrin蛋白從尿液排出，說明nephrin是糖尿病早期腎臟損傷的標志物。Patari[7]用Western印記法檢測了1型糖尿病患者尿中的nephrin蛋白，表明nephrin 是可作為預測糖尿病腎臟并發癥的有用指標。Wada Y[8]利用各種腎病動物模型證實，nephrin可以作為預測足細胞損傷的生物標志物。綜上說明nephrin可能與DN早期改變有關，并促進腎小球濾過功能的喪失。

我們的前期工作發現，糖尿病大鼠早期出現白蛋白尿,并且早于腎功能的改變，說明白蛋白尿是糖尿病早期腎損害的標志。隨著尿蛋白的增多，病理改變的加重，大鼠腎臟nephrin蛋白表達降低，提示nephrin蛋白參與蛋白尿的產生與發展[9]。這也為nephrin蛋白從足細胞脫落，從尿中排出提供了佐證。

本研究發現，DM組、DN1組、DN2組三組之間，具有顯著差異的是ACR與Unephrin/UCR兩項指標。在正常的健康人群的尿液中，我們可以檢測到少量的nephrin蛋白，排出量與糖尿病組患者相近，這與有些學者的研究結果有所不同。比如程亮[10]研究表明nephrin蛋白在正常健康人群的尿液中不出現。解釋這種差異的原因是nephrin蛋白可能在其他組織有一些微弱表達。比如Ahola[11]等發現nephrin mRNA不但在大鼠腎小球有強表達，在其脾臟也有微弱表達。Liu[12]等首次報道了出生后1-6周的小鼠睪丸組織內有高水平nephrin mRNA表達。所以，在正常人的尿液中可能存在nephrin蛋白。

本研究發現，在早期糖尿病腎病患者(DN1)，尿nephrin蛋白排出比DM組升高，差異有統計學意義，而臨床糖尿病腎病的患者(DN2)，尿nephrin蛋白排出比DN1組進一步升高，差異有統計學意義。隨著DN病情的進展，尿nephrin的排泄有逐漸增多的趨勢。這與糖尿病腎病患者尿白蛋白(ACR)的排泄趨勢相同。研究發現，尿nephrin蛋白排出與ACR呈正相關，ACR目前是糖尿病腎病分期的主要指標，綜上所述，nephrin蛋白在早期預測DN中具有非常重要的作用。

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[7]Patari A,Forsblom C,Havana M,et al .Nephrinuria in diabetic nephropathy of type 1 diabetes[J].Diabetes,2003，52(12):2969.

[8]Wada Y,Abe M,Moritani H,et al.Potential of urinary?nephrin?as a biomarker reflecting podocyte dysfunction in various kidney disease models[J].Exp Biol Med,2016,241(16):1865.

[9]屈智慧，楊立志，趙 穎,等.糖尿病大鼠蛋白尿與腎臟病理及nephrin的相關性研究[J].中國實驗診斷學,2011,15(9):1441.

[10]程 亮，俞偉男，胡 文,等.糖尿病腎病患者尿足細胞相關蛋白nephrin的表達及意義[J].轉化醫學雜志，2013,2(1)：15.

[11]Ahola H,Wang SX,Luimula P,et al..Cloning and expression of the rat nephrin homolog[J].Am J Pathol,1999,155(3):907.

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吉林大學第一醫院二部科研專項基金(B04)

*通訊作者

1007-4287(2017)09-1376-03

2017-03-15)