MIC基因多態性與解脲脲原體感染的易感關聯性研究

李 瑜 陳 恩 陳純靜 曾凡勝 周 琳 曾 威

(益陽醫學高等專科學校，益陽 413000)

MIC基因多態性與解脲脲原體感染的易感關聯性研究

李 瑜 陳 恩①陳純靜②曾凡勝 周 琳 曾 威③

(益陽醫學高等專科學校，益陽 413000)

目的研究MIC等位基因多態性與解脲脲原體感染易感性之間的關聯性。方法采用PCR-SSP和PCR-SBT方法對樣本MIC等位基因的多態性進行檢測。結果解脲脲原體患者中檢出12種MICA、5種MICA-STR和14種MICB等位基因；和對照組相比較，解脲脲原體患者組中MICA* 010和MICB*009N等位基因分布頻率更高(MICA* 010:OR=3.85，95%CI：2.12-6.99，Pc<0.05;MICB*009N:OR=3.22，95%CI：1.33-7.80，Pc<0.05)，MICA-A5.1和MICB*00502等位基因分布頻率更低(MICA-A5.1：OR=0.61，95%CI：0.40-0.94，Pc<0.05；MICB*00502：OR=0.58，95%CI：0.40-0.83，Pc<0.05)，差異均具有統計學意義；基因型方面，MICA*010/010、MICA*01201/01201純合子分布頻率更高(MICA*010/010：OR=14.84，95%CI：1.90-115.9，Pc<0.05；MICA*01201/01201：OR=10.83，95%CI：1.35-86.79，Pc<0.05)，差異均具有統計學意義；解脲脲原體患者中MICB*00502/00502純合子分布頻率較高，但差異不具有統計學意義(Pc>0.05)。結論MIC等位基因多態性與解脲脲原體的易感性間存在關聯性。

MIC 基因；基因多態性；解脲脲原體

解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum，UU)亦稱溶脲脲原體，是常見的性傳播性疾病病原體，雖然解脲脲原體感染的常規應對方案為抗生素治療，但由于感染后癥狀不明顯，易被忽視而延誤診治，常導致持續感染；持續感染時可導致組織進行性破壞和形成組織瘢痕，引起嚴重的并發癥和后遺癥，如男性的附睪炎、尿道炎、女性的子宮內膜炎、盆腔炎、異位妊娠、輸卵管性不孕等多種疾病[1,2]。

MIC是主要組織相容性復合體 Ⅰ 類相關基因(Major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene，MIC)，MIC基因家族又稱PERB11，毗鄰HLA-B基因，屬非經典的MHC Ⅰ 類基因家族，1994年由美國西雅圖大學研究中心Spies教授領導的研究隊伍報道[3]。MIC基因位于人類第6號染色體短臂，具有廣泛的多態性[4]。MIC基因家族包括MICA、MICB、MICC、MICD、MICE、MICF和MICG 7個基因，其中只有MICA、MICB是有功能的基因，具有編碼、轉錄、表達蛋白的功能，MICA/MICB編碼產物與HLA Ⅰ類分子極其相似，包括信號肽、胞外α1、α2和α3結構，跨膜區和胞漿尾巴，但不與β2球蛋白結合。MICA/MICB是NK細胞表面NKG2D分子的配體，MICA/MICB與NK細胞表面NKG2D分子結合后，可以通過調節NK細胞功能來發揮重要的作用。

研究表明，MIC基因的多態性與多種疾病易感性相關，但暫無與中國南方人群解脲脲原體患者易感性相關的報道[5-7]。因此本研究以南方漢族解脲脲原體人群為研究對象，以健康人群作為正常對照，對MIC基因多態性及解脲脲原體易感性之間的關聯性進行研究。

1 材料與方法

1.1研究對象 122名解脲脲原體患者來自于湖南省益陽市中心醫院2012年10月至2016年2月的就診患者，且根據病史及相關檢測，排除有其他病原體感染的患者。患者平均年齡34.5歲(23～61歲)，其中女性81例(66%)，男性41例(34%)。137 例健康人群作為對照，年齡33.0歲(18～65歲)，其中女性95例(69%)，男性42例(31%)。研究對象相互間無親緣關系，均知情同意，并符合倫理委員會的相關要求。

1.2方法

1.2.1外周血基因組DNA 的提取 收集新鮮的EDTA抗凝靜脈血2 ml，采用WHO推薦的標準鹽析法提取gDNA[8]，測定波長260 nm和280 nm 的OD 值，A260 /A280值在1.6～1.8范圍內為宜。

1.2.2MIC基因分型方法 采用PCR-SSP(PCR sequence-specific primers)[9,10]與PCR-SBT(PCR sequence-based typing)[11,12]兩種不同的方法對樣本進行MIC基因分型。大部分樣本采用PCR-SSP方法進行分型，考慮到部分罕見MIC等位基因型別無法用PCR-SSP方法分析，采用PCR-SBT方法分析。PCR-SBT方法參照文獻[13,14]，采用Chromas Lite 2.01 軟件對測序結果進行分析，掃描MIC多態位點，進行人工判讀并與MIC序列數據庫中的標準序列進行比對，獲得相應的MIC等位基因型別。

1.3統計學分析 MIC等位基因頻率、MIC基因型頻率、Hardy-Weinberg equilibrium(HWE)采用SHESIS軟件進行計算獲得。關聯性分析采用Logistic回歸進行統計分析，顯著性檢驗采用Fisher精確概率檢驗進行，對P值采用Bonferroni校正后得到的Pc值在5%水平上進行檢驗。

2 結果

2.1Hardy-Weinberg 平衡吻合度檢驗 所選擇的健康對照經Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗分析表明，各等位基因的分布理論頻率與觀察頻率之間無顯著性差異，表明本實驗所選樣本是符合Hardy-Weinberg 平衡的隨機婚配群體。

2.2MICA 等位基因多態性與解脲脲原體相關性分析 解脲脲原體患者中共檢出12 種MICA 等位基因，其中MICA*019、MICA*010、MICA*00201是患者組中分布頻率最高的3種等位基因，分別占20.1%、19.3%、19.3% 。和對照組相比較，解脲脲原體患者組中MICA* 010等位基因分布頻率顯著偏高(20.1% vs 5.8%)，MICA*010等位基因可能對解脲脲原體易感(OR=3.85，95%CI：2.12-6.99，Pc<0.05)，見表1。

2.3MICA-STR基因多態性與解脲脲原體關聯性分析 解脲脲原體患者中共檢出 5種MICA-STR等位基因，其中MICA-A5在解脲脲原體患者組中分布頻率最高，占39.3%。與對照組比較，解脲脲原體患者組中MICA-A5.1等位基因分布則顯著降低(16.8% vs 24.8%，OR=0.61，95%CI：0.40-0.94，Pc<0.05)，可能對解脲脲原體感染不易感，見表2。

2.4MICA 基因型與解脲脲原體相關性分析 和對照組基因型比較，解脲脲原體患者組MICA*010/010、MICA*01201/01201純合子分布頻率顯著增高(MICA*010/010：9.8% vs 0.7%；MICA*01201/01201：7.4% vs 0.7%)； MICA*010/010、MICA*01201/01201純合子可能對解脲脲原體易感(MICA*010/010：OR=14.84，95%CI：1.90-115.9，Pc<0.05；MICA*01201/01201：OR=10.83，95%CI：1.35-86.79，Pc<0.05)，見表3。

2.5MICB 等位基因多態性與解脲脲原體相關性分析 解脲脲原體患者中共檢出14 種MICB 等位基因，其中MICB*00502、MICA*002是患者組中分布頻率最高的2種等位基因，分別占29.5%、18.4%。和對照組相比較，解脲脲原體患者組中MICB*00502等位基因分布頻率顯著偏低(29.5% vs 42.0%)，可能對解脲脲原體不易感(OR=0.58，95%CI：0.40-0.83，Pc<0.05)，而MICB* 009N等位基因分布頻率顯著偏高(7.8% vs 2.6%)，可能對解脲脲原體易感(OR=3.22，95%CI：1.33-7.80，Pc<0.05)，見表4。

2.6MICB 基因型與解脲脲原體相關性分析 解脲脲原體患者中MICB*00502/00502純合子分布頻率較高，與對照組相比較，MICB基因型與解脲脲原體易感性之間不存在相關性，見表5。

表1 MICA等位基因頻率在解脲脲原體患者與對照人群中的比較

Note：1)P<0.05.

表2 MICA-STR等位基因頻率在解脲脲原體感染患者與對照人群中的比較

Note：1)P<0.05.

表3 MICA基因型頻率在解脲脲原體感染患者與對照人群中的比較

Note：1)P<0.05.

表4 MICB等位基因頻率在解脲脲原體感染患者與對照人群中的比較

Note：1)P<0.05.

表5 MICB基因型頻率在解脲脲原體感染患者與對照人群中的比較

3 討論

解脲脲原體是常見的性傳播性疾病病原體，因感染后癥狀不明顯，易被忽視而延誤診治，導致組織進行性破壞和形成組織瘢痕，引起嚴重的并發癥和后遺癥，如輸卵管性不孕等多種疾病。現代醫學認為，疾病的易感與遺傳多態性有關。我們課題組前期研究發現，MICA-A5.1和MICA*008等位基因與沙眼衣原體易感性呈負相關，帶有該等位基因的個體不易被沙眼衣原體所感染；何麗等[15]研究發現，中國北方漢族人群HLA-A基因多態性與SARS-Cov易感性相關；Zhao等[16]近來研究表明，功能性的MICA-129基因多態性與潰瘍性結腸炎的發病呈正相關。Gissel等[17]發現MICA*008型別為登革熱發病的易感基因，這些研究結果提示MICA/MICB在多種疾病感染與轉歸的過程中發揮了重要的作用，但解脲脲原體感染與MICA/MICB遺傳多態性之間的關系還未見報道。

我們采用PCR-SSP及PCR-SBT方法檢測了解脲脲原體感染患者組和對照組中MIC等位基因分布的頻率，首次報道了MIC等位基因在中國南方人群中解脲脲原體感染患者中的分布。解脲脲原體感染患者組中共檢出12種MICA 等位基因和14種MICB等位基因；和正常對照組相比較，MICA*010和MICB* 009N等位基因在解脲脲原體感染組分布頻率較高，可能是解脲脲原體易感等位基因(OR均大于1，且Pc<0.05)。解脲脲原體患者組中MICB*00502等位基因分布頻率顯著偏低，可能對解脲脲原體不易感(OR=0.58，Pc<0.05)。對基因型比較發現，解脲脲原體患者組MICA*010/010、MICA*01201/01201純合子分布頻率顯著增高，可能對解脲脲原體易感(OR均大于1，且Pc<0.05)。這些研究結果表明MIC等位基因多態性與解脲脲原體的易感性間存在關聯性，推測可能的致病機制是由于某些型別的MIC基因編碼的蛋白質分子與NK細胞、CD8+T細胞上的NKG2D受體親和力低，導致這些免疫細胞不能有效活化，對感染的病原體不能有效清除所致。

在本研究中，解脲脲原體感染患者組中MICA-A5.1等位基因分布則顯著降低，可能對解脲脲原體感染不易感(OR=0.61,Pc<0.05)。MICA-A5.1是在其跨膜區第5個GCT重復順序上再額外插入一個G堿基，形成GGCT序列，導致該基因發生了移碼突變，在TM區提早出現了終止密碼子，經轉錄翻譯時，蛋白質翻譯提前結束從而缺少了胞漿區，形成了短尾的蛋白分子[18,19]；部分型別的MICA-A5.1在氨基酸129位置編碼纈氨酸(V)，能降低MICA蛋白與NKG2D受體的結合力，其原因在于129位置的M能夠與G136、A139、M140等氨基酸殘基之間形成疏水鍵，而129位置的纈氨酸則會破壞這一結構，從而使得螺旋部位的構象發生變化，最后導致對MICA與NKG2D的結合力產生影響[20]，降低了MICA蛋白與NKG2D的結合能力，導致活化的NK細胞數量偏少，于是NK細胞分泌的抵抗解脲脲原體感染的細胞因子降低，從而引起解脲脲原體的持續感染。

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[收稿2017-03-22 修回2017-05-25]

(編輯 倪 鵬)

StudyonassociationbetweenMICgenepolymorphismandureaplasmaurealyt-icuminfection

LIYu，CHENEn,CHENChun-Jing，ZENGFan-Sheng，ZHOULin，ZENGWei.
YiyangMedicalCollege,Yiyang413000,China

Objective:To investigate the association between MIC allele polymorphism and susceptibility to Ureaplasma urealyticum infection.MethodsPCR-SSP and PCR-SBT were used to analyze the gene polymorphism of every one.ResultsTwelve allele genes of MICA and five MICA-STR and fourteen MICB were found in the participants，the frequency of MICA*010 and MICB*009N were higher in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA* 010:OR=3.85,95%CI:2.12-6.99,Pc<0.05;MICB*009N:OR=3.22,95%CI:1.33-7.80,Pc<0.05);the frequencies of MICA-A5.1 and MICB*00502 were lower in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA-A5.1:OR=0.61,95%CI:0.40-0.94,Pc<0.05;MICB*00502:OR=0.58,95%CI:0.40-0.83,Pc<0.05),the differences were statistically significant;MICA*010/010,MICA*01201/01201 homozygote were higher in ureaplasma urealyticum infection patients than in healthy controls(MICA*010/010:OR=14.84,95%CI:1.90-115.9,Pc<0.05:MICA*01201/01201:OR=10.83,95%CI:1.35-86.79,Pc<0.05)，the differences were statistically significant.The distribution frequency of MICB*00502/00502 in patients with ureaplasma urealyticum was higher,but the difference was not statistically significant(Pc>0.05).ConclusionMIC allele gene polymorphism may be associated with ureaplasma urealyticum infection.

MIC alleles;Gene polymorphism;Ureaplasma urealyticum

①南華大學附屬第一醫院，衡陽 421001。

②長沙醫學院，長沙 410219。

③益陽市中心醫院，益陽 413000。

R392

A

1000-484X(2017)10-1478-05

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.008

李 瑜(1984年-)，女，碩士，講師，主要從事遺傳免疫學方面研究，E-mail:120819273@qq.com。