通過親水相互作用色譜串聯質譜法快速測定葡萄中的乙烯利

胡三明

摘 要：乙烯利分析通常需要間接和費力的方法，包括氣相色譜串聯質譜（GC-MS / MS）測定前的衍生化步驟。在本文中，所描述的方法是快速的，并且基于簡單的程序而沒有任何清理。加入乙烯利D4作為替代物后，進行甲醇萃取。通過電噴霧負模式與MS / MS耦合的高效液相色譜（LC）進行測定。在親水相互作用液相色譜（HILIC）柱上實現色譜分離。該方法顯著地將分析時間縮短到大約10分鐘，樣品提取和10分鐘的測定。用定量極限的葡萄樣品，50μgkg-1和200μgkg-1評估分析性能。獲得的結果符合SANCO / 12571/2013標準，回收率約96%，典型的同位素稀釋法（提取效率≈60%）。日內重復性和日常重現性條件下的相對標準偏差分別低于5%和11%。此外，所述方法是環境友好的并且允許顯著降低溶劑和試劑消耗。

關鍵詞：親水相互作用；色譜串聯質譜法；乙烯利

1 引言

乙烯利（2-氯乙基膦酸）是合成植物生長調節劑。這類生理和生物物質產生與內生對應物類似的作用。乙烯利用于改善機械收獲的水果脫落，秸稈起酥化和加強，增加抗倒伏性，促進或抑制開花，促進成熟和著色，提高糖含量。這種系統性農藥轉運到植物組織中并分解成乙烯。乙烯是活性劑，與植物生長和發育過程中的各種天然生理過程有關。在比利時，乙烯利的銷售量達到每年25噸以上（“聯邦公共衛生食品鏈安全與環境2014”）。2012年，比利時食品機構為此植物生長調節劑專門研究了123種水果。在47個樣品（聯邦食品安全署2013年）中檢測到了乙烯利殘留。報告了幾種主要用于葡萄的通知，用于食品和飼料快速預警系統的乙烯利（歐洲委員會2014年RASFF）。

2 材料和方法

2.1 化學試劑

乙烯利購自Sigma-Aldrich（Seelze，Germany），認證純度為99.3%。氘代乙烯利（乙烯利D4）獲自Dr. Ehrenstorfer GmbH（Augsburg，Germany），認證純度為98%。 通過凈化系統（Millipore Milli-Q Water System，Bedford，USA）獲得蒸餾水（<8MΩcm電阻率）。 甲醇和乙腈均為Biosolve的HPLC級（Valkenswaard，荷蘭）。 氫氧化銨25%和認證純度為98-100%的甲酸購自默克（德國達姆施塔特）。 在1mg ml-1的甲醇中制備乙烯利儲備溶液。 在甲醇中以10μg/ ml的濃度制備內標儲備溶液，乙烯利D4。通過用甲醇稀釋儲備溶液制備稀釋標準品。 校正溶液由稀釋標準品和乙烯利D4制備。所有溶液儲存在-18℃。

2.2 高效液相色譜耦合質譜法

使用與Waters（Milford，USA）的Xevo TQ-MS耦合的Acquity UPLC。該儀器由MassLynx?軟件4.1版本控制，由列管理器，10μl循環的樣品管理器和二元溶劑管理器組成。在距離Merck（Darmstadt，Germany）3.5μm，2.1×100mm的zic-HILIC色譜柱上實現LC分離，該柱與5μm，2.1×20mm的zic-HILIC預柱耦合，使用流速為0.3 ml min-1，有效運行時間為10 min。流動相A含有通過加入氫氧化銨使100%H 2 O達到pH9.3。流動相B含有95%ACN和5%流動相A.流動相B的百分比如下改變：0分鐘，100%； 7.5分鐘，43%； 8分鐘，43%； 8.5分鐘，100%； 10分鐘，100%。注射體積為3μl，部分循環模式，針頭填滿。注射一套后，用混合水/ ACN（10/90）在60分鐘內沖洗柱。質譜儀在Es-中進行。與Es +相比，我們的系統顯示出更好的靈敏度。乙烯利和乙烯利D4的調諧參數和MRM轉換詳見表1.氬氣用作0.35 ml / min-1的碰撞氣體。定量離子的停留時間設定為300 ms，定性離子的停留時間設定為200 ms，內標離子的停留時間為100 ms。這些高停留時間值通過降低噪聲來提高靈敏度。

3 結果與分析

用酸化的甲醇直接注入提取的樣品，無需任何純化，導致色譜圖與許多基質干擾接近乙烯利峰。為了最小化這些干擾，測試了三種不同的純化方法：一夜間冷凍，SPEC18或PSA。不幸的是，這三次測試清除并沒有消除色譜干擾。在使用C18或PSA SPE柱的情況下，甚至觀察到一些恢復的損失。這就是為什么在提取步驟之后沒有添加清除。然而，更多的努力專門用于色譜分離。根據以前的研究，HILIC柱的特征在于親水性程度，親水疏水取代基的選擇性，分子形狀的選擇性，酸堿性質的評價使用一些衍生物的固定相。

4 結語

已經開發了用于量化葡萄中的乙烯利的分析方法。這種方法似乎是快速和容易地應用，因為不需要費力的清理或衍生化步驟。一批10個樣品的過程包括空白程序和質量控制，從提取到注射不到1小時。該批次的LC-MS / MS測定時間少于3小時。同位素稀釋技術的使用不僅補償了遇到的分析物損失，而且還防止了基質效應。色譜法基于親水相互作用。對7列進行的測試證實，在相似的HILIC化學上獲得了不平等的結果。在選定的zic-HILIC色譜柱上，pH條件的優化改善了峰值形狀，干擾中的分辨率和在負電噴霧電離模式下工作的質譜儀上的乙烯利響應。該驗證通過了SANCO / 12571/2013標準，其恢復率約為96%，RSD遠遠低于日內重復性和日重復性的可接受的20%。所提出的方法也是環保的，顯著降低溶劑消耗并防止任何使用二氯甲烷。

參考文獻：

[1]葉德練，王玉斌，周琳，李建民，段留生，張明才，李召虎. 乙烯利和氮肥對夏玉米氮素吸收與利用及產量的調控效應[J]. 作物學報，2015（11）：1701-1710.