GPR119調(diào)控脂質(zhì)代謝平衡的研究

陳志平　王嵐楓　胡蓉

摘要：目的 探討GPR119調(diào)控脂質(zhì)代謝平衡。方法 通過過表達或抑制表達GPR119載體分組，構(gòu)建過表達GPR119載體（增強表達GPR119慢病毒載體），觀察過表達GPR119與SR-B1表達變化、過表達GPR119后APOE表達變化。結(jié)果 NC組的SR-B1表達數(shù)值為（2.65±0.02）低于GPR119（H）組的SR-B1表達數(shù)值為（8.65±0.06）（P<0.05）；NC組的APOE表達數(shù)值為（1.26±0.01）低于GPR119（H）組的APOE表達數(shù)值為（29.75±1.05）（P<0.05）。結(jié)論 GPR119在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，參與對肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運，對抗動脈粥樣硬化起一定作用。

關(guān)鍵詞：GPR119；脂質(zhì)代謝平衡；調(diào)控

中圖分類號：R446.1 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）20-0187-02

GPR119是一個新的可能參與調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)平衡的膜受體。GPR119屬于G蛋白偶聯(lián)受體A家族，有7個跨膜區(qū)，在胞漿內(nèi)與三個亞單位（α、β、γ）所組成的G蛋白偶聯(lián)，主要表達在胰島和胃腸道細胞[1-2]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，該基因的開放閱讀框架僅有一個外顯子，不含內(nèi)含子，編碼335個氨基酸。GPR119在治療2型糖尿病及肥胖的作用有了比較深入的研究，并有研究表明GPR119參與脂質(zhì)代謝。最近研究表明，GPR119與激動劑結(jié)合后，通過cAMP信號轉(zhuǎn)導途徑，促進葡萄糖依賴性胰島素和腸肽激素的分泌[1]，是新一代的治療2型糖尿病和肥胖癥的藥物靶點。基于這一作用，大量文獻報道了GPR119激動劑的研究，并有部分GPR119激動劑應用于臨床。本項目擬在文獻分析和已有的研究工作基礎上，結(jié)合國內(nèi)外研究進展，探討GPR119對膽固醇吸收、轉(zhuǎn)運、和代謝相關(guān)基因和蛋白表達的影響及作用機制，為確立GPR119作為調(diào)控脂質(zhì)平衡和動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點，提供科學依據(jù)，如下文所示。

1資料與方法

1.1一般資料

基于細胞水平觀察GPR119對脂質(zhì)吸收、轉(zhuǎn)運和代謝的影響，具體分組如下所示：①空載體轉(zhuǎn)染THP-1+正常培養(yǎng)基48 h；②空載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；③過表達GPR119載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；④抑制表達GPR119載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2方法

儀器與試劑：CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺， 7500 Fast熒光定量儀，胎牛血清，Lipofectamine 2000，PrimeScriptRRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因檢測試劑。通過公司購買過表達GPR119載體，構(gòu)建過表達GPR119載體（增強表達GPR119慢病毒載體）；THP-1細胞用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬細胞，采用構(gòu)建的GPR119載體、抑制GPR119表達載體分別轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細胞，按公司構(gòu)建載體轉(zhuǎn)染說明書進行轉(zhuǎn)染；檢測轉(zhuǎn)染后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE等基因和蛋白的表達。

1.3觀察指標

觀察過表達GPR119后SR-B1、APOE表達變化。

1.4統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)均以SPSS18.0系統(tǒng)分析，計量資料以 （x±s）表示，計數(shù)資料以%表示，P<0.05顯示差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

以PCR試驗，定時定量測定過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中的SR-B1表達，每個試驗重復三次，將結(jié)果以均數(shù)標準差表示。通過PCR試驗，定時定量測定過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中的APOE表達，每個實驗重復進行三次。NC組、GPR119（H）組的APOE表達、SR-B1表達數(shù)值均存在明顯差異（P<0.05），見表1。

3討論

雖然GPR119近年來在脂質(zhì)代謝中的作用得到重視，但GPR119是否參與調(diào)控巨噬細胞膽固醇的攝取、代謝、轉(zhuǎn)運和流出及相關(guān)機制尚不完全清楚。GPR119是否通過一些新的途徑參與調(diào)節(jié)機體對外源性膽固醇吸收，內(nèi)源性膽固醇合成，膽固醇逆向轉(zhuǎn)運等從而影響動脈粥樣硬化形成還未見報道。因此，從細胞水平觀察GPR119對巨噬細胞膽固醇吸收、膽固醇合成、膽固醇水解和膽固醇流出的影響，以及GPR119對脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達的影響成為目前研究重點。清道夫B1（SR-B1）是一個多配體受體，能在HDL與細胞間介導雙向脂質(zhì)轉(zhuǎn)運，可以在動脈粥樣硬化斑塊的巨噬細胞中表達，對肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運和抗動脈粥樣硬化都是必須的。SR-B1敲除鼠可導致快速的冠狀動脈閉塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1對于脂質(zhì)調(diào)節(jié)和抗動脈粥樣硬化起重要作用[3]。載脂蛋白E（APOE）是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質(zhì)代謝中起著重要作用。APOE通過不同機制對動脈粥樣硬化起一定抑制作用。卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（LCAT）是一種血漿中起催化作用的酶，其作用是將HDL的卵磷脂的C2位不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)移給游離膽固醇，生產(chǎn)溶血卵磷脂和膽固醇酯，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用[4]。

GPR119是一個新的可能參與調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)平衡的膜受體，脂質(zhì)在巨噬細胞源性泡沫細胞聚積是形成動脈粥樣硬化的重要事件，保持體內(nèi)脂質(zhì)平衡為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點。通過研究GPR119在巨噬細胞脂質(zhì)代謝平衡中的作用，為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點，是本項目的特色與創(chuàng)新之處。通過增強或抑制GPR119的表達，探討GPR119調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡的新途徑，為GPR119在調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝過程中重要作用提供新的實驗證據(jù)，為脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)性疾病尤其是動脈粥樣硬化的防治提供新的藥物篩選指標。在研究過程中，需要解決兩個方面的問題，一是對能夠有效表達GPR119的質(zhì)粒進行構(gòu)建，增強慢病毒的包裝，二是針對特異性GPR119 siRNA干擾片段的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染[5]。

通過研究可知，過表達GPR119后THP-1巨噬細胞中SR-B1、APOE表達顯著上調(diào)[6]。其中，SR-B1是一個多配體受體，能在HDL與細胞間介導雙向脂質(zhì)轉(zhuǎn)運，可以在動脈粥樣硬化斑塊的巨噬細胞中表達，對于脂質(zhì)調(diào)節(jié)和抗動脈粥樣硬化起重要作用；APOE是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質(zhì)代謝中起著重要作用。APOE通過不同機制對動脈粥樣硬化起一定抑制作用。由此可知，GPR119在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，參與對肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運，對抗動脈粥樣硬化起一定作用。

參考文獻：

[1]高偉.GPR119受體激動劑GSK1292263對糖尿病的作用及機制探討[J].現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2016，22（1）：64-66.

[2]趙立霞，于洋，王志強，等.基于GPR119靶點的抗糖尿病藥物研究進展[J].中國藥物化學雜志，2012（5）：393-402.

[3]張書永.新型GPR119和TGR5激動劑的發(fā)現(xiàn)及其對糖尿病作用的研究[D].同濟大學，2014.

[4]李瑩，黃思羅，劉劍鋒.脂筏在G蛋白偶聯(lián)受體信號轉(zhuǎn)導中的調(diào)控作用[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2009，9（18）：3536-3539.

[5]蔣坤，江程，宋麗君，等.G蛋白偶聯(lián)受體119激動劑的研究進展[J].中國新藥雜志，2012（20）：2388-2393.

[6]姜思屹，于萍，李強.G蛋白偶聯(lián)受體119激動劑在2型糖尿病治療中的應用[J].中國醫(yī)藥，2015，10（10）：77-82.

編輯/李樺endprint