喹諾酮類先導化合物14a在大鼠體內的組織分布

樊 靜， 孫文霞

(成都大學 四川抗菌素工業研究所， 四川 成都 610052)

喹諾酮類先導化合物14a在大鼠體內的組織分布

樊 靜， 孫文霞

(成都大學 四川抗菌素工業研究所， 四川 成都 610052)

采用RP-HPLC法測定喹諾酮類先導化合物14a在大鼠體內各組織中的濃度及分布.將18只SD大鼠隨機分成3組，分別按劑量85 mg/kg灌胃給藥，在1 h、2 h和24 h時處死并迅速取出各組織，制成勻漿樣品，測定各組織中的藥物濃度.結果顯示，大鼠灌胃給藥14a后迅速分布在各組織中，且在肝、腎、肺中濃度高于其他組織.實驗表明，14a吸收較快，在組織中分布廣且無蓄積.

喹諾酮類先導化合物14a；組織分布；反相高效液相法

0 引 言

喹諾酮類先導化合物14a(1-環丙基-6-氟-1,4-二氫-8-甲氧基-7-(3-氨基-4-烷氧亞胺基-1-哌啶基)-4-氧代-3-喹啉羧酸)為喹諾酮類化合物巴羅沙星C-7位的3-甲氨基哌啶基引入甲氧亞胺基結構得到的一種新的先導化合物[1].相關的體內和體外實驗表明，14a與已上市的喹諾酮類藥物相比，表現出更優的抗菌活性[2-4].對此，本研究采用RP-HPLC法測定大鼠灌胃14a后在不同時間點各組織中14a的濃度，分析了14a在大鼠各組織中的分布，擬為14a的藥物代謝動力學分析提供進一步的實驗依據.

1 實 驗

1.1 儀器與試藥

1)實驗所用儀器.LC-10AT型高效液相色譜儀(島津公司)，N-2000型雙通道數據工作站(浙江大學智能信息工程有限公司)，XW-80A型渦流混合儀、勻漿機(海門其林貝雨儀器制造有限公司)，80-2型離心沉淀器(上海儀器廠)，Sartorius BS 224S型電子天平、FE20型pH計(梅特勒—托利多儀器有限公司).

2)實驗所用試藥.14a對照品(含量，99.94%)、內標莫西沙星對照品(含量，99.31%)，由四川抗菌素工業研究所提供；色譜級二氯甲烷(批號，20140213)，由國藥集團化學試劑有限公司提供；乙腈為色譜純；水為雙蒸水，其他試劑為分析純.

1.2 方法與結果

1.2.1 色譜條件.

實驗色譜條件：色譜柱為Sinochrom C18ODS-AP(4.6 mm×200 mm，5 μm，大連依利特科學儀器有限公司)；流動相為乙腈—水(21∶79，加0.2%三乙胺后用磷酸調pH至2.80)；檢測波長為307 nm；流速為1 mL/min；柱溫為40 ℃；進樣量為20 μL.

1.2.2 溶液的配制.

精密稱取14a對照品25.0 mg，置25 mL量瓶中，以蒸餾水配制成濃度為1 mg/mL溶液，作為對照品儲備液；精密稱取莫西沙星對照品2.5 mg，置于25 mL容量瓶中，加蒸餾水配制成0.1 mg/mL溶液，作為內標儲備液.

1.2.3 實驗動物.

健康SD大鼠18只，購自達碩生物科技有限公司(SCXK(川)70B-24)，雌雄各半，體重200～220 g，實驗前適應性圈養一周.

1.2.4 生物樣品的采集.

18只SD大鼠，隨機均分成3組，每組6只，雌雄各半.實驗前禁食12 h，自由飲水，按85 mg/kg灌胃給藥，分別于1 h、2 h和24 h時斷頸處死，迅速取出心、肝、脾、肺、腎、腸、胃、骨骼肌、睪丸、子宮、大腦和脂肪等組織，用蒸餾水洗凈，濾紙吸干，稱重，加生理鹽水均漿制成勻漿樣品，于-20 ℃保存備用.

1.2.5 樣品前處理.

精密量取組織勻漿樣品200 μL，加入5 μL內標溶液，混勻， 加入二氯甲烷1 mL， 渦流提取1 min，3 000 r/min離心10 min，吸取下層有機相600 μL，37 ℃水浴氮氣吹干，殘渣加200 μL流動相復溶，過濾，取20 μL進樣，以內標法按標準曲線計算14a濃度.

1.2.6 方法的專屬性.

按“1.2.1”項條件下測得的色譜圖中(見圖1)，化合物14a和內標物的峰形良好，分離度為5.186，分離完全，內源性雜質峰無干擾，理論塔板數以14a計大于9 000.

圖1心空白組織勻漿(A)、心空白組織勻漿加入14a和莫西沙星內標(B)和心勻漿樣品加入莫西沙星內標(C)的色譜圖

1.2.7 標準曲線及定量限.

精密量取空白組織勻漿200 μL，分別加入14a對照品溶液10 μL和內標溶液5 μL，配制成14a濃度分別為0.25、0.50、2.50、5.00、7.50、15.00 μg/mL的組織勻漿樣品和血漿樣品，按“1.2.5"項下方法處理后測定，以14a峰面積(A14a)與內標峰面積(AIS)的比值對14a濃度(C)進行線性回歸，得到回歸方程及線性范圍，具體如表1所示.

結果表明，各組織樣品在0.25～10.00 μg/mL濃度范圍內14a與內標峰面積比值的線性關系良好，定量限為0.25 μg/mL.

1.2.8 回收率及精密度.

取空白組織勻漿，按“1.2.7"項下方法，配制成含14a濃度為0.50、5.00、7.50 μg/mL的QC樣品各5份，按“1.2.5"項下方法處理后測定，測得14a峰面積為A1；另取14a對照品溶液適量，以流動相配制成14a濃度為0.50、5.00、7.50 μg/mL的標準液，取20 μL進樣分析，測得14a峰面積為A2.

表1 14a在大鼠各組織樣品的線性

計算14a在各組織中的提取回收率(%)(A1/A2×100%).將QC樣品測得的峰面積比(A14a/AIS)代入標準曲線求出各組織的14a藥物濃度C1，并與QC樣品的已知濃度C2相比，從而求得各種組織中14a的方法回收率，計算結果見表2.

表2 14a在各組織中的精密度和回收率(n=5)

1.2.9 14a的組織分布.

將采集的組織樣品勻漿，按“1.2.5”項下方法測定，得到不同時間點各組織的藥物濃度，結果見表3和圖2.結果表明，14a在各組織中均有分布，其中在肝、肺、腎中濃度較高.

表3 大鼠各組織中14a的分布

注：“nd”為未檢出.

圖2 14a在大鼠各組織中的分布(n=6)

2 討 論

實驗發現，使用Sinochrom C18ODS-AP色譜柱分離測定時，內標和14a分離較好，但內標和14a均有一定程度的拖尾，尤其是14a拖尾明顯.經實驗，加入一定量的掃尾劑三乙胺可以改善峰形，三乙胺的加入量以0.2%為佳.14a的最大吸收峰在波長273 nm處，在波長307 nm和362 nm處有次要吸收峰.由于在波長273 nm處溶劑與組織勻漿中引入的雜質干擾了測定，很難達到基線分離.經實驗，將測定波長定為307 nm.

前期，本研究對14a在大鼠體內的藥動學進行了初步分析，發現14a在大鼠體內的Tmax為1.5～2 h，因而組織分布的采集時間點確定為1 h，2 h和24 h：大鼠灌胃給藥后，1 h時各組織中14a的濃度最高，2 h次之，24 h時幾乎檢測不到，此說明14a在組織中無蓄積.此外，在大鼠各組織中，14a分布較廣但濃度有差異，其中在胃、腸、肺、肝、腎中濃度較高，心、脾、生殖腺、肌肉、脂肪、腦中濃度較低，給藥后1 h時，胃、腸分布較多，此與文獻報道的其他喹諾酮類藥物的組織分布相似[5-9].另外，給藥1 h后，大鼠腦組織中均能檢測出少量的14a，說明14a具有一定的脂溶性，可少量地通過血腦屏障進入大腦.

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Abstract:The paper adopts the RP-HPLC method to detect the concentration and distribution of 14a in different tissues in rats.18 SD rats are randomly divided into 3 groups,intragastric administration of 85 mg/kg are done on these rats respectively.Take out tissues from the rats quickly and make the homogenate samples the minute the rats are dead in 1 h,2 h and 24 h.HPLC is used for the determination of drug concentration in various tissues.The results show that after the intragastric administration is done on rats,14a is rapidly distributed to all tissues,and the amount of 14a in liver,kidney,and lung is higher than that in other tissles.The conclusion drawn from the paper is that 14a is quickly absorbed and extensively distributed without accumulation.

Keywords:Quinolones leading compounds 14a;tissues distribution;RP-HPLC

TissuesDistributionofQuinolonesLeadingCompound14ainRats

FANJing,SUNWenxia

(Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu University, Chengdu 610052, China)

R969.1；TQ460.7+2

A

2017-05-17.

成都大學校青年基金(2015XJZ07)資助項目.

樊 靜(1983 — )， 女， 研究實習員， 從事藥物代謝動力學研究.