加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠血清中Gc球蛋白和內毒素的影響*

蔣朱秀 蔡宛如 李敏靜 陳 曄 江 勁 鄭小偉 蔡月琴

1 浙江中醫藥大學附屬第二醫院 浙江 杭州 310005 2 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053

加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠血清中Gc球蛋白和內毒素的影響*

蔣朱秀1蔡宛如1李敏靜1陳 曄1江 勁1鄭小偉2蔡月琴2

1 浙江中醫藥大學附屬第二醫院 浙江 杭州 310005 2 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053

膿毒癥 急性肺損傷 加味大承氣湯 Gc球蛋白 內毒素 大鼠

膿毒癥多繼發于嚴重感染、創傷、休克和大手術后，是臨床上危重病中最常見的死亡原因[1]。中西醫結合治療膿毒癥導致的急性肺損傷在臨床有一定的療效，但其機制不甚明確，本研究通過加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠的Gc球蛋白和內毒素的影響進行探討，從而闡明加味大承氣湯治療膿毒癥急性肺損傷的機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組：清潔級雄性SD大鼠40只，體質量為200～220g，實驗動物生產許可證號：SCXK(滬)2013-2016，動物合格證號：2008001665123，購于上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，飼養于浙江中醫藥大學實驗動物中心清潔級動物房。動物隨機分為正常組、模型組、中藥組、地塞米松組、中西醫結合組，每組8只。

1.2 主要試劑：ELISA法測定Gc球蛋白試劑盒，批號：E20161227703和ET試劑盒，批號：E20161227704，均購于杭誠維生物科技有限公司。

1.3 實驗藥物：加味大承氣湯由大黃、芒硝各10g，厚樸、枳實、麥冬、當歸各12g，生黃芪20g組成。藥物均購自浙江省中醫藥大學附屬第二醫院藥房，自動煎藥機煎出藥液，再濃縮為含生藥10g/ml。醋酸地塞米松片：浙江仙琚制藥股份有限公司，批號1505121。

1.4 實驗方法：分述如下。

1.4.1 膿毒癥急性肺損傷模型的制備：動物購來后飼養7天，實驗前禁食過夜，自由飲水。預留正常組后，其余均進行造模處理，以5%氯胺酮（0.2ml/100g體重）肌肉麻醉后固定、腹部脫毛、消毒、鋪無菌洞巾。沿腹正中線作1.5cm切口，找到盲腸，仔細剝離腸系膜，在盲腸根部結扎盲腸，避免結扎回腸及盲腸系膜血管。用5ml塑料注射器針頭穿刺盲腸3次，擠出少許腸內容物。之后，將盲腸還納腹腔，逐層縫合腹壁切口，術畢。立即動物皮下注射生理鹽水10ml抗休克。

1.4.2 動物分組和給藥：動物無干預飼養后隨機分為正常組、急性肺損傷模型組（模型組）、加味大承氣湯（中藥組）、地塞米松組、中藥+地塞米松（中西醫結合組），每組8只。造模后立即灌胃給藥1次，以及造模后8h灌胃1次，各組給藥治療方案：加味大承氣湯組分別以10ml/kg的劑量灌胃2次；地塞米松組分別以5mg/kg的劑量灌胃2次；中西醫結合組2種藥物同時灌胃，模型組和正常組以劑量10ml/kg的生理鹽水灌胃。各組大鼠于造模結束后處死，收集標本進行檢測。

1.5 標本采集與處理：各組大鼠麻醉后，分別留取左肺用10%甲醛固定備用，留取右肺迅速置入－80℃冰箱中凍存。

1.6 指標檢測與觀察：分述如下。

1.6.1 病理學觀察：左側肺組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋，行蘇木精伊紅(HE)染色，鏡下觀察肺組織病理學改變。

1.6.2 血清Gc球蛋白和內毒素的檢測：各組大鼠麻醉后，腹主動脈取血，離心，取上清，－20℃貯存備用，應用ELISA方法進行檢測Gc球蛋白和內毒素的濃度。

2 結果

2.1 一般狀態觀察：正常組大鼠飲食毛發正常，活動靈敏，呼吸均勻平穩，大便正常；模型組大鼠部分死亡，精神萎靡，皮毛無光澤，呼吸頻率加快，口鼻周圍有分泌物，不思飲食；藥物干預治療組大鼠死亡率低，大鼠的活動性、反應性以及進食飲水狀況明顯優于模型組，其中中西結合治療組大鼠存活情況最好，其進食、活動情況和反應性最佳。

2.2 各組大鼠腹腔和肺臟肉眼形態學觀察：正常組大鼠腹腔中無明顯滲液，各臟器供血良好，肺臟外觀色澤粉紅，無明顯異常；模型組大鼠腹腔中可見大量混濁滲液，胃腸組織脹氣充血，肺組織充血水腫脹大，呈黯紅色。而中藥組、地塞米松組和中西醫結合湯組則腹腔滲液和肺組織水腫明顯輕于模型組。2.3 加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠模型支氣管和肺組織形態學的影響：取左肺組織切片HE染色后Olympus顯微鏡觀察并照相，見圖1。正常組：肺組織基本正常，肺泡間隔無明顯增寬，毛細血管內皮細胞無明顯腫脹，無出血和纖維素滲出。模型組：肺間質和肺泡內明顯水腫，伴有大量紅細胞滲出和纖維素沉積，肺泡間隔毛細血管內皮細胞可見高度腫脹。地塞米松組：較模型組肺泡間隔有所變窄，毛細血管內皮細胞腫脹減輕，出血明顯減少，纖維素滲出相對減少。加味大承氣湯處理組：較模型組肺泡間隔亦有所變窄，毛細血管內皮細胞腫脹減輕，出血減少，纖維素滲出明顯減少。中西醫結合組：較模型組肺泡間隔變窄，毛細血管內皮細胞腫脹明顯減輕，出血明顯減輕，纖維素滲出明顯減少，恢復程度最佳。

圖1 各組大鼠支氣管和肺組織形態比較

2.4 加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠血清Gc球蛋白和內毒素的影響：見表1。

3 討論

膿毒癥是指感染引起的全身炎癥反應，其發生和發展本是一個極其復雜且迅速的病理生理過程，Gc球蛋白通過部分去糖化，改變其化學結構及功能，轉化成巨噬細胞激活因子（MAF），增強炎癥反應，參與損傷的免疫應答。Gc球蛋白可作為膿毒癥發生機制中的一個重要觀察指標，反映機體的免疫炎癥反應、細胞外肌動蛋白清除儲備能力、細菌內毒素清除能力，有學者認為Gc球蛋白可以作為一個急性時相反應蛋白來判斷急性或嚴重損傷性疾病的預后[2]。

表1 各組大鼠血清Gc球蛋白和ET比較（±s）

表1 各組大鼠血清Gc球蛋白和ET比較（±s）

注：與正常組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別正常組模型組中藥組地塞米松組中西醫結合組Gc球蛋白（mg/ml）236.41±6.35 163.82±9.29△△210.41±5.68**221.09±4.85**230.62±9.15**內毒素（EU/mL）0.32±0.08 0.62±0.05△△0.48±0.07**0.42±0.05**0.36±0.06**

膿毒癥急性肺損傷是臨床危重疾病，隨著感染的發生，胃腸道黏膜屏障受損，菌群紊亂，內毒素入血，進一步加重炎癥反應。而加味大承氣湯由大黃、厚樸、枳實、芒硝、生黃芪、麥冬、當歸組成，奏通腑瀉熱、清營活血之功。臨床研究表明大承氣湯具有降低腸腔壓力、促進腸道蠕動，能夠清除腸細菌和腐敗物，避免腸功能衰竭所導致的細菌移位，減少全身性感染疾病的發生的作用[3]。中醫學認為，肺與大腸相表里，若肺氣被邪毒所遏，肺失宣肅，則可見喘促吸數，邪毒傳入陽明與腸道糟粕縛結，肺氣不通則濁氣不降，擾亂了肺與大腸相表里的生理狀態而出現喘促癥，這與膿毒癥急性肺損傷大鼠模型中的癥象一致。而加味大承氣湯方全方具有瀉下熱結，蕩滌積滯，暢通腑氣作用。本研究結果顯示，加味大承氣湯具有抗炎作用，膿毒癥急性肺損傷模型中，內毒素水平上升，Gc球蛋白下降明顯，而加味大承氣湯可在一定程度上改善膿毒癥急性肺損傷的肺泡炎癥，我們認為加味大承氣湯可能通過上調Gc球蛋白水平從而降低內毒素水平，減輕炎癥反應相關，其具體的機制和作用靶點有必要進行深入研究。

[1]Sykes E,Cosgrove JF.Acute renal failure and the critically ill surgical patient[J].Ann R Col lSurg Engl,2007,89(1)：22-29.

[2]Almansa R,Wain J,Tamayo E,et al.Immunological monitoring to prevent and treat sepsis［J］.Crit Care,2013,17（1）：109-111.

[3]趙伯賢.大承氣湯對重癥急性胰腺炎患者血清 IL-6、TNF-α和 CRP的影響[J].浙江中醫雜志，2016,51（10）：713-714.

浙江省中醫藥科技計劃項目加味大承氣湯對膿毒癥急性肺損傷大鼠免疫系統以及PCT、Gc-globul in調控作用的研究，編號：2015ZA103

2017-05-31