GPR119調(diào)控脂質(zhì)代謝平衡的研究

陳志平　王嵐楓　胡蓉

摘要：目的 探討GPR119調(diào)控脂質(zhì)代謝平衡。方法 通過(guò)過(guò)表達(dá)或抑制表達(dá)GPR119載體分組，構(gòu)建過(guò)表達(dá)GPR119載體（增強(qiáng)表達(dá)GPR119慢病毒載體），觀察過(guò)表達(dá)GPR119與SR-B1表達(dá)變化、過(guò)表達(dá)GPR119后APOE表達(dá)變化。結(jié)果 NC組的SR-B1表達(dá)數(shù)值為（2.65±0.02）低于GPR119（H）組的SR-B1表達(dá)數(shù)值為（8.65±0.06）（P<0.05）；NC組的APOE表達(dá)數(shù)值為（1.26±0.01）低于GPR119（H）組的APOE表達(dá)數(shù)值為（29.75±1.05）（P<0.05）。結(jié)論 GPR119在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，參與對(duì)肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化起一定作用。

關(guān)鍵詞：GPR119；脂質(zhì)代謝平衡；調(diào)控

中圖分類號(hào)：R446.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1959（2017）20-0187-02

GPR119是一個(gè)新的可能參與調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)平衡的膜受體。GPR119屬于G蛋白偶聯(lián)受體A家族，有7個(gè)跨膜區(qū)，在胞漿內(nèi)與三個(gè)亞單位（α、β、γ）所組成的G蛋白偶聯(lián)，主要表達(dá)在胰島和胃腸道細(xì)胞[1-2]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，該基因的開放閱讀框架僅有一個(gè)外顯子，不含內(nèi)含子，編碼335個(gè)氨基酸。GPR119在治療2型糖尿病及肥胖的作用有了比較深入的研究，并有研究表明GPR119參與脂質(zhì)代謝。最近研究表明，GPR119與激動(dòng)劑結(jié)合后，通過(guò)cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進(jìn)葡萄糖依賴性胰島素和腸肽激素的分泌[1]，是新一代的治療2型糖尿病和肥胖癥的藥物靶點(diǎn)。基于這一作用，大量文獻(xiàn)報(bào)道了GPR119激動(dòng)劑的研究，并有部分GPR119激動(dòng)劑應(yīng)用于臨床。本項(xiàng)目擬在文獻(xiàn)分析和已有的研究工作基礎(chǔ)上，結(jié)合國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展，探討GPR119對(duì)膽固醇吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、和代謝相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響及作用機(jī)制，為確立GPR119作為調(diào)控脂質(zhì)平衡和動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點(diǎn)，提供科學(xué)依據(jù)，如下文所示。

1資料與方法

1.1一般資料

基于細(xì)胞水平觀察GPR119對(duì)脂質(zhì)吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的影響，具體分組如下所示：①空載體轉(zhuǎn)染THP-1+正常培養(yǎng)基48 h；②空載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；③過(guò)表達(dá)GPR119載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；④抑制表達(dá)GPR119載體轉(zhuǎn)染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2方法

儀器與試劑：CO2培養(yǎng)箱，超凈工作臺(tái)， 7500 Fast熒光定量?jī)x，胎牛血清，Lipofectamine 2000，PrimeScriptRRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因檢測(cè)試劑。通過(guò)公司購(gòu)買過(guò)表達(dá)GPR119載體，構(gòu)建過(guò)表達(dá)GPR119載體（增強(qiáng)表達(dá)GPR119慢病毒載體）；THP-1細(xì)胞用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬細(xì)胞，采用構(gòu)建的GPR119載體、抑制GPR119表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)染THP-1巨噬細(xì)胞，按公司構(gòu)建載體轉(zhuǎn)染說(shuō)明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染；檢測(cè)轉(zhuǎn)染后THP-1巨噬細(xì)胞中SR-B1、APOE等基因和蛋白的表達(dá)。

1.3觀察指標(biāo)

觀察過(guò)表達(dá)GPR119后SR-B1、APOE表達(dá)變化。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均以SPSS18.0系統(tǒng)分析，計(jì)量資料以 （x±s）表示，計(jì)數(shù)資料以%表示，P<0.05顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

以PCR試驗(yàn)，定時(shí)定量測(cè)定過(guò)表達(dá)GPR119后THP-1巨噬細(xì)胞中的SR-B1表達(dá)，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)三次，將結(jié)果以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示。通過(guò)PCR試驗(yàn)，定時(shí)定量測(cè)定過(guò)表達(dá)GPR119后THP-1巨噬細(xì)胞中的APOE表達(dá)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行三次。NC組、GPR119（H）組的APOE表達(dá)、SR-B1表達(dá)數(shù)值均存在明顯差異（P<0.05），見(jiàn)表1。

3討論

雖然GPR119近年來(lái)在脂質(zhì)代謝中的作用得到重視，但GPR119是否參與調(diào)控巨噬細(xì)胞膽固醇的攝取、代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)和流出及相關(guān)機(jī)制尚不完全清楚。GPR119是否通過(guò)一些新的途徑參與調(diào)節(jié)機(jī)體對(duì)外源性膽固醇吸收，內(nèi)源性膽固醇合成，膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)等從而影響動(dòng)脈粥樣硬化形成還未見(jiàn)報(bào)道。因此，從細(xì)胞水平觀察GPR119對(duì)巨噬細(xì)胞膽固醇吸收、膽固醇合成、膽固醇水解和膽固醇流出的影響，以及GPR119對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響成為目前研究重點(diǎn)。清道夫B1（SR-B1）是一個(gè)多配體受體，能在HDL與細(xì)胞間介導(dǎo)雙向脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，可以在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的巨噬細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)和抗動(dòng)脈粥樣硬化都是必須的。SR-B1敲除鼠可導(dǎo)致快速的冠狀動(dòng)脈閉塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1對(duì)于脂質(zhì)調(diào)節(jié)和抗動(dòng)脈粥樣硬化起重要作用[3]。載脂蛋白E（APOE）是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質(zhì)代謝中起著重要作用。APOE通過(guò)不同機(jī)制對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起一定抑制作用。卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶（LCAT）是一種血漿中起催化作用的酶，其作用是將HDL的卵磷脂的C2位不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)移給游離膽固醇，生產(chǎn)溶血卵磷脂和膽固醇酯，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用[4]。

GPR119是一個(gè)新的可能參與調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)平衡的膜受體，脂質(zhì)在巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞聚積是形成動(dòng)脈粥樣硬化的重要事件，保持體內(nèi)脂質(zhì)平衡為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點(diǎn)。通過(guò)研究GPR119在巨噬細(xì)胞脂質(zhì)代謝平衡中的作用，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點(diǎn)，是本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處。通過(guò)增強(qiáng)或抑制GPR119的表達(dá)，探討GPR119調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝平衡的新途徑，為GPR119在調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝過(guò)程中重要作用提供新的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，為脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)性疾病尤其是動(dòng)脈粥樣硬化的防治提供新的藥物篩選指標(biāo)。在研究過(guò)程中，需要解決兩個(gè)方面的問(wèn)題，一是對(duì)能夠有效表達(dá)GPR119的質(zhì)粒進(jìn)行構(gòu)建，增強(qiáng)慢病毒的包裝，二是針對(duì)特異性GPR119 siRNA干擾片段的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染[5]。

通過(guò)研究可知，過(guò)表達(dá)GPR119后THP-1巨噬細(xì)胞中SR-B1、APOE表達(dá)顯著上調(diào)[6]。其中，SR-B1是一個(gè)多配體受體，能在HDL與細(xì)胞間介導(dǎo)雙向脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)，可以在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的巨噬細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)于脂質(zhì)調(diào)節(jié)和抗動(dòng)脈粥樣硬化起重要作用；APOE是血漿中脂蛋白的重要組成成分，在脂質(zhì)代謝中起著重要作用。APOE通過(guò)不同機(jī)制對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化起一定抑制作用。由此可知，GPR119在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用，參與對(duì)肝臟膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化起一定作用。

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編輯/李樺e(cuò)ndprint