兩個大環柄菇屬野生菌的鑒定與生境觀測

顧新偉 趙玉蓮 劉 昆 宋小亞 吳邦仁

（1麗水市農作物站，浙江麗水323000；2麗水市蓮都區聯城農業技術服務站，浙江麗水323000；3麗水市農業科學研究院，浙江麗水323000）

通常認為，大環柄菇屬多為可食用大型真菌，其中不乏具有獨特風味和保健功能的珍貴食用菌[1，2]。大環柄菇屬真菌子實體大型，菌蓋常有粗大鱗片，菌柄具可活動的菌環，大環柄菇屬共同的宏觀特征常使基層食用菌專業人員誤認。根據相關報道，我國該屬物種共6個，其中，脫皮大環柄菇（Macrolepiota detersa）和裂皮大環柄菇（M.excoriata）是我國于2010年認定的2個新種[1-3]。根據國內文獻數據庫檢索結果，大環柄菇分離應用研究多集中于高大環柄菇（M.procera）。浙江省域報道的大環柄菇屬種群仍停留于20世紀80年代的高大環柄菇與粗鱗大環柄菇（M.rachodes）2個種，而按照最新的真菌分類與系統學研究成果，粗鱗大環柄菇現歸青褶傘屬（Chlorophyllum rachodes），我國通常仍歸環柄菇屬（Lepiota rachodes）。因此，高大環柄菇為浙江唯一記錄的大環柄菇屬物種[4]。

鑒于大環柄菇在不同生境中有較大的形態差異，各種間宏觀形態又具有一定相似性，筆者對采集到的2個大環柄菇屬子實體標本，在進行形態學鑒定的同時開展rDNA-ITS分析。通過形態特征與核酸序列比對結果相互驗證，確定兩個標本并非浙江省原記錄的高大環柄菇。

1 材料與方法

1.1 生境觀測分別在浙江麗水市蓮都區聯城街道辦事處對面林地，采集標本編號M1，在麗水市白云山森林公園右南坡林地，采集標本編號M2，觀察兩個大環柄菇發生點土壤、肥力、地表植被等主要生境。調取兩個發生點附近氣象觀測站相關數據，分析標本發生條件因子，為分離馴化提供參考。

1.2 子實體形態特征鑒定對采集的標本重點觀察記錄菌蓋形態、大小、表面及邊緣特征，鱗片形態、顏色，菌肉質地與顏色，菌褶顏色、形態以及與菌柄的關系，菌柄長度與直徑、表面特征及內部結構、質地、基部形態，菌環著生位置、形態、質地和表面特征等宏觀特征。將觀察結果與最新發表的參考文獻進行形態學檢索比對[1-3]。

1.3 rDNA-ITS分析將形態存在顯著差異的二個標本的ITS擴增產物由生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序，測得的序列與GenBank核酸序列數據庫進行比對，通過BLASTn檢索具有最大相似性的物種。

2 結果與分析

2.1 發生地主要生境兩個標本均于9月27日發現（采集），附近氣象監測站提供的數據顯示，兩個站點的采集前后一周降水及溫濕度數據非常接近。其中白云山莊站采集前一周為陰雨天氣，最大日降雨量23.5 mm，七天總降雨量67.6 mm。出菇前后溫濕度情況見圖1、2。

圖1 出菇期最高、平均、最低溫度

圖2 出菇期平均、最低相對濕度

M1標本采集于村莊附近古香樟樹下，野生子實體1個。距東北側4 m為村莊道路，距西南20 m為溪灘開墾的果園和菜地，120 m外是甌江小支流。香樟樹下無其它木本植物，郁閉度約75%，地上混生以禾本科為主的多種一年生雜草，雜草與子實體高度基本相當，地表有上年的枯草和香樟枯枝落葉構成的有機質，較肥厚。土壤為沙壤土，土地濕潤。該種當地常見，采集當天還發現另外兩處，共3個，均呈單生狀，生境相似。

M2標本發生森林公園一護林點進出路口旁，周邊馬尾松、泡桐和小葉櫟組成的混交林，高大茂密，郁閉度約65%。地上長一種一年生闊葉植物，高約1 m（后被護林員砍除），地表因經常清掃，枯枝落葉較少，土壤為混雜砂石的粘土。子實體生長區域面積約3.5 m2，共生23個，呈散生至群生狀。

2.2 主要形態特征M1發現時已呈完全開傘狀。菌蓋直徑11 cm，扁半球形，中間無凸起，邊緣有白色至污白色內菌膜殘余，表面被由表皮皸裂成的片狀或塊狀鱗片；鱗片褐色至棕褐色，邊緣少，有脫落，近中間漸密，中間呈龜裂狀連成整片；裸露的表面菌肉會形成平伏的纖毛狀鱗片，呈淡黃白色至灰白色。菌肉白色，肉質，較厚。菌褶白色，寬，不等長，離生。菌柄長21 cm，直徑0.7～0.9（1.1）cm，上細下漸粗，淡棕紅色，表面具密集的粉粒狀棕褐色鱗片，纖維質，中間松軟，拔取時基部殘缺。菌環上位生，中間部分較厚，近肉質，灰褐色；邊緣部分膜質，薄，脆，向上呈杯狀，部分殘缺。

M2發現時尚未開傘。菌蓋初時呈球形至橢圓形，直徑3～5.5 cm，幼嫩時表皮呈棕褐色，后逐步皸裂；開傘前中部及以下被由表皮皸裂成的大片棕褐色殼狀鱗片，有少量脫落，剛開傘時呈半球形，直徑5～9 cm，邊緣及底部鱗片脫落；開傘后平展，直徑13～19.5 cm，中間部位被龜裂狀菌皮，周圍具殼狀鱗片；皸裂后裸露的菌肉白色，表面呈纖毛狀。菌肉白色，肉質，較厚。菌褶白色，老后變淡棕色，寬，密，離生。菌柄初時長15～26 cm，至開傘時長19～31 cm，直徑1.8～2.5 cm，圓柱形（上下幾乎等粗），表面被棕色細鱗片；菌柄中段鱗片呈橫向波浪形有序排列，易擦除；基部膨大至近球形，直徑3～3.7 cm。菌環上位生，中間部分較厚，近肉質，上面白色，下面呈灰褐色與白色相間的環狀，向上呈杯狀；邊緣部分膜質，薄，白色，向下呈裙狀，易碎（圖3）。

圖3 子實體形態

2.3 rDNA-ITS分析結果子實體基因組DNA的ITS區域PCR擴增產物，經測序及修正分析后，標本M1得到一條688 bp的有效堿基序列，序列經核酸序列數據庫進行比對，其與GenBank上傳的“GQ254066.1”標本堿基吻合度99%，具99%相似性，同源性最高，該對照標本種名（Macrolepiota sp.）尚未確認；標本M2得到一條686 bp的有效堿基序列，序列經核酸序列數據庫進行比對，其與GenBank上傳的“KJ524560.1”標本堿基吻合度99%，相似性96%，同源性最高，該對照標本確認種名為Macrolepiota detersa（圖4）。

圖4 標本M1（左）與M2（右）子實體ITS區域堿基序列

3 討論

在浙江省M1被廣泛稱為高大環柄菇，但其形態與最新發布的描述有很大的差異[1]，本次核酸序列比對也表明其與高大環柄菇的相似性僅92%，證明其同源性只能停留在屬的層面。核酸序列數據庫中，大環柄菇屬的許多上傳堿基序列沒有確認到種，要確認尚需結合形態學鑒別[5]。根據宏觀形態觀測，該標本最近似于具托大環柄菇（M.velosa）[1]。由于工作失誤，沒有取得該種形態鑒別關鍵部位——菌托，因而需重新采集完整標本進行最終確認。

大環柄菇子實體大型，菌蓋容易破損或與菌柄分離，影響到許多已馴化大環柄菇的商品性開發[6]。脫皮大環柄菇從菌柄基本伸長到菌蓋開傘有3～5 d時間，在這段時間采收，既能保證子實體單株產量的表達，又使其質量和商品性得到保障。同時，根據野生狀態生境分析，脫皮大環柄菇屬于高溫型菌株，在我國大部分地區可在春夏和夏秋季栽培，生產時段長。因此，該菌株可能具有較大的馴化栽培前景。