離子液體[BMIm][PF6]增強抗性質粒RP4介導的接合轉移基因mRNA的表達水平

汪慶，羅義，崔玉曉，齊麗英，周爍磊，楊光,*

1. 河北工程大學 能源與環境工程學院，河北省水污染控制與水生態修復工程技術研究中心，邯鄲 0560382. 環境污染過程與基準教育部重點實驗室，南開大學，天津300071

離子液體[BMIm][PF6]增強抗性質粒RP4介導的接合轉移基因mRNA的表達水平

汪慶1, 2，羅義2，崔玉曉2，齊麗英1，周爍磊1，楊光1,*

1. 河北工程大學 能源與環境工程學院，河北省水污染控制與水生態修復工程技術研究中心，邯鄲 0560382. 環境污染過程與基準教育部重點實驗室，南開大學，天津300071

環境中廣泛存在的抗生素和抗生素抗性基因會導致很嚴重的人類健康風險。在我們前期研究中發現，離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6])作為環境選擇性壓力可以促進抗生素抗性基因的水平轉移。本研究以E. coli DH5α (RP4) 和同屬的E. coli HB101，以及E. coli DH5α (RP4)和跨屬的Salmonella enterica之間的純菌接合轉移體系為考察對象，從mRNA基因表達調控水平角度闡明離子液體[BMIm][PF6] (0.001～2.5 g·L-1)影響質粒RP4接合轉移的機理。結果表明，離子液體[BMIm][PF6]通過抑制基因korA, korB和trbA的mRNA表達水平來提高接合和跨膜轉運基因trbBp和trfAp的表達；增強水平轉移基因traF的mRNA表達水平，并通過增強負調控基因kilA和kilB的mRNA表達水平抑制質粒的垂直傳遞過程；通過抑制基因trbK的mRNA表達水平降低接合轉移體系的排斥效果，從而促進質粒RP4的接合轉移。該結果有助于為抗生素抗性基因在環境中水平轉移擴散的機理研究提供理論依據。

離子液體；抗生素抗性基因；質粒RP4；接合轉移；mRNA表達

Received12 January 2017accepted13 March 2017

Abstract: Widespread antibiotic and antibiotic resistance genes (ARGs) can pose serious health risks. In our previous study, an ionic liquid (IL) 1-butyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate ([BMIm][PF6]) exerted selective pressure promoting the dissemination of ARGs via horizontal gene transfer. To further investigate the molecular mechanisms of an IL [BMIm][PF6] (0.001-2.5 g·L-1) facilitate the conjugative transfer of ARGs with the mRNA expression levels of conjugative transfer genes, plasmid RP4 conjugative transfer were setup from Escherichia coli DH5α (as the donor) to E. coli HB101 (as the recipient, same species) and Salmonella enterica (as the recipient, across genera). Results of the mRNA expression levels of conjugative transfer genes showed that alleviation of the repression of korA, korB, and trbA genes significantly triggered the expression of trbBp and trfAp, promoting the conjugative transfer of plasmid RP4; Enhanced traF mRNA expression levels for facilitating horizontal transfer and increased kilA and kilB mRNA expression levels for inhibiting the genes responsible for vertical transfer; Inhibited trbK mRNA expression levels for decreasing the entry exclusion phenotype, promoting the conjugative transfer of plasmid RP4. It is helpful to provide theoretical basis for the study of the mechanism of ARGs transfer in the environment.

Keywords: ionic liquid; antibiotic resistance genes; conjugative transfer; plasmid RP4; mRNA expression

抗生素和抗生素抗性基因的廣泛存在和傳播會引起很嚴重的環境生態風險[1-2]。環境中殘留的抗生素所產生的選擇性壓力被認為是抗生素抗性基因出現、存在和傳播的最主要因素[3]。但是，很多報道發現在從來沒有使用過抗生素的環境介質中也檢測到了抗性基因的存在[4]。抗生素抗性基因主要通過接合、轉化和轉導的方式在相同種屬或者不同種屬的細菌之間發生水平轉移，從而導致抗性基因在環境中的傳播擴散[5]。除了抗生素對抗性基因的篩選作用外，其他環境選擇性壓力如重金屬、消毒劑、洗滌劑、生物殺滅劑和納米材料等都可以通過增強水平轉移來促進抗生素抗性基因在環境中的傳播[5-6]。

離子液體作為一種“環境友好型”溶劑，已經廣泛應用于能源[7]、生物技術[8]、化學工程[9]、高分子材料[10]、納米技術[11]等領域。Pham等[12]綜述了離子液體在環境中的毒理、降解、歸趨和環境風險，離子液體的環境毒性與離子液體碳鏈長度和陰、陽離子種類有關。通常，水環境中微生物、水生植物考察濃度在0.001～10 g·L-1(碳鏈長度在4～10之間)[12-13]。通過在植物、動物、微生物、細胞和分子層面對離子液體毒理的研究發現，離子液體可以通過攻擊細胞膜的脂質結構使細胞膜受損傷，導致細胞壁不均勻或改變細胞膜成分[14-15]。細胞膜是細菌同屬或跨屬之間通過水平轉移進行基因交換的重要阻礙[5]。在前期研究工作中，我們初步發現一種離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6])作為環境選擇性壓力，可以促進抗生素抗性基因的水平轉移[16]。但離子液體[BMIm][PF6]暴露怎樣通過影響接合轉移基因mRNA表達水平來達到促進抗生素抗性基因的水平轉移的目的還有待進一步深入研究。

在抗性質粒RP4介導的接合轉移體系中，主要需要兩大調控系統基因[17]：一個是調控供體菌與受體菌接合配對形成系統(Mpf)的基因trbBp，它主要負責供體菌和受體菌細胞的接觸和DNA跨膜轉運過程[18]。另一個是DNA轉移與復制系統(Dtr)的基因trfAp，它主要負責質粒RP4在供體菌細胞內單鏈的切割， DNA的跨膜轉運和單鏈DNA在受體菌細胞內雙鏈的復制過程[19-20]。這2個基因在調控過程中又都受到負調控因子korA、 korB和trbA基因的控制[21]。另外，質粒RP4的接合轉移還受細菌垂直傳遞(自我復制)基因kilA和kilB的負調控以及水平轉移正調控基因traF的影響[22]。在質粒RP4進入受體菌過程中，又會受體細胞進入排斥系統基因trbK的抑制作用[23-24]。

本文主要以E. coli DH5α (RP4) 和同屬的E. coli HB101，以及E. coli DH5α (RP4)和跨屬的Salmonella enterica之間的純菌接合轉移體系為考察對象，研究離子液體[BMIm][PF6] (0.001～2.5 g·L-1) 對質粒RP4在同屬和跨屬之間接合轉移的影響。并從mRNA基因表達調控水平來闡明離子液體[BMIm][PF6]促進質粒RP4接合轉移的機理。本研究有助于為抗生素抗性基因在環境中水平轉移擴散的機理研究提供理論依據。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試劑與儀器

試劑：離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6])購自中國科學院蘭州理化研究所(純度>99.9%)。氨芐青霉素、卡那霉素、鹽酸四環素、鏈霉素購自天津鼎國生物技術公司。

儀器:定量PCR儀(CFX Connect，BIO-RAD)；PCR梯度基因擴增儀(S1000 Thermal，BIO-RAD)；紫外凝膠成像儀(Tanon1600，天能科技有限公司)；電泳儀(DY-A2，上海西巴斯生物技術公司)；恒溫培養箱(GNP-9160, 上海精宏實驗設備有限公司)。

1.2 實驗質粒和菌株

(1)質粒RP4：實驗中的質粒RP4由中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所李君文研究員饋贈。該質粒同時攜帶有氨芐青霉素、卡那霉素和四環素的3種抗生素抗性(ApR, KmR和TcR)，能夠在多個細菌種屬間進行水平轉移。使用前保存于-80 ℃冰箱。

(2)含質粒RP4的細菌E. coli DH5α：通過轉化將質粒RP4轉入感受態的E.coli DH5α中，從而使E. coli DH5α同時攜帶有氨芐青霉素、卡那霉素和鏈霉素3種抗性。

(3)細菌E. coli HB101為實驗室保藏所有。Salmonella enterica為前期實驗篩選獲得的環境土著菌。2種菌都攜帶鏈霉素抗性(StrR)。

1.3 實驗方法

1.3.1 建立質粒RP4純菌接合轉移體系

利用接合轉移實驗考察離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6]) 對質粒RP4從供體E. coli DH5α(ApR, KmR和TcR)分別向受體E. coli HB101 (StrR,同屬接合轉移) 和受體Salmonella enterica(StrR, 跨屬接合轉移)的影響。供體菌(E. coliDH5α)和受體菌(E. coli HB101和Salmonella enterica)分別過夜培養后，菌液經離心后調整菌液濃度至OD600≈0.400(對應的菌液濃度為108cfu·mL-1)。供體菌和受體菌中各加入0.5 mL，混合均勻，并添加離子液體[BMIm][PF6]使其最終濃度為0, 0.001, 0.01, 0.1, 0.5和 2.5 g·L-1，每個濃度設置3組平行。

水平轉移體系置于30 ℃的恒溫培養箱中靜置進行。實驗結束后，利用10倍梯度稀釋法將接合液涂布到LB固體選擇性培養基(100 mg·L-1Ap, 60 mg·L-1Km, 10 mg·L-1Tc，30 mg·L-1Str)篩選接合子。接合子(NT, ApR, KmR, TcR和StrR) 用4種抗性的固體培養基篩選，并以平板上生長的每毫升菌落數(cfu·mL-1)進行計數；受體菌(NS, StrR) 用鏈霉素抗性(30 mg·L-1Str)固體培養基篩選，并以平板上生長的每毫升菌落數(cfu·mL-1)進行計數。接合轉移頻率為接合子與受體菌數量的比值，計算公式為: f = NT(cfu·mL-1)/NS(cfu·mL-1)。

表1 目標基因PCR引物和PCR條件Table 1 PCR primers and PCR conditions

注：FW是前引物， RV是后引物。

Note: FW, forward; RV, reverse.

同時，作為陰性對照，供體菌(E. coli DH5α)和受體菌(E. coli HB101和Salmonella enterica)也分別涂布到含4種抗性的LB固體培養基(100 mg·L-1Ap, 60 mg·L-1Km, 10 mg·L-1Tc，30 mg·L-1Str)上，以排除自發突變產生的具有4種抗性的假接合子。

1.3.2 接合體系RNA的提取

取上述接合菌液，4 ℃下離心收集菌體用于RNA提取。細菌RNA利用Takara的細菌RNA提取試劑盒進行。利用紫外分光光度計測定RNA的純度和濃度，采用TaKaRa第一鏈cDNA合成試劑盒，反轉錄合成cDNA第一鏈，逆轉錄的反應體系和反應條件均參考試劑盒的操作說明。

1.3.3 熒光定量PCR檢測mRNA的表達

檢測mRNA表達的目的基因為: (1) 調控質粒RP4配對和轉移復制的調控基因trfAp和trbBp，以及3個相應的全調控因子基因korA、 korB 和trbA; (2) 影響質粒RP4接合轉移的基因traF、 kilA和kilB；(3) 進入阻礙體系基因trbK。所有基因的引物是根據有關文獻的報道或根據Genebank中該基因的全序列，利用DNAStar的PrimerSdecte程序進行設計。所有基因的引物序列及擴增產物片段長度見表1。

熒光定量PCR方法及體系、標準曲線的制備和基因表達量的計算參考文獻[25-26]。

1.4 數據統計與分析

采用SPSS 20.0對數據進行統計分析。實驗組和對照組數據進行 One way ANOVA檢驗差異性分析，并利用Student-Newman-Keuls (S-N-K) 檢驗，P< 0.05 (*)、P< 0.01(**)為具有顯著性差異。

2 結果與討論 (Results and discussion)

2.1 離子液體[BMIm][PF6]對質粒RP4接合轉移的影響

同屬和跨屬接合轉移體系中，離子液體1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIm][PF6])都能促進質粒RP4的接合轉移(圖1)。接合轉移頻率隨離子液體[BMIm][PF6]濃度的增加而增加(0.001～0.5 g·L-1)，在同屬的從E. coli DH5α到E. coli HB101接合轉移中，0.5 g·L-1[BMIm][PF6] [(1.82±0.38)×10-3]的接合頻率是對照組[(2.07±0.62)×10-5]的80倍。另外，離子液體[BMIm][PF6]同樣促進跨屬的從E. coli DH5α到Salmonella enterica的接合轉移，并且接合轉移頻率隨離子液體[BMIm][PF6]濃度的增加而增加(0.001～0.5 g·L-1)，在濃度0.5 g·L-1[(5.27±0.14)×10-5]時達到最大值，約為對照組[(3.33±0.67)×10-6]的16倍(圖1)。

相反，與0.5 g·L-1離子液體[BMIm][PF6]濃度相比，在離子液體[BMIm][PF6]最高的實驗濃度2.5 g·L-1時，接合轉移頻率開始降低(圖1)。這可能是因為在高濃度(2.5 g·L-1)時，高濃度[BMIm][PF6]對細菌的毒理效應使體系中供體菌和受體菌的濃度過低。同屬和跨屬兩組接合轉移體系中，供體菌、受體菌和接合轉化子在濃度0～2.5 g·L-1離子液體[BMIm][PF6]范圍內生存率可以看出，濃度在0～0.5 g·L-1時，體系中供體菌和受體菌數量基本沒變化，而在2.5 g·L-1高濃度時，供體菌存活率只有對照組的19.65%，受體菌存活率也只有對照組的19.90% (數據未列出)。邱志剛等[27]也報道過同樣的研究結果，在納米材料影響的接合轉移中，高濃度的納米材料使接合轉移頻率降低也是由于在高濃度的納米下，供體菌和受體菌的存活率過低。供體菌和受體菌的菌液濃度是接合轉移過程中的極其重要的因素，過低的菌液濃度會直接導致接合轉移轉移中細菌與細菌接觸的機會，從而導致接合轉移的頻率過低。

同時，研究結果還發現質粒RP4在E. coli DH5α和E. coli HB101同屬之間的接合轉移明顯要高于在E. coli DH5α和Salmonella enterica跨屬之間的接合轉移(P<0.05, S-N-K 檢驗)。

圖1 離子液體[BMIm][PF6]濃度對質粒RP4分別 從E. coli DH5α到E. coli HB101和從E. coli DH5α到 Salmonella enterica接合轉移的影響注：接合轉移條件為pH 7.0, 溫度30 ℃, 接合時間12 h。Fig. 1 The conjugation of plasmid RP4 from E. coli DH5α to E. coli HB101 and from E. coli DH5α to Salmonella enterica was affected by [BMIm][PF6] concentration mated for 12 h at pH 7.0 and 30 ℃.

本文報道的離子液體[BMIm][PF6]促進抗生素抗性基因增強的效果低于0.5 g·L-1納米氧化鋁的效果，0.5 g·L-1納米氧化鋁使質粒RP4從 Escherichia coli到Salmonella spp.的水平轉移頻率比空白對照組高200倍[27]，但是0.5 g·L-1[BMIm][PF6]的促進效果要高于0.16 g·L-1VCl3的促進效果。Ganske等[28]報道了0.16 g·L-1VCl3使Photobacterium到Escherichia coli的水平轉移頻率比空白對照組高2倍。本文中離子液體[BMIm][PF6]的暴露濃度比文獻[29]報道的濃度低3～8倍，在這些高于本文濃度的離子液體暴露下，對Escherichia coli只表現出輕微抑制作用，并且對酵母Saccharomyces cerevisiae和細菌Pichia pastoris、Bacillus cereus的細胞生存能力沒有影響[30]。

通過水平轉移產生的獲得性抗性在抗生素抗性基因從外來菌向土著菌群的轉移和傳播過程中起著非常重要的作用[31-32]。在微生物面臨的眾多新的環境選擇性壓力時，抗生素、重金屬、異性生物質、殺蟲劑、洗滌劑和有機溶劑等都對抗生素抗性基因起著很強的環境選擇性[6]。在本文中，離子液體作為一種選擇性壓力促進抗生素抗性基因在細菌間中的水平轉移，從而導致抗性基因在環境介質中的傳播擴散。尤其值得注意的是，和抗生素不同，離子液體在環境介質中不容易降解，會作為一種持續存在的環境選擇性壓力，長期起到促進抗性基因水平轉移的作用，從而增強離子液體這一新型環境污染物的環境生態風險。

2.2 離子液體[BMIm][PF6]對全調控基因表達的影響

接合轉移受控于供體菌和受體菌之間接合橋的形成，該過程受到雜交對形成系統基因trbBp和質粒轉移復制基因系統基因trfAp的控制[18-20]。它們分別調控質粒RP4的接合和跨膜轉運過程。有文獻研究了在離子液體(1-ethyl-3-methylimidazolium chloride)暴露下，細菌Enterobacter lignolyticus轉運蛋白和藥物外排基因上調，但是離子液體暴露下，接合轉移基因的表達調控還未見報道。在本文中，我們首次研究了離子液體[BMIm][PF6]通過調節接合基因的表達調控來增強質粒的接合轉移。與空白對照組(0 g·L-1[BMIm][PF6])相比，基因trbBp的mRNA表達水平均明顯升高，0.5 g·L-1[BMIm][PF6]中基因trbBp的表達水平最高，同屬E. coli HB101中[(1.33±0.06)×10-4/16S rRNA]和跨屬Salmonella enterica [(9.18±0.86)×10-5/16S rRNA]中分別是空白對照組的18倍和12倍(圖2)。同樣，基因trfAp的 mRNA表達水平在同屬和跨屬中都隨離子液體濃度的增加而升高(圖2)，這將有助于質粒RP4的轉移和復制，促進抗生素抗性基因在環境介質中的傳播擴散。

離子液體[BMIm][PF6]抑制全調控基因korA、 korB和trbA的表達。與空白對照組(0 g·L-1[BMIm][PF6])相比，在同屬和跨屬中，全調控基因korA、 korB和trbA的表達水平都隨著離子液體[BMIm][PF6]濃度的升高而明顯降低(0.001～0.5 g·L-1)(圖3)。基因korA和korB共同抑制trfAp, 而基因korB和trbA共同抑制trbBp。離子液體[BMIm][PF6]通過抑制korA和korB的mRNA表達使trfAp的表達上調; 同時，通過抑制korB和trbA的mRNA表達使trbBp的表達上調。離子液體[BMIm][PF6]通過抑制基因korA、 korB和trbA的表達來提高接合和跨膜轉運基因的表達，從而促進質粒RP4的接合轉移。

圖2 離子液體[BMIm][PF6]對細菌同屬和跨屬接合轉移中調控基因trbBp和跨膜轉運復制基因trfAp mRNA表達水平的影響Fig. 2 The mRNA expression levels of regulatory genes trbBp and transfer and replication gene trfAp of the plasmid RP4 in E. coli DH5α to E. coli HB101 and E. coli DH5α to Salmonella enterica transfers was affected by [BMIm][PF6] concentration

2.3 離子液體[BMIm][PF6]對水平轉移基因表達的影響

抗生素抗性基因的傳播主要通過細菌菌落的垂直傳遞(自我復制)和水平轉移2種途徑[5]。基因traF對水平轉移過程具有正調控作用，而基因kilA和kilB對垂直傳遞過程具有負調控作用[22]。在本文中，我們發現離子液體[BMIm][PF6]增強水平轉移基因的表達并抑制質粒的垂直傳遞過程。與空白對照組(0 g·L-1[BMIm][PF6])相比，在同屬和跨屬中，基因traF的表達水平都顯著升高。在0.5 g·L-1[BMIm][PF6]實驗組，同屬E. coli HB101中基因traF的表達水平是對照組的80倍，跨屬Salmonella enterica中基因traF的表達水平是對照組的65倍(圖4)。同時，接合轉移頻率與基因traF的mRNA表達水平在同屬(圖5 a)和跨屬(圖5 b)接合轉移體系中都具有很好的正相關性。由此可見，同屬E. coli HB101和跨屬Salmonella enterica接合轉移中增強的基因trbK的mRNA表達有助于促進體系中質粒RP4的接合轉移。

高濃度(2.5 g·L-1)的離子液體[BMIm][PF6]抑制細菌的存活率。在本文中，kilA和kilB的mRNA 表達水平隨離子液體濃度的升高而升高(圖4)，說明離子液體[BMIm][PF6]使基因kilA和kilB對垂直傳遞的負調控作用隨濃度增加而增強。這也很好地解釋了離子液體通過抑制細菌生長來減少質粒RP4的垂直傳遞。

2.4 離子液體[BMIm][PF6]對外組排基因表達的影響

進入排斥體系是受體菌對供體質粒進入受體菌過程的阻礙作用。基因trbK主要調控質粒RP4的進入排斥過程[23-24]。基因trbK的mRNA表達水平隨著離子液體[BMIm][PF6]濃度的增加而顯著降低(0.001～0.5 g·L-1)。在同屬的E. coli HB101接合轉移中，對照組基因trbK的mRNA表達水平比0.5 g·L-1[BMIm][PF6] [(1.68±0.32)×10-6/16S rRNA]高94倍，但是，在跨屬的Salmonella enterica接合轉移中對照組基因trbK的mRNA表達水平僅僅比0.5 g·L-1[BMIm][PF6] [(1.81±0.09)×10-4/16S rRNA]高5倍(圖6 a)。同時，接合轉移頻率與基因trbK的mRNA表達水平在同屬(圖6 b)和跨屬(圖6 c)接合轉移體系中都具有很好的負相關性。由此可見，同屬的E. coli HB101接合轉移中基因trbK的mRNA過低表達是同屬的接合轉移頻率比跨屬的接合轉移頻率高的主要原因。

圖4 離子液體[BMIm][PF6]對細菌同屬和跨屬接合轉移中接合基因traF , kilA , kilB mRNA表達水平的影響Fig. 4 The mRNA expression levels of conjugative genes traF , kilA , kilB of the plasmid RP4 in E. coli DH5α to E. coli HB101 and E. coli DH5α to Salmonella enterica transfers was affected by [BMIm][PF6] concentration

圖5 離子液體[BMIm][PF6]對細菌同屬(a)和跨屬(b)接合轉移的轉移頻率與基因traF相對含量的相關性Fig. 5 Correlation between the transfer frequency versus relative abundance of traF gene of the plasmid RP4 in E. coli DH5α to E. coli HB101(a) and E. coli DH5α to Salmonella enterica transfers (b) was affected by [BMIm][PF6] concentration

圖6 離子液體[BMIm][PF6]對細菌同屬和跨屬接合轉移中進入排斥體系基因trbK mRNA表達水平的影響(a)； 離子液體[BMIm][PF6]對細菌同屬(b)和跨屬(c)接合轉移的轉移頻率與基因trbK相對含量的相關性Fig. 6 The mRNA expression levels of entry exclusion system gene trbK of the plasmid RP4 in E. coli DH5α to E. coli HB101 and E. coli DH5α to Salmonella enterica transfers was affected by [BMIm][PF6] concentration (a); Correlation between the transfer frequency versus relative abundance of trbK gene of the plasmid RP4 in E. coli DH5α to E. coli HB101 (b) and E. coli DH5α to Salmonella enterica (c) transfers was affected by [BMIm][PF6] concentration

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◆

AnIonicLiquid[BMIm][PF6]EnhancedthemRNAExpressionLevelsofConjugativeTransferGenesMediatedbyPlasmidRP4

Wang Qing1, 2, Luo Yi2, Cui Yuxiao2, Qi Liying1, Zhou Shuolei1, Yang Guang1,*

1. College of Energy and Environmental Engineering, Hebei Engineering Research Center for Water Pollution Control and Water Ecological Remediation, Hebei University of Engineering, Handan 056038, China2. Ministry of Education Key Laboratory of Pollution Processes and Environmental Criteria, Nankai University, Tianjin 300071, China

10.7524/AJE.1673-5897.20170112006汪慶, 羅義, 崔玉曉, 等. 離子液體[BMIm][PF6]增強抗性質粒RP4介導的接合轉移基因mRNA的表達水平[J]. 生態毒理學報，2017, 12(3): 273-281

2017-01-12錄用日期2017-03-13

1673-5897(2017)3-273-09

X171.5

A

楊光(1987-)，男，環境科學博士，講師，主要研究方向為環境生態學。

國家自然科學基金 (41473085)；環境污染過程與基準教育部重點實驗室開放基金(KL-PPEC-2016-1)；河北省自然科學基金(No. D2017402109)；河北省教育廳青年基金(No. QN2017035)；邯鄲市科技計劃項目(1621212047)

汪慶(1985-)，男，講師，研究方向為環境生態毒理學，E-mail: wangqing@hebeu.edu.cn

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: yang87537@hebeu.edu.cn

Wang Q, Luo Y, Cui Y X, et al. An ionic liquid [BMIm][PF6] enhanced the mRNA expression levels of conjugative transfer genes mediated by plasmid RP4 [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(3): 273-281 (in Chinese)