ER、HNF-1β及COX-2在子宮內膜異位相關性卵巢癌中的表達及臨床意義*

陳 穎,龍啟芳

(蘇州大學附屬第二醫院婦產科 215004)

ER、HNF-1β及COX-2在子宮內膜異位相關性卵巢癌中的表達及臨床意義*

陳 穎,龍啟芳

(蘇州大學附屬第二醫院婦產科 215004)

目的探究雌激素受體(ER)、肝細胞核因子-1β(HNF-1β)以及環氧化酶-2(COX-2)在不同類型子宮內膜異位相關性卵巢癌(EAOC)中的表達差異。方法選取2011年7月至2016年4月蘇州大學附屬第二醫院收治的EAOC患者44例，其中子宮內膜樣癌17例，透明細胞癌21例，卵巢漿液性癌6例。采用免疫組織化學法檢測ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中的表達差異，并采用Spearman秩相關分析探討三者表達水平的相關性。結果ER在子宮內膜樣癌患者中的陽性率為100.0%，顯著高于透明細胞癌患者的9.5%和卵巢漿液性癌患者的0%(χ2=4.305，P<0.01)，而HNF-1β在透明細胞癌和卵巢漿液性癌患者中的陽性率分別為85.7%和100.0%，顯著高于子宮內膜樣癌患者的11.8%(χ2=3.585，P<0.01)，COX-2在子宮內膜樣癌、透明細胞癌和卵巢漿液性癌患者中的陽性率分別76.5%、81.0%、83.3%，差異無統計學意義(χ2=0.744，P=0.104)。ER和HNF-1β的表達水平呈負相關(r=-0.428，P<0.01)，與COX-2的表達水平呈正相關(r=0.204，P=0.013)。結論ER主要在子宮內膜樣癌中表達，HNF-1β主要在透明細胞癌和卵巢漿液性癌中表達，ER的表達水平與HNF-1β及COX-2的表達水平具有一定的相關性。

卵巢腫瘤；雌激素受體；肝細胞核因子-1β；環氧化酶-2

子宮內膜異位癥(endometriosis，EM)是以月經異常、痛經、不孕等為主要癥狀的婦科疾病，在臨床上較為常見。有研究顯示EM在婦女中的發病率為5%～20%[1]。雖然EM為良性疾病，但也具有一些與腫瘤類似的生物學特性，如侵襲性和對正常組織的損傷性，且已有研究表明，EM與卵巢癌發生、發展具有密切的關系[2-3]。腫瘤的發生、發展中伴隨著多種生物學標志的變化，近年的研究表明EM作為卵巢癌發生的誘因，通過影響并改變腫瘤微環境如雌激素受體(ER)的上調、P53的突變、肝細胞核因子-1β(HNF-1β)的激活以及環氧化酶-2(COX-2)的過表達等來促進卵巢癌的發展。但是目前國內外鮮有研究報道這些因子在不同類型EAOC的表達，本研究旨在分析ER、HNF-1β及COX-2在不同類型子宮內膜異位相關性卵巢癌(EAOC)中的表達差異，以及三者的表達水平是否存在相關性，為EAOC的發病機制提供新的見解。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年7月至2016年4月蘇州大學附屬第二醫院婦產科收治的EAOC患者共44例，其中子宮內膜樣癌17例，患者年齡(46.3±6.7)歲；卵巢透明細胞癌21例，患者年齡(44.7±7.2)歲；卵巢漿液性癌6例，患者年齡(45.2±6.1)歲，3組患者年齡、子宮內膜病理分期等一般臨床資料的差異無統計學意義(P>0.05)。本研究排除了有嚴重并發癥如心臟病、糖尿病、精神病等患者以及對本研究所用藥物或試劑過敏的患者，且本研究通過了蘇州大學附屬第二醫院倫理委員會的批準，所有入選患者均簽署了知情同意書。

1.2免疫組織化學檢測 將手術切除的新鮮腫瘤組織以10%甲醛固定，石蠟包埋后進行連續切片，再進行脫蠟，微波爐熱抗原修復，經漂洗、封閉、孵育后分別滴加1∶100比例稀釋的ER、HNF-1β、COX-2單克隆抗體(購自上海翊圣生物科技有限公司)，4 ℃孵育過夜;加二抗(購自上海翊圣生物科技有限公司)37 ℃孵育30 min;滴加辣根酶標記工作液，37 ℃孵育30 min后DAB顯色，蘇木素復染、脫水、封片。免疫組織化學染色采用S-P法，具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3結果判定 在顯微鏡下觀察免疫組織化學染色切片并采集圖像，采用Image-Pro Plus 6.0對ER、HNF-1β及COX-2的免疫組織化學切片進行圖像分析。在高倍鏡(×400)下選擇5個視野，記錄陽性染色細胞百分比，根據染色范圍和染色強度記分并判斷免疫組織化學結果。染色范圍：<5%計0分，5%～20%計1分，20%～50%計2分，>50%計3分；染色強度：無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分；累計0～1分為陰性，2～3分為弱陽性，4～5分為陽性，6分為強陽性。

2 結 果

2.1ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中的表達差異 子宮內膜樣癌患者中ER陽性17例，陽性率為100.0%，透明細胞癌患者中ER陽性3例，陽性率為9.5%，卵巢漿液性癌患者中無ER陽性，差異具有統計學意義(χ2=4.305，P<0.01)；子宮內膜樣癌患者中HNF-1β陽性2例，陽性率為11.8%，透明細胞癌患者中HNF-1β陽性18例，陽性率為85.7%，卵巢漿液性癌患者中HNF-1β陽性6例，陽性率為100.0%，差異具有統計學意義(χ2=3.585，P<0.01)；COX-2在子宮內膜樣癌患者、透明細胞癌患者和卵巢漿液性癌患者中的陽性率分別76.5%(13例)、81.0%(17例)、83.3%(5例)，差異無統計學意義(χ2=0.744，P=0.104)，具體見圖1～3及表1。

A：子宮內膜樣癌；B：透明細胞癌；C：卵巢漿液性癌。

圖1 ER在不同類型EAOC中的表達(×400)

A：子宮內膜樣癌；B：透明細胞癌；C：卵巢漿液性癌

圖2 HNF-1β在不同類型EAOC中的表達(×400)

A:子宮內膜樣癌；B:透明細胞癌;C:卵巢漿液性癌

圖3 COX-2在不同類型EAOC中的表達(×400)

表1 ER、HNF-1β及COX-2在不同類型EAOC中陽性率比較

2.2ER、HNF-1β及COX-2表達水平的相關性分析 Spearman秩相關分析表明，ER和HNF-1β的表達水平呈負相關(r=-0.428，P<0.01)，ER與COX-2的表達水平呈正相關(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β與COX-2的表達水平無明顯相關性。

3 討 論

EM最常異位于卵巢,為育齡期婦女的常見良性疾病,但具有類似惡性腫瘤的生物學特性，并且可以發生惡變，其惡變的種類包括子宮內膜樣癌、透明細胞癌、卵巢漿液性癌、鱗狀腺癌、卵巢腺肉瘤等,其中以子宮內膜樣癌和透明細胞癌最為常見。有研究表明EM通過影響并改變腫瘤微環境中的一系列生物標志物如PTCH2、真核翻譯延長因子1A2(eEF1A2)、ER、HNF-1β、p53、PTEN、COX-2等來誘導EAOC的發生[4-5]，并且近來Worley等[6]的研究顯示大量生物標志物不僅與EAOC相關，并且在EAOC發生、發展的過程中不斷變化，對EAOC發生發展起到重要的影響，但是目前國內外很少有研究分析不同類型EAOC中這些生物標志物的表達差異，本研究旨在探究ER、HNF-1β、COX-2 3種經典的生物標志物在子宮內膜樣癌、透明細胞癌及卵巢漿液性癌中的表達差異及表達水平的相關性，為EAOC的致癌機制提供新的依據。

ER激素受體是固醇類激素受體蛋白超家族成員之一,于1977年首次在子宮內膜細胞中被發現，其分布廣泛，可與激素發生特異性結合而形成激素-受體復合物，使激素發揮其生物學效應。最近研究表明ER在啟動惡性卵巢癌的發生以及促進其發展的過程中具有重要的作用[7]。本研究結果顯示ER在子宮內膜樣癌中呈高表達，陽性率為100%，且表達水平較高，在透明細胞癌中表達較少，僅占9.5%，在卵巢漿液性癌中不表達，均為陰性，差異具有統計學意義(χ2=4.305，P<0.01)。Lai等[8]的研究也表明ER主要表達于子宮內膜樣癌患者，與本研究具有一定的相似性。這一研究結果表明雌激素對子宮內膜樣癌具有非常重要的影響，而對透明細胞癌患者及卵巢漿液性癌患者的影響較小，同時這一研究結果也暗示，臨床上常用的雌激素受體調節劑他莫昔芬(TAM)可能對子宮內膜樣癌患者療效更好，而對于ER陰性的透明細胞癌患者及卵巢漿液性癌患者治療效果會相對較差。本研究對HNF-1β免疫染色的結果顯示HNF-1β在透明細胞癌患者和卵巢漿液性癌患者中的表達較高，陽性率分別為為85.7%和100.0%，而在子宮內膜樣癌中HNF-1β陽性患者僅為11.7%，差異具有統計學意義(χ2=3.585，P<0.01)。早前DeLair等[9]對155例透明細胞癌患者的腫瘤組織進行了形態學及免疫組織化學的研究表明，HNF-1β為透明細胞癌患者特異的腫瘤標志物，而Tsuchiya等[10]更是將HNF-1β作為透明細胞癌臨床診斷的特有腫瘤標志物，而本研究發現HNF-1β不僅在透明細胞癌中呈高表達，在卵巢漿液性癌中的表達也較高，這為不同類型子宮內膜異位相關性乳腺癌的診斷提供了新的生物學標志物。COX-2在腫瘤發生早期起著重要作用，有研究表明COX-2在正常卵巢表面上皮細胞上幾乎不表達,但是在子宮內膜異位癥及卵巢囊腫癌變前的上皮細胞中呈高表達[11]。本研究結果顯示，COX-2在3種不同類型的EAOC的表達不存在顯著性差異，均具有較高的表達，陽性率在80%左右。 Sivula等[12]研究發現浸潤性乳腺癌組織中COX-2的陽性表達率為66%，且COX-2陽性患者較COX-2陰性患者預后更差，這提示COX-2可能是治療乳腺癌的有效靶點，維持COX-2的低表達或合理應用特異性COX-2抑制劑將成為乳腺疾病預防的新途徑。此外本研究采用Spearman秩相關性分析探討了三者表達水平的相關性，結果表明，ER和HNF-1β的表達水平呈負相關(r=-0.428，P<0.01)，ER與COX-2的表達水平呈正相關(r=0.204，P=0.013)。HNF-1β與COX-2的表達水平無相關性(P>0.05)。

綜上所述，本研究結果表明ER主要表達于子宮內膜樣癌患者中，HNF-1β主要表達于透明細胞癌和卵巢漿液性癌患者中，而COX-2在子宮內膜樣癌,透明細胞癌及卵巢漿液性癌中均呈高表達，且ER和HNF-1β的表達水平呈負相關與COX-2的表達水平呈正相關。本研究結果為不同類型EAOC 的臨床診斷以及治療提供了新的合理依據，EAOC發病機制錯綜復雜，近年來就有研究表明miRNA也是影響子宮內膜異位癥及EAOC的重要因子[13]，因此筆者認為應全面分析EAOC相關的新的生物標志物以及這些生物標志物在致病過程中的變化，為EAOC的發病機制提供新的見解。

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ExpressionofER,HNF-1βandCOX-2inendometriosis-associatedovariancanceranditsclinicalsignificance*

ChenYing,LongQifang

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,SecondAffiliatedHospital,SuzhouUniversity,Suzhou,Jiangsu215004,China)

ObjectiveTo investigate the expression difference of estrogen receptor(ER),hepatocyte nuclear factor 1β(HNF-1β) and epoxy-2(COX-2) in different types of endometriosis-associated ovarian cancer (EAOC).MethodsForty-four patients with EAOC treated in our hospital from July 2011 to April 2016 were selected,including 17 cases of endometrioid carcinoma,21 cases of clear cell carcinoma and 6 cases of ovarian serous carcinoma.The expression of ER,HNF-1β and COX-2 in different types of EAOC were detected by immunohistochemistry.The correlation among expression levels of ER,HNF-1β and COX-2 was investigated by adopting Spearman rank correlation analysis.ResultsThe positive rate of ER in endometrioid carcinoma was 100.0%,which was significantly higher than 9.5% in the patients with clear cell carcinoma and 0% in the patients with ovarian serous carcinoma(χ2=4.305,P<0.01),and the positive rate of HNF-1β in the patients with clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 85.7% and 100.0% respectively,which was significantly higher than 11.8% in the patients with endometrioid carcinoma(χ2=3.585，P<0.01),the positive rates of COX-2 in the patients with endometrioid carcinoma,clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma were 76.5%,81.0% and 83.3%,respectively,and the difference was not statistically significant (χ2= 0.744,P=0.104).The correlation analysis showed that ER was negatively correlated with HNF-1β expression level(r=-0.428,P<0.01) and positively correlated with COX-2 expression level (r=0.204,P=0.013).ConclusionER is mainly expressed in endometrioid carcinoma.HNF-1β is mainly expressed in clear cell carcinoma and ovarian serous carcinoma.The expression level of ER had a certain correlation to the expression of HNF-1β and COX-2,which may be closely related to EAOC progression.

ovarian neoplasms;estrogen receptor;hepatocyte nuclear factor-1β;cyclooxygenase

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.27.018

R737.31

A

1671-8348(2017)27-3801-03

2016-11-27

2017-04-25)

江蘇省科技計劃項目(BK2012599)。

陳穎(1983-)，碩士，主治醫師，主要從事婦科腫瘤方面的研究。