大黃蒙醫酒燜炮制機理及有效性研究

蘇布達，阿 潤，那生桑

（內蒙古醫科大學蒙醫藥研究院，內蒙古 呼和浩特 010110）

大黃蒙醫酒燜炮制機理及有效性研究

蘇布達，阿 潤，那生桑

（內蒙古醫科大學蒙醫藥研究院，內蒙古 呼和浩特 010110）

目的探討蒙醫酒燜炮制大黃的原理，優化酒燜炮制工藝，并對其安全、有效性進行初步評價。方法采用高效液相色譜（HPLC）法分析大黃與酒燜大黃中總蒽醌與游離蒽醌的含量變化；對大黃酒燜炮制，以藥材與酒的比例、燜潤時間和加熱時間為3個因素，每個因素選3個水平作正交試驗，優選最佳工藝條件；通過酒燜大黃對小鼠瀉下作用和急毒性試驗初步評價大黃炮制飲片的安全、有效性。結果酒燜大黃結合型蒽醌的含量明顯低于生大黃，瀉下作用明顯緩和，酒燜大黃組始排黑便時間長于生大黃組和模型組，排便次數少于這兩組，酒燜大黃組稀便級和稀便率明顯下降；急毒試驗最大耐受量遠超過臨床劑量（0．06 g／kg）的100倍，無小鼠死亡及中毒現象，解剖觀察試驗鼠主要臟器無特殊改變；正交試驗結果顯示以大黃與酒質量體積比1∶7．5（kg／L）、燜潤1 h、加熱燜制4 h為效果最佳。結論大黃經蒙醫理論的合理炮制，可明顯緩和其下瀉強度，消除疼痛等不良反應，降低毒性，從而增加大黃療效，擴大用藥范圍。

蒙藥；大黃；酒燜大黃；炮制工藝；藥理；毒理

大黃為蓼科植物掌葉大黃 Rheum palmatum L．、唐古特大黃 Rheum tanguticum Maxim．ex Balf．或藥用大黃 Rheum officinale Baill．的干燥根及根莖[1]。蒙藥大黃味苦、酸，性涼，具稀、輕、動、糙諸效，有泄瀉、清熱、解毒、收斂瘡瘍、消食等功效[2－3]。現代藥理學研究表明，大黃中的活性成分具有瀉下、抗炎、抗菌、抗病毒、降壓調脂、抗腫瘤等作用[4]。大黃含有游離型和結合型蒽醌類衍生物、蒽酮類、二苯乙烯類、苯丁酮類鞣質類、多糖類等成分。蒽醌類是大黃中研究最多的活性成分，分為游離型與結合型，其中游離型有大黃酸、大黃素、土大黃素、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、異大黃素、大黃酚、蟲漆酸D等，結合型有大黃素甲醚葡萄糖苷、蘆薈大黃素葡萄糖苷、大黃素葡萄糖苷和大黃酚葡萄糖苷，以及番瀉苷 A，B，C，D，E，F 等[5]。結合型蒽醌以番瀉苷為主，是致瀉的主要活性成分。蒙醫善用大黃，根據需要行特殊炮制，以降低瀉下駿烈性。大黃炮制方法有酒燜法[6]、炒法。蒙醫酒燜炮制大黃的方法有別于中醫酒炙法和酒燉法[7]，炮制目的是緩和其瀉下作用，避免導瀉中所致疼痛。本研究中探討了蒙醫酒燜炮制大黃的機理，旨在優化其炮制工藝。現報道如下。

1 儀器、試藥與動物

1．1 儀器

SCL－10AVP型液相色譜儀（日本島津公司）；JA503型電子天平，AB135－S型電子分析天平，均為德國產；HH－S8型恒溫水浴鍋（北京格外永興儀器有限公司）；SKG－02500型烘干箱（廣西恒豐醫療器械有限公司）；KQ－250DE型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；HX－100型高速粉碎機（浙江永康儀器有限公司）；電子萬用爐（天津市中環實驗電爐有限公司）。

1．2 試藥

大黃藥材、大黃粉及其水煎液：大黃購自內蒙古天康蒙中醫藥有限責任公司，經內蒙古食品藥品檢驗所主任藥師康雙龍鑒定為蓼科植物藥用大黃 Rheum officinale Baill．的干燥根莖。先除去雜質，洗凈，潤透，切8～12 mm厚片，晾干；臨用時粉碎，過4號篩，為大黃粉；取大黃粉25 g加 10倍量水浸0．5 h，煮沸 20 min，離心，取上清液，殘渣再加5倍水，同法煎煮，取上清液，合并，加熱濃縮成500 g／L質量濃度的水煎液，為大黃水煎液。

酒燜大黃粉及其水煎液：取酒燜大黃片（本實驗室自行炮制品[8]），同上法粉碎，為酒燜大黃粉；同上法水煎制備，為酒燜大黃水煎液。

番瀉葉：購自呼和浩特藥材公司，批號為6928798310962。試驗臨時取番瀉葉粉加水配制成8%濃度的混懸液，備用[9]。

對照品：蘆薈大黃素(批號為110795－201007)，大黃酸(批號為 110757－200206)，大黃素(批號為110756－200110)，大黃酚(批號為 110796－201017)，大黃素甲醚(批號為110758－201013)，均由中國食品藥品檢定研究院提供。

其他：印度墨汁購自呼和浩特藥材公司；水為超純水，甲醇為色譜純，三氯甲烷、無水乙醇、乙醚等為分析純，均為市售正品。白酒（草原白酒 60°，批號為6920685030083，內蒙古太仆寺旗草原釀酒有限責任公司)。

1．3 動物

昆明種小鼠，體質量（20 ±2）g，雌雄兼有，6 周齡，動物合格證編號為內實動管質＜98＞8號，潔凈度為國家二級，SPF級環境飼養、試驗，由內蒙古大學試驗動物研究中心提供，實驗結束后將存活小鼠在乙醚麻醉下，斷頭處死，冷凍處理，送醫學廢料處理廠處置。

2 方法與結果

2．1 總蒽醌含量測定[10]

2．1．1 色譜條件

色譜柱：Nuclesil ODS 柱(250 cm ×4 mm，5 μm)；流動相：含 0．1%高氯酸的 80% 甲醇溶液；流速：0．5 mL ／min；檢測波長：254 nm。

2．1．2 溶液制備

對照品溶液：取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚各2 mg，精密稱定，分別置25 mL棕色容量瓶中，各加入甲醇5 mL，使溶解，加甲醇定容，得標準貯備液。分別依次吸取標準貯備液 0．1，1．0，1．0，0．5，0．5 mL，置 5 mL 棕色容量瓶中，加甲醇定容，混勻，作為混合對照品溶液。

供試品溶液：取大黃粉和酒燜大黃粉0．1 g，精密稱定，置50 mL磨口具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，室溫浸15 h，經干燥濾紙濾過，棄初濾液，取續濾液備用。精密吸取上述續濾液5 mL，置20 mL具塞試管中，水浴上蒸干甲醇，加水2 mL，振搖使殘渣溶解，置冰浴中放冷后精密加入乙醚10 mL及鹽酸0．2 mL，立即密塞并劇烈振搖3 min，分層，精密量取乙醚液5 mL，置具塞試管中，在氣流下揮盡乙醚，加入甲醇2 mL使殘渣溶解，用濾膜濾過，得供試品溶液Ⅰ（游離蒽醌）。精密吸取上述續濾液2．5 mL，置20 mL具塞試管，水浴，蒸干甲醇，加水 2 mL、鹽酸 0．2 mL，置沸水浴中水解30 min，移出，冰浴，放冷，精密加入乙醚10 mL，按上述方法“立即密塞并劇烈振搖3 min”起操作，得供試品溶液Ⅱ（總蒽醌苷元）。

2．1．3 線性關系考察

按擬訂色譜條件，取混合對照品溶液 2，4，6，8，10 μL 進樣，以進樣量(X，μL)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程。見表1。

2．1．4 樣品含量測定

在擬訂色譜條件下，分別進樣供試品溶液Ⅰ和供試品溶液Ⅱ各4 μL，按標準曲線方程計算各樣品中總蒽醌與游離蒽醌的含量。結合型蒽醌總量＝總蒽醌量－游離型蒽醌總量。結果見表2和圖1。可見，大黃炮制前后結合型蒽醌的含量由0．384%降為0．056%，炮制后結合型蒽醌的含量顯著降低；游離型蒽醌的含量從0．608%增加至0．716% 。說明炮制可促進蒽醌的轉化，而總蒽醌的含量從0．992%降為0．772%。

2．2 大黃酒燜炮制工藝優化

蒙醫對大黃藥材的炮制有諸多方法，但利用緩和瀉下功能時常采用酒燜法。本研究中選擇酒燜法，以游離大黃素含量（同2．1項下方法測定，以大黃素為對照品）為評價指標，以大黃與酒質量體積比(因素A)、燜潤時間(因素B)和加熱燜制時間(因素C)為3個因素，每個因素選3個水平，選用 L9(34)正交表，完成正交試驗[11]。結果見表3至表5。可見，影響因素次序為B＞C＞A，最佳工藝條件為 B1C3A2，即大黃與酒之比為 1 ∶7．5（kg ／L），燜潤1 h，加熱燜制4 h為最佳工藝。其中燜潤時間和加熱時間對大黃素含量有顯著性影響（P＜0．05），而大黃

與酒的比例無顯著性影響（P＞0．05）。

表1 對照品溶液線性關系考察結果(n＝5)

表2 大黃與酒燜大黃的蒽醌含量測定結果

圖1 含量測定高效液相色譜圖

表3 炮制工藝優化因素水平表

表4 炮制工藝優化 L9(34)正交試驗方案及結果

表5 大黃素含量方差分析結果

2．3 藥理學試驗[9]

2．3．1 急性毒性試驗[12]

因受試藥容量限制未測出半數致死量(LD50)，僅測了最大給藥量。取昆明系小鼠40只，雌雄各半，隨機分為兩組，每組20只。禁食12 h后給藥組以1．2 g／mL質量濃度的酒燜大黃煎劑每20 g體質量0．8 mL，每24 h灌胃2次；對照組灌胃等量水。給藥當天，與給藥組相比，對照組小鼠活動減少、排便偏多，多呈稀便，其余未見顯著異常；給藥1～3 d小鼠體質量兩組間無差異（P＞0．05），第4～8日給藥組小鼠體質量增長遲于對照組（P ＜0．05），第 8日后差異消失（P ＞0．05）。試驗過程中無小鼠死亡，解剖觀察試驗小鼠主要臟器無異常改變。24 h內給予小鼠酒燜大黃煎劑2次，總量達96 g／kg，已超過蒙醫臨床常用劑量（0．06 g／kg）的 100 倍以上，說明酒燜大黃的毒性非常小。

2．3．2 瀉下藥效試驗

取小鼠60只（無自然腹瀉者），雌雄各半，隨即分成4組，分別為空白組（10%墨汁蒸餾水）、模型組（含10%墨汁番瀉葉粉混懸液）、大黃組（含10%墨汁大黃水煎液）、酒燜大黃組（含10%墨汁酒燜大黃水煎液），禁食12 h后，灌胃給藥，當即將小鼠單個置鋪有濾紙的鐘罩內，觀察排便情況，記錄始排黑便時間、稀便級和稀便率等持續6 h。結果見表6。可見，酒燜大黃的瀉下作用明顯緩和，始見黑便時間酒燜大黃組＞生大黃組＞模型組；酒燜大黃組排便次數最少，有顯著差異（P＜0．01），其稀便級及稀便率明顯下降，除生大黃組外，其他組小鼠均未出現腹痛反應。說明炮制后改變了生大黃較強的瀉下作用，消除了不良反應。

表6 酒燜大黃對小鼠瀉下作用的影響

3 討論

大黃為蒙醫常用藥材，用于“希日”熱、便秘、食積不消、瘡瘍癤腫[6]。蒙藥阿木日－6散中大黃為君藥，主治腹脹便秘、消化性潰瘍、腸梗阻、月經不調等[13]。而在治療不需導瀉性的疾病時常采用炮制，改變其功能及功效趨勢。大黃有效成分中起到瀉下作用的主要是結合型蒽醌，其作用部位主要在大腸，作用機制為刺激大腸黏膜及腸壁肌層的神經叢，顯著促進橫結腸和降結腸蠕動而致瀉[14]。游離型蒽醌在提取過程中損失率高達64%，口服后上消化道吸收較完全，所以無瀉下作用[15]。

本試驗提示，經酒燜炮制使較多量的結合型蒽醌轉化為游離型蒽醌（自 0．384%減至0．056%），游離型蒽醌反之增加（由0．608%增加至0．716%），保證了蒽醌總量損失甚少。藥效試驗顯示，瀉下作用明顯緩和（P＜0．01）；始排黑便時間，酒燜大黃組長于模型組和生大黃組；排便次數亦少，酒燜大黃組稀便級和稀便率明顯下降。毒理試驗結果表明，酒燜大黃毒性很小，從而有效性發揮顯著，避免了疼痛等不良反應，證明了蒙醫炮制的有效性和科學性。本試驗中只對藥用大黃進行了系列研究，而對掌葉大黃和唐古特大黃的炮制，還尚未做相關性研究，應當對不同大黃品種炮制前后的藥效變化及相互差異作比較，還需在今后的研究中加以補充，探索藥物內在化學成分在炮制過程中的變化規律。

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Processing Mechanism and Effectiveness of Rheum Palmatum with Wine－Steaming According to Mongolian Medicine

Subuda,Arun,Nashengsang
(Institute of Mongolian Medicine Research,Inner Mongolia Medical University,Hohhot,Inner Mongolia,China 010110)

Objective To investigate the processing mechanism of Rheum palmatum with wine－steaming according to Mongolian medicine,and to optimize the wine－steaming processing technology and make an initial about safety and efficiency of processed Rheum palmatum．Methods HPLC method was used to analyze the content of total anthraquinone and free anthraquinone in Rheum palmatum and wine－steaming processed Rheum palmatum,the Rheum palmatum was processed by wine－steaming,with the ratio of herbs and wine,stewing time and heating time as 3 factors,each factor was selected at 3 levels for orthogonal test,and the optimum technological conditions were optimized．The safety and efficacy ofRheum palmatum Decoction were evaluated through the laxative effect and acute toxicity test of wine－steaming processed Rheum palmatum on mice．Results The content of anthraquinone of wine－steaming processed Rheum palmatum was significantly lower than the crude one．Meanwhile,the laxative effect was moderate obviously．Initial defecation time of processed group was longer than those of the crude group and model one,grade and rate of loose stools of the processed group was less than the crude group and model group．Maximum tolerance dose was far more than 100 times compared with clinical dose(0．06 g ／kg)in acute toxicity test and no death or poisoning occurred in the mice．Pathological changes were not found in main organs．The best wine－ steaming processing technology was as follows:the ratio of crude Rheum palmatum and wine was 1 ∶7．5(kg／L),the stewing time was 1 h,the stewing and heating time was 4 h．Conclusion Reasonable processing ofRheum palmatum based on Mongolian medicine theory can significantly ease laxative effect,eliminate pain and other adverse reactions,reduce toxicity,thereby increase the curative effect of Rheum palmatum,and expand the scope of medicine．

Mongolian medicine;Rheum palmatum;wine－steaming processed Rheum palmatum;processing technology;pharmacology;toxicology

R283．3；R282．71

A

1006－4931(2017)19－0019－05

10．3969 ／j．issn．1006 － 4931．2017．19．005

內蒙古自治區自然科學基金項目[kj15sf22]。

蘇布達（1995－），女，蒙古族，在讀碩士研究生，研究方向為蒙藥學，（電子信箱）923028362＠qq．com。

那生桑（1956－），男，蒙古族，博士研究生導師，教授，主要研究方向為蒙藥炮制規范化及蒙藥現代化，（電話）0471－6653163（電子信箱）nasang56＠ sina．com。

2017－02－08；

2017－07－06)