自體骨髓間充質干細胞移植治療腦出血

王 輝 王 恬

南陽南石醫院，河南 南陽 473002

·論著 臨床診治·

自體骨髓間充質干細胞移植治療腦出血

王 輝 王 恬

南陽南石醫院，河南 南陽 473002

目的 探討自體骨髓間充質干細胞(BMSCs)移植治療對腦出血患者外周血中內皮祖細胞活化度及神經功能的影響。方法 選擇2014-06—2016-06南陽南石醫院86例腦出血患者，依據治療方案不同分為2組各43例。對照組僅采取常規微創血腫清除術治療，觀察組在對照組基礎上聯合自體BMSCs移植治療，統計對比2組治療后1周、2周、3周、4周外周血內皮祖細胞活化度與治療后3周、4周神經功能缺損評分、日常生活能力評分及神經營養因子[神經生長因子(NGF)、腦源性神經生長因子(BDNF)]水平。結果 觀察組治療后1周、2周、3周、4周內皮祖細胞活化度較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)；觀察組治療后3周、4周神經功能缺損評分較對照組降低，日常生活能力評分均較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)；觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)。結論 對腦出血患者應用自體骨髓間充質干細胞移植治療效果顯著，可明顯減輕患者神經功能損傷，提高內皮祖細胞與神經營養因子水平，促進其神經功能恢復，提升其日常生活能力。

骨髓間充質干細胞；腦出血；內皮祖細胞；神經功能

腦出血(cerebral hemorrhage)為神經系統常見疾病之一，其年發病率為(60～80)/10萬，占全部腦卒中20%～30%，且急性期病死率為30%～40%，生存患者中大部分會遺留不同程度殘疾，日常生活能力降低甚至喪失，嚴重影響其生命健康及生活質量[1-2]。微創血腫清除術為治療腦出血主要方法之一，可有效清除腦血腫、降低顱內壓，但因血腫壓迫與血腫清除手術的創傷，患者術后常會遺留神經功能損傷。王旭等[3]研究指出，骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)可通過向受損腦組織遷移及分化神經細胞，有利于患者神經功能恢復和重建。本研究為進一步觀察自體BMSCs移植治療對腦出血患者外周血中內皮祖細胞活化度及神經功能的影響，選擇86例腦出血患者進行分組比較，報道如下。

1 資料及方法

1．1 一般資料 選擇2014-06—2016-06南陽南石醫院86例腦出血患者，依據治療方案不同分為2組各43例。入選患者均經頭顱CT與MRI檢查確診為腦出血，入院時格拉斯哥昏迷評分為5～12分，血腫相對穩定，均在腦出血后48 h之內入院實施血腫清除術，生命體征穩定，排除合并嚴重肝腎等其他臟器功能障礙者。其中觀察組男28例，女15例；年齡34～76(51.48±8.26)歲；出血部位：基底節區34例，腦橋5例，丘腦4例，合并高血壓27例，高血脂癥13例。對照組男26例，女17例；年齡35～78(52.18±8.37)歲；出血部位：基底節區33例，腦橋5例，丘腦5例，合并高血壓24例，高血脂癥14例。2組基本資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究經我院倫理委員會審核通過，患者均簽署知情同意書。

1．2 方法

1．2．1 治療方法：對照組僅采取常規微創血腫清除術治療：依據CT血腫定位結果確定進針位置，穿刺后對血塊進行抽吸，首次抽取量為總體積20%，之后注射尿激酶(河北智同生物制藥有限公司，國藥準字：H13020276)溶解血塊并經由軟管吸出。觀察組在對照組基礎上聯合自體BMSCs移植治療：局部麻醉，實施骨穿操作，抽取10 mL骨髓，將粒細胞分離并以DMEM細胞培養基實施培養，3 d后換液加入重組人堿性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子，繼續培養2周，進行傳代擴增，之后以全反式維甲酸、膠質源性神經生長因子、腦源性神經生長因子誘導分化，成功后將細胞密度調節至1×109個/L；應用分化后BMSCs分別于血腫清除治療后第1天、1周、2周、3周、4周時經由腰椎穿刺輸注至蛛網膜下腔，輸注體積為1 mL；微創血腫清除術操作方法同對照組。

1．2．2 檢測方法：外周血中內皮祖細胞活化度檢測方法：分別在治療前與治療后1周、2周、3周、4周采集2組6 mL外周血，分離單個核細胞并孵育CD34、CD133單克隆抗體之后檢測CD34+CD133+雙陽性細胞所占比；神經營養因子檢測方法：分別于治療前與治療后3周、4周采集2組5 mL外周血，離心獲得血清，以酶聯免疫吸附法檢測NGF、BDNF水平。

1．3 觀察指標 (1)檢測對比2組治療前與治療后1周、2周、3周、4周外周血內皮祖細胞活化度。(2)分別在治療前與治療后3周、4周應用美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)與Barthel指數量表評定2組神經功能缺損狀況及日常生活能力，NIHSS得分越高表示神經功能缺損程度越為嚴重；Barthel指數分值越高說明日常生活能力越強[4]。(3)檢測比較2組治療前及治療后3周、4周神經營養因子(NGF、BDNF)水平。

2 結果

2．1 2組外周血內皮祖細胞活化度比較 2組治療前外周血內皮祖細胞活化度相比，差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組治療后1周、2周、3周、4周內皮祖細胞活化度較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組外周血內皮祖細胞活化度比較

2．2 2組NIHSS、Barthel指數評分比較 2組治療前NIHSS、Barthel指數評分相比，差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組治療后3周、4周神經功能缺損評分將對照組降低，日常生活能力評分均較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2．3 2組NGF、BDNF水平比較 2組治療前NGF、BDNF水平差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對照組提高，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 2組NIHSS、Barthel指數評分比較分)

表3 2組NGF、BDNF水平比較

3 討論

腦出血為一種臨床常見多發疾病，應用微創血腫清除術雖能有效清除腦血腫、降低顱內高壓癥狀，但術后由于血腫壓迫及手術創傷，患者常會遺留不同程度神經功能損傷，如大小便障礙、失語、肢體運動障礙等。

BMSCs為處于骨髓網狀間質內的一種非造血干細胞，有多項分化潛能。研究[5]指出，其可橫向分化成神經細胞，有助于修復由于出血、外傷、缺血等原因導致的神經損傷，同時BMSCs還可加速神經元生長、防止細胞凋亡，可促進神經功能恢復及重建。此外，BMSCs分離純化與體外培養技術均較為成熟，具有良好均一性，且來源于自體組織的BMSCs不會產生排斥反應。閆禹等[6]研究報道，BMSCs可下調血腫周圍髓鞘相關糖蛋白(MAG)、少突膠質細胞髓鞘糖蛋白(OMgp)等軸突生長抑制因子表達水平，促進腦出血大鼠神經功能恢復。胡煒等[7]研究報道，動員BMSCs主要為單核細胞，可進一步分化為內皮祖細胞，內皮祖細胞可大量動員并且參與到病灶側支循環形成中，進而加速局部血管形成，促進患者神經功能重建。本研究結果顯示，觀察組治療后3周、4周神經功能、日常生活能力均優于對照組，觀察組治療后內皮祖細胞活化度均高于對照組(P<0.05)。提示采用自體BMSCs移植治療，可提高內皮祖細胞水平，促進患者神經功能重建，提高患者日常生活能力。BMSCs對于神經功能的重建主要依靠多種神經營養因子的生成及分泌，其中NGF可加速神經元發育、促進軸突形成及延長；BDNF能促進神經元分化與成熟并加速軸突再生，且能減輕血腫中毒副產物對于神經細胞的損害。本研究顯示，觀察組治療后3周、4周NGF、BDNF水平均較對照組提高(P<0.05)。提示采取自體BMSCs移植治療，可加速神經營養因子生成及分泌，從而加速神經功能重建。

綜上，對腦出血患者應用自體BMSCs移植治療效果顯著，可明顯減輕患者神經功能損傷，提高內皮祖細胞與神經營養因子水平，促進其神經功能恢復，提升其日常生活能力。

[1] 曹文鋒，謝旭芳，張洪連，等．自體骨髓間充質干細胞移植治療腦出血臨床研究[J]．中國實用神經疾病雜志，2014，17(7)：10-12．

[2] 田少輝，許磊，李盼祥，等．老年腦出血血腫周圍組織T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3表達及在腦出血發病中的意義[J]．中國老年學雜志，2016，36(6)：1 325-1 327．

[3] 王旭，張志彬，楊宏，等．自體骨髓間充質干細胞動脈和靜脈移植治療急性腦梗死的療效對比[J]．中國老年學雜志，2015，35(6)：1 483-1 484．

[4] 譚支強．微創穿刺引流術聯合干細胞移植治療對高血壓腦出血患者恢復情況、神經功能的影響[J]．海南醫學院學報，2016，22(21)：2 512-2 515．

[5] 張化明，楊冰，楊海，等．自體骨髓間充質干細胞移植聯合康復治療高血壓腦出血的效果觀察[J]．中國綜合臨床，2014，30(9)：967-969．

[6] 閆禹，王燕琳，宋波，等．骨髓間充質干細胞移植腦出血模型大鼠血腫周圍軸突生長抑制因子MAG及OMgp的表達[J]．中國組織工程研究，2012，16(19)：3 457-3 461．

[7] 胡煒，楊楓，唐尤佳．腦出血微創術后自體骨髓間充質干細胞動員對神經功能恢復的影響[J]．中國醫科大學學報，2014，43(5)：437-440．

(收稿2017-01-05)

責任編輯：張喜民

Autologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of patients with intracerebral hemorrhage

Wang Hui，Wang Tian

Nanshi Hospital of Nanyang City，Nanyang 473002，China

ObjectiveTo investigate the effect of autologous bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transplantation on the activation of EPCs and Neurological function in peripheral blood of patients with cerebral hemorrhage．MethodsTotally 86 patients with cerebral hemorrhage were admitted to Nanshi Hospital from June 2014 to June 2016．They were divided into groups according to different treatment schemes，each with 43 cases．The control group received routine minimally invasive hematoma removal treatment，while the observation group was treated with autologous BMSCs transplantation on the basis of the control group．The activity of EPCs in peripheral blood between the two groups after 1 week，2 weeks，3 weeks and 4 weeks was compared with the neurological deficit scores，daily living ability scores and neurotrophic factors[nerve growth factor (NGF) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF)]levels at 3 and 4 weeks after treatment．ResultsThe activation rate of EPCs in the observation group after 1，2，3 and 4 weeks was higher than that of the control group．The difference was statistically significant (P<0.05)．After 3 weeks and 4 weeks，the scores of neurological impairment in the observation group were lower than that in the control group，and the scores of daily living ability were improved compared with the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．The levels of NGF and BDNF in the observation group after 3 weeks and 4 weeks were higher than those in the control group，the difference was statistically significant (P<0.05)．ConclusionAutologous bone marrow mesenchymal stem cells transplantation is effective in the treatment of intracerebral hemorrhage．It can obviously alleviate the damage of nerve function，raise the level of EPCs and neurotrophic factors，promote the recovery of nerve function and enhance their daily living ability．

Bone marrow mesenchymal stem cells；Cerebral hemorrhage；Endothelial progenitor cells；Neurological function

R743.34

A

1673-5110(2017)17-0025-03

10.3969/j.issn.1673-5110.2017.17.008

王輝(1976-)，男，本科。Email：15093036622@163.com