BCYRN1調控miR-503通過Notch1信號通路對肺癌遷移和侵襲的影響①

張婧婧 張 軼 姬穎華 張 敏 李偉偉 楊慶輝 王 瑾 于海川 路 平 王向鵬

(河南省新鄉醫學院醫學檢驗學院和分子診斷與醫學檢驗技術河南省協同創新中心，新鄉 453003)

BCYRN1調控miR-503通過Notch1信號通路對肺癌遷移和侵襲的影響①

張婧婧 張 軼 姬穎華②張 敏②李偉偉②楊慶輝②王 瑾②于海川 路 平②王向鵬

(河南省新鄉醫學院醫學檢驗學院和分子診斷與醫學檢驗技術河南省協同創新中心，新鄉 453003)

目的探討BCYRN1調控miR-503通過Notch1信號通路對肺癌遷移和侵襲的影響機制。方法qPCR檢測不同肺癌細胞株中BCYRN1和miR-503的表達情況；免疫熒光和qPCR檢測慢病毒BCYRN1+siRNA轉染肺癌細胞的轉染效率；雙熒光素酶報告基因檢測BCYRN1與miR-503的相互作用；Transwell侵襲實驗和劃痕實驗檢測沉默BCYRN1后肺癌細胞侵襲和遷移能力的變化；Western blot檢測沉默BCYRN1后Notch1信號通路蛋白的表達情況；裸鼠皮下成瘤檢測沉默BCYRN1后肺癌細胞裸鼠體內成瘤能力的影響。結果在肺癌細胞H1299中BCYRN1表達水平最高，miR-503的表達水平相對較高；免疫熒光及mRNA水平證明BCYRN1+siRNA慢病毒可以有效轉染進入H1299細胞內；BCYRN19能與miR-503的3′-UTR特異性結合；沉默BCYRN1可以抑制肺癌H1299細胞的侵襲和遷移能力；沉默BCYRN1后Notch1通路蛋白表達情況相應下調；與NC組相比，BCYRN1-siRNA組荷瘤小鼠腫瘤體積和重量都明顯減小。結論BCYRN1可以靶向調節miR-503通過Notch1信號通路影響肺癌H1299細胞的侵襲和遷移能力。

BCYRN1；肺癌；miR-503； Transwell

肺癌是全球呼吸系統腫瘤發病率最高的腫瘤，男性發病率相比女性要明顯增高，其中吸煙是重要的因素之一[1]。 肺癌患者的5年整體生存率約為10%～15%，而且晚期失去手術機會，預后效果不佳，導致其死亡率居高不下[2]。非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)，是肺癌最常見的一種類型，容易出現早期轉移，所以也是肺癌中最難治療和防范的一種[3]。尋找有效的早期診斷治療和分子治療靶點是目前的亟需解決的問題。

長鏈非編碼RNA(Long-chain non-coding RNA，lncRNA)是指非編碼的不小于200nt的一種RNA[4]。 在多種類型的腫瘤發現lncRNA表達參與癌癥的增殖和轉移等惡性行為[5,6]。例如，被稱為MALAT-1的lncRNA被證明是誘導肺癌細胞遷移和轉移動力的相關基因[7,8]。 根據文獻，BCYRN1是一種由200個核苷酸組成的lncRNA，在乳腺癌、宮頸癌、食道癌、肺癌等的一些惡性腫瘤中高度表達，在正常組織中很少能有效檢測其表達[9]。

最近有研究表明BCYRN1在腫瘤進展中通過抑制部分轉移抑制因子的轉錄起到促進其發展的作用[10]。曾有研究指出，miR-503與肺癌細胞的轉移密切相關[11]。在腫瘤轉移期間，Notch通路的激活可以通過各種方式與腫瘤細胞相互作用，調控腫瘤細胞的轉移潛力[12]。

然而，目前關于BCYRN1的作用及其相關性miR-503在肺癌中表達和轉移作用機制尚不太了解。本研究通過以下研究初步完成闡明BCYRN1和miR-503的關系以及其在肺癌細胞中的可能調控作用。

1 材料與方法

1.1細胞系和試劑 5種人肺癌細胞系，包括A549、H1299、SPCA-1、H1650及H520，以及人正常支氣管上皮細胞株16HBE，均購買于中國上海細胞研究所。細胞培養條件，16HBE和SPCA-1在DMEM培養基(90%)中加入10%胎牛血清(Hyclone，USA)，其余細胞在RPMI1640培養基中培養，均放在37℃下，5%CO2的恒溫孵箱中培養。

1.2方法

1.2.1BCYRN1+siRNA慢病毒感染 通過慢病毒轉染獲得過表達BCYRN1+siRNA的細胞，將編碼BCYRN1+siRNA或空載體的慢病毒感染到H1299細胞中。并根據制造商的說明書使用Lipofectamine 2000(Invitrogen，Carlsbad，CA)將其轉染入細胞48 h，通過GFP表達選擇具有穩定的BCYRN1+siRNA表達的克隆細胞株。

1.2.2miRNA的實時PCR分析 使用TRIzol試劑(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)分離肺癌細胞的總RNA，并使用TM miRNA分離試劑盒(Ambion，Austin，TX，USA)進一步純化miRNA部分。通過光譜測定RNA樣品的濃度和純度。使用實時PCR系統進行實時逆轉錄PCR(qPCR)。U6管家基因作為對照。使用2-ΔΔCt方法計算肺癌細胞的miRNA相對表達量。實驗重復3次。

1.2.3雙熒光素酶活性測定 驗證BCYRN1和miR-503的相關關系，我們使用雙熒光素酶測定，將24孔板中的BCYRN1或NC細胞與0.4 mg螢火蟲熒光素酶報告載體和0.1 mg含有海腎螢光素酶(Promega)的pRL-TK對照載體共轉染，根據 siPORTneoFX使用方法操作，在轉染后48 h制備裂解物。使用雙熒光素酶報告基因測定系統(Promega)，轉染24 h后測定熒光素酶活性。 對于每個轉染的螢火蟲螢光素酶活性被歸一化為海腎螢光素酶活性。實驗重復3次。

1.2.4細胞遷移和侵襲測定 對于遷移測定，將5×104個肺癌細胞注入24孔Transwell小室中，每個孔中具有8.0 μm孔的聚碳酸酯濾室。 對于侵襲試驗，將5×104個肺癌細胞置于上室，并加入Matrigel基質膠(BD Bioscience，Woburn，MA，USA)。將具有10%FBS和HGF(20 ng/ml)的培養基置于下室中。在37℃下孵育24 h后，小心地去除上膜表面上的細胞。用95%乙醇固定20 min后，用0.5%結晶紫溶液染色10 min，自來水沖洗干凈過后，于倒置顯微鏡下計數。實驗重復3次。

1.2.5Western blot蛋白質印跡 用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離總蛋白，并將其轉移到硝酸纖維素膜(Bio-Rad，Hercules，CA)。使用5%脫脂牛奶充分封閉膜，并與一抗(濃度1∶1 000)，內參GAPDH(濃度1∶2 000)，4℃，孵育過夜。次日，TBST充分沖洗過后，使用二抗辣根酶標記物(濃度1∶2 000) 孵育2 h，TBST充分沖洗過后，使用增強的化學發光試劑ECL顯影液檢測目標蛋白的表達水平。使用GAPDH作對蛋白內參對照。實驗重復3次。

2 結果

2.1不同肺癌細胞株中的BCYRN1的表達和miR-503表達 通過檢測mRNA水平篩選合適的肺癌細胞株。實驗結果表明(圖1A)，BCYRN1在肺癌細胞中表達水平，在A549、H1299、SPCA-1、H1650及H520細胞中均呈現呈高表達水平，在H1299中表達水平明顯最高。同樣，miR-503在不同肺癌細胞株中的表達如圖1B所示。BCYRN1和miR-503的表達水平在肺癌細胞株中均比人支氣管細胞株(16HBE)表達升高，表明可能扮演一定的促癌作用。后續試驗我們選取H1299細胞株。

2.2檢測慢病毒BCYRN1+siRNA的轉染效率檢測 圖2A顯示，使用慢病毒BCYRN1+siRNA1和BCYRN1+siRNA2轉染H1299細胞，免疫熒光顯示二者轉染效率均高于80%，mRNA水平檢測同樣顯示慢病毒轉染后BCYRN1的表達明顯下調，差異具有統計學意義。

2.3雙熒光素酶檢測BCYRN1和miR-503之間的關系 為明確與BCYRN1和下游miR-503相關的miRNA的情況，我們使用生物信息學預測工具明確，BCYRN1可能與miR-503直接相互作用，相關結合位點如圖3A所示。為了驗證BCYRN1能否與miR-503 3′UTR結合，我們將BCYRN1-siRNA與miR-503共轉染到肺癌H1299細胞株中。熒光素酶報告基因結果顯示(圖3B)：BCYRN1+siRNA可以明顯抑制miR-503的熒光素酶活性。表明BCYRN1-siRNA能與miR-503的3′UTR特異性結合，并可以調控miR-503的表達。

圖1 BCYRN1和miR-503在肺癌組織和細胞株中的表達水平 Fig.1 Expression levels of BCYRN1 and miR-503 in lung cancer tissues and cell linesNote: A.Expression of BCYRN1 levels in different lung cancer cell lines；B.Expression of miR-503 in different lung cancer cell lines.

圖2 慢病毒在肺癌細胞株中的轉染效率 Fig.2 Transfection efficiency of lentivirus in lung cancer cell linesNote: A.Immunofluorescence was used to detect transfection efficiency of BCYRN1;B.qPCR was used to detect the expression of BCYRN1 in H1299 lung cancer cells.**.P<0.001.

2.4肺癌細胞的遷移和侵襲能力受到BCYRN1的調節 如圖4A所示，Transwell遷移試驗檢測BCYRN1對肺癌H1299細胞遷移能力的影響，BCYRN1+siRNA1和BCYRN1+siRNA1組的H1299細胞遷移數目明顯少于NC組的數目[(25.3±2.2)% vs(85.6±6.3)%,P=0.018]，表明BCYRN1的表達下調可以抑制H1299細胞的遷移能力。同理，如圖4B所示，Transwell侵襲試驗也顯示，BCYRN1的表達下調對基質膠的溶解能力下降，導致H1299細胞的侵襲能力相應減弱[(21.7±1.9)% vs (68.2±5.9)%,P=0.009]。差異均具有統計學意義。 所有上述結果提示H1299細胞遷移和侵襲能力可由BCYRN1進行相應調節。

圖3 雙熒光素酶實驗檢測BCYRN1和miR-503之間的關系Fig.3 Double luciferase assay to detect relationship between BCYRN1 and miR-503Note: A.Binding site of BCYRN1 to miR-503;B.Double luciferase to detect the relationship between BCYRN1 and miR-503.*.P<0.05.

圖4 遷移和侵襲實驗檢測BCYRN1對肺癌細胞的影響Fig.4 Migration and invasion experiments to detect effect of BCYRN1 on lung cancer cellsNote: A.Migration experiments to detect the effect of BCYRN1 on H1299 migration capacity；B.Invasion assay to detect the effect of BCYRN1 on H1299 invasion.

圖5 Notch1蛋白通路的表達水平Fig.5 Expression level of Notch1 protein pathwayNote: A.Western blot to detect Notch1 pathway protein expression;B.Notch1 pathway protein corresponding expression.**.P<0.001.

圖6 裸鼠成瘤實驗檢測BCYRN1對肺癌細胞的影響Fig.6 Effect of BCYRN1 on lung cancer cells in nude mice by tumorigenesisNote: A.Nude mice tumor formation test to detect BCYRN1 on lung cancer H1299 cells in vivo tumorigenic ability;B.Comparison between BCYRN1-siRNA group and NC group nude mice tumor weight.**.P<0.001.

2.5BCYRN1的表達對North1信號通路的影響情況 為了研究BCYRN1調控H1299細胞的生物學行為是否和Notch1信號通路相關。Western blot實驗結果顯示，抑制BCYRN1之后Notch1信號通路中的Notch1和hes1蛋白表達相應下調[(108.3±10.34)% vs (30.2±3.26)% vs (28.1±4.56)%，P=0.019]，差異有統計學意義。說明抑制BCYRN1后肺癌H1299細胞的生物學行為的改變可能是通過Notch1信號通路進行調控的。

2.6BCYRN1的表達對肺癌細胞裸鼠體內成瘤能力的影響 裸鼠成瘤實驗結果顯示，腫瘤生長情況如圖所示(圖6A)：與NC組裸鼠腫瘤大小相比，BCYRN1-siRNA組的腫瘤體積明顯減小[體積(2.89±0.35)cm3vs (0.27±0.11)cm3，P=0.029]。處死裸鼠后，剝除腫瘤重量對比(圖6B)：與NC組相比，BCYRN1-siRNA組裸鼠腫瘤重量明顯減小[(3.06±0.44)g vs (1.05±0.17)g，P=0.016]。表明抑制BCYRN1的表達后可以抑制肺H1299癌細胞的體外成瘤能力。

3 討論

肺癌是全球發病率和死亡最高的呼吸系統惡性腫瘤，由于其誘因繁多，早期診斷率低，誤診情況出現較多，在我國的發病率遠遠高于部分發達國家，對人類的健康威脅巨大[13,14]。然而肺癌的具體病因和發病機制未完全研究清楚，鑒于其高危因素眾多，對于有效預防和早期診斷存在很大難度，一般認為是多種混合高危因素互相影響的結果[15,16]。關于肺癌的治療目前進展仍然緩慢，盡管針對少部分肺癌亞型可以通過綜合治療獲得一定程度上的緩解，但是大部分類型的肺癌治療效果不佳或者緩解后容易復發[17]。所以對肺癌分子發病機制的研究，可以為臨床早期診斷和治療提供有效的作用靶點和標志物，具有重要的科研和臨床意義，也是目前多學科研究的重點方向。

長鏈非編碼BCYRN1，也被稱為BC200，一般在正常組織中表達很低，在多種類型的腫瘤組織中異常表達[18]。在研究中，在不同的肺癌細胞株中都觀察到BCYRN1高表達水平，相比正常支氣管上皮細胞，BCYRN1可能扮演一個促進腫瘤進展的因子。有研究表明，lncRNA對腫瘤的影響一般都是通過下游相關miRNA或蛋白靶點的激活發揮作用，lncRNA的異常表達通過調節腫瘤抑制或激活因子來誘導腫瘤發生[19]。

miR-503是常見的一種具有促癌作用的mRNA，其可以調控下游c-myc、Meg3等因子，可以調控數十種人類惡性腫瘤的進展，與患者診斷和預后都有一定關聯[20]。有研究表明，miR-503通常在腫瘤抑制途徑中被抑制，在致癌物中有相當活躍的狀態，從而間接說明了其可以促進腫瘤的發生發展過程[21]。生物基因學者研究表明，miR-503的靶向因子基因多達3 000個人類基因，證明其存在的廣泛性[22]。根據我們的實驗結果發現，miR-503與BCYRN1的表達也存在一定的反饋關聯，表明BCYRN1與對miR-503有一定的調控能力，尤其在肺癌H1299細胞中。miR-503是BCYRN1下游的一個作用靶標。還有學者研究發現其具體的機制可能是通過影響細胞的黏附能力進而影響腫瘤細胞的遷移和侵襲。

我們研究表明，BCYRN1的表達增高，可以導致肺癌H1299細胞的侵襲和遷移能力增強。Xu等[23]研究表明，BCYRN1的表達水平與肺癌的分期有關，并且BCYRN1與肺癌浸潤深度和轉移范圍呈一定相關關系。本研究通過沉默BCYRN1的表達，發現肺癌細胞的侵襲和遷移能力變弱，結合前面實驗結果表明BCYRN1在肺癌的發生、發展過程中起重要作用。然后繼續探討BCYRN1肺癌細胞可能的作用機制，通過關于lncRNA的包括生物信息學預測結合實驗驗證發現BCYRN1與miR-503有相似的結合位點，通過雙熒光素酶檢測BCYRN1和miR-503有直接的相互作用，表明BCYRN1可能是通過調控miR-503的表達對肺癌細胞進行干擾影響的。有學者研究報道，由于BCYRN1在不同類型的腫瘤中差異表達，表明BCYRN1的表達是具有組織特異性的[24]。在本研究中，我們發現BCYRN1在H1299肺癌細胞中表達水平顯著上調。以前的研究表明，可能是因為表觀遺傳學的改變混合影響下游miRNA的失調表達。所以，需要進一步的研究來闡明潛在的可能機制。根據以往的研究顯示，BCYRN1在口腔癌細胞和肝細胞癌細胞中表達下調，而在甲狀旁腺癌，視網膜母細胞瘤和腎上腺皮質癌中表達上調[25]。

盡管在不同腫瘤中的調控水平存在不一致的情況，可以考慮是由于其作用機制不同所致。此外，BCYRN1也被報道可以直接通過蛋白質和mRNA水平抑制內源性CCND1來增加增殖期間的細胞群的生長速度來調控細胞生長，這表明BCYRN1是明確的促癌因子[26]。

為了進一步明確BCYRN1下游的調控腫瘤細胞轉移的機制，我們通過檢測細胞轉移相關通路Notch1的激活情況，發現Notch1通路的的激活與BCYRN1的表達有一定的關系，表明BCYRN1誘導腫瘤細胞的轉移和Notch1通路有密切關系。Notch1通路中的Notch1和hes1蛋白的表達是可以調節腫瘤細胞的轉移行為的[27]。在本研究，通過Western blot分析發現Notch1蛋白質水平隨著BCYRN1的降低水平而相應下降，間接證明BCYRN1可以激活Notch1通路的活性。所以，我們可以得出結論，BCYRN1的表達以某種方式影響了下游miR-503的表達從而激活Notch1信號通路對肺癌細胞的生物學行為進行調控。

我們針對BCYRN1在肺癌中的作用和具體機制進行了上述實驗探討，并通過靶向作用于BCAR4下游miR-503靶點，從而激活Notch1信號通路，驗證H1299肺癌細胞的侵襲和遷移能力受到相應的調控。本研究結果不但豐富了BCYRN1在肺癌中的作用機制，而且還為以肺癌的早期診斷和分子靶標的治療提供有力的理論支持。

[1] Cella DF,Bonomi AE,Lloyd SR,etal.Reliability and validity of the functional assessment of cancer therapy-lung(FACT-L)quality of life instrument[J].Lung Cancer,1995,12(3):199-220.

[2] Brodowicz T,Krzakowski M,Zwitter M,etal.Cisplatin and gemcitabine first-line chemotherapy followed by maintenance gemcitabine or best supportive care in advanced non-small cell lung cancer:a phase III trial[J].Lung Cancer,2006,52(2):155-163.

[3] 吳一龍,王長利,廖美琳,等.明智選擇:常見的肺癌治療決策[J].循證醫學,2014,14(3):129-135.

[4] Gupta RA,Shah N,Wang KC,etal.Long non-coding RNA HOTAIR reprograms chromatin state to promote cancer metastasis[J].Nature,2010,464(7291):1071-1076.

[5] Wang P,Ren Z,Sun P.Overexpression of the long non-coding RNA MEG3 impairs in vitro glioma cell proliferation[J].J Cell Biochem,2012,113(6):1868-1874.

[6] Liu X,Sun M,Nie F,etal.Lnc RNA HOTAIR functions as a competing endogenous RNA to regulate HER2 expression by sponging miR-331-3p in gastric cancer[J].Mol Cancer,2014,13(1):92.

[7] Arun G,Diermeier S,Akerman M,etal.Differentiation of mammary tumors and reduction in metastasis upon Malat1 lncRNA loss[J].Genes Dev,2016,30(1):34-51.

[8] 張軍旗,祝 德.長鏈非編碼 RNA MALAT1 與非小細胞肺癌患者腫瘤復發和預后的相關性研究[J].廣西醫科大學學報,2016,33(3):459-463.

[9] Booy EP,McRae EKS,Howard R,etal.RNA helicase associated with AU-rich element(RHAU/DHX36)interacts with the 3′-tail of the long non-coding RNA BC200(BCYRN1)[J].J Biol Chem,2016,291(10):5355-5372.

[10] Zhang XY,Zhang LX,Tian CJ,etal.LncRNAs BCYRN1 promoted the proliferation and migration of rat airway smooth muscle cells in asthma via upregulating the expression of transient receptor potential 1[J].Am J Transl Res,2016,8(8):3409.

[11] Kim J,Kang Y,Kojima Y,etal.An endothelial apelin-FGF link mediated by miR-424 and miR-503 is disrupted in pulmonary arterial hypertension[J].Nature Med,2013,19(1):74-82.

[12] Sonoshita M,Itatani Y,Kakizaki F,etal.Promotion of colorectal cancer invasion and metastasis through activation of NOTCH-DAB1-ABL-RHOGEF protein TRIO[J].Cancer Discovery,2015,5(2):198-211.

[13] 姚曉軍,劉倫旭.肺癌的流行病學及治療現狀[J].現代腫瘤醫學,2014,22(8):1982-1986.

[14] 支修益,石遠凱,于金明.中國原發性肺癌診療規范(2015 年版)[J].中華腫瘤雜志,2015,37(1):67-78.

[15] Solomon B J,Mok T,Kim D W,etal.First-line crizotinib versus chemotherapy in ALK-positive lung cancer[J].New England J Med,2014,371(23):2167-2177.

[16] Janne PA,Yang JCH,Kim DW,etal.AZD9291 in EGFR inhibitor-resistant non-small-cell lung cancer[J].New England J Med,2015,372(18):1689-1699.

[17] Rizvi NA,Mazières J,Planchard D,etal.Activity and safety of nivolumab,an anti-PD-1 immune checkpoint inhibitor,for patients with advanced,refractory squamous non-small-cell lung cancer(CheckMate 063):a phase 2,single-arm trial[J].Lancet Oncol,2015,16(3):257-265.

[18] Wang J,Roy B.Single-cell RNA-seq reveals lincRNA expression differences in Hela-S3 cells[J].Biotechnol Letters,2017,39(3)：359-366.

[19] 朱彩華,曹新廣,曹 巍,等.BCYRN1 表達上調與食管鱗癌患者預后差相關[J].醫藥論壇雜志,2016，37(2):4-8.

[20] Hu T,Lu YR.BCYRN1,a c-MYC-activated long non-coding RNA,regulates cell metastasis of non-small-cell lung cancer[J].Cancer cell international,2015,15(1):36.

[21] Qiu T,Zhou L,Wang T,etal.miR-503 regulates the resistance of non-small cell lung cancer cells to cisplatin by targeting Bcl-2[J].Int J Mol Med,2013,32(3):593-598.

[22] Li L,Sarver AL,Khatri R,etal.Sequential expression of miR-182 and miR-503 cooperatively targets FBXW7,contributing to the malignant transformation of colon adenoma to adenocarcinoma[J].J Pathol,2014,234(4):488-501.

[23] Xu YJ,Du Y,Fan Y.Long noncoding RNAs in lung cancer:what we know in 2015[J].Clin Translational Oncol,2016,18(7):660-665.

[24] Zhang XY,Ma LJ,Guo YL,etal.Effect of BCYRN1 on proliferation and migration of airway smooth muscle cells in rat model of asthma[J].Zhonghua Yi Xue Za Zhi,2016,96(46):3751-3756.

[25] Zhang XY,Zhang LX,Tian CJ,etal.LncRNAs BCYRN1 promoted the proliferation and migration of rat airway smooth muscle cells in asthma via upregulating the expression of transient receptor potential 1[J].Am J Translational Res,2016,8(8):3409.

[26] Biswas AK,Kang M,Kim DC,etal.Inferring disease associations of the long non-coding RNAs through non-negative matrix factorization[J].Network Modeling Analysis in Health Informatics and Bioinformatics,2015,4(1):9.

[27] Yu L,Liang H,Lu Z,etal.Membrane receptor-dependent Notch1/Hes1 activation by melatonin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury:in vivo and in vitro studies[J].J Pineal Res,2015,59(4):420-433.

[收稿2017-05-25 修回2017-06-29]

(編輯 張曉舟)

EffectsofBCYRN1onmiR-503onmigrationandinvasionoflungcancerbyNotch1pathway

ZHANGJing-Jing，ZHANGYi，JIYing-Hua，ZHANGMin，LIWei-Wei，YANGQing-Hui，WANGJin，YUHai-Chuan，LUPing，WANGXiang-Peng.
CollaborativeInnovationCenterofHenanProvince，InstituteofMedicalLaboratoryScienceandMolecularDiognosticsandMedicalLaboratoryTechnology，Xinxiang453003，China

Objective:To investigate the mechanism of BCYRN1 regulating miR-503 through Notch1 signaling pathway in the migration and invasion of lung cancer.MethodsThe expression of BCYRN1 and miR-503 in different lung cancer cell lines were detected by qPCR.Immunofluorescence and qPCR were used to detect the transfection efficiency of lentivirus BCYRN1 + siRNA transfected lung cancer cells.Double luciferase reporter gene was used to detect the interaction between BCYRN1 and miR-503.Transwell invasion test and scratch test were used to detect the invasion and migration of lung cancer cells after silencing BCYRN1.Western blot was used to detect the expression of Notch1 signaling pathway silence BCYRN1.The effect of silencing BCYRN1 on lung cancer cells in nude mice was measured by subcutaneous tumor formation in nude mice.ResultsThe expression level of BCYRN1 was the highest in lung cancer cell H1299,and the expression level of miR-503 was relatively high.Immunofluorescence and mRNA levels demonstrated that BCYRN1 + siRNA lentivirus could be effectively transfected into H1299 cells;BCYRN19 binds specifically to the 3′-UTR of miR-503;silencing BCYRN1 could inhibit the invasion and migration of lung cancer H1299 cells;the expression of Notch1 pathway protein was down-regulated after silencing BCYRN1.Compared with NC group,tumor volume and weight of BCYRN1-siRNA group were significantly decreased.ConclusionBCYRN1 can target the regulation of miR-503 through Notch1 signaling pathway in the invasion and migration of lung cancer H1299 cells.

BCYRN1;Lung cancer;miR-503;Transwell

①本文為國家自然科學基金(No.31301135)、河南省自然科學基金(No.162300410211)和河南省科技攻關計劃項目(No.201203068)。

②河南省新鄉醫學院第一附屬醫院腫瘤科，衛輝 453100。

R734.2

A

1000-484X(2017)10-1453-06

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.003

張婧婧(1982年-)，女，碩士，實驗師，主要從事分子免疫學方面研究。

及指導教師：王向鵬(1985年-)，男，副教授，主要從事長鏈非編碼RNA在腫瘤發生發展中的機制研究，E-mail：15225991758@163.com。