食品中阪崎腸桿菌能力驗證結(jié)果分析與探討

周露　馬蓉

摘要：指出了為提升實驗室食品中阪崎腸桿菌檢測能力，增強實驗室競爭能力，實驗參與了食藥總局組織的阪崎腸桿菌檢測能力驗證活動。利用BAX Q7對能力驗證中的10個樣品進行了快速篩查，根據(jù)GB 4789.40-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》，對疑似菌進行了鑒定。結(jié)果顯示：編號CODE 2、CODE 6、CODE 9樣品檢出阪崎腸桿菌，其余7個樣品均未檢出阪崎腸桿菌。實驗室順利完成能力驗證，結(jié)果為滿意。

關(guān)鍵詞：能力驗證；阪崎腸桿菌；自動病源微生物檢測系統(tǒng)

中圖分類號：TS252.7

文獻標識碼：A文章編號：16749944（2017）18022403

1引言

阪崎腸桿菌（又稱阪崎氏腸桿菌）是腸桿菌科的一種。它能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和菌血癥，死亡率高達50% 以上。目前，微生物學家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰兒配方粉是目前發(fā)現(xiàn)的主要感染渠道。所以加強嬰兒配方粉中的阪崎腸桿菌檢驗十分有必要，筆者所在的實驗室參加了中國食藥總局組織的食品安全抽檢監(jiān)測承檢機構(gòu)微生物檢驗盲樣考核。

對于實驗室而言，能力驗證是利用實驗室間比對來判定實驗室能力的活動。中國合格評定國家認可委員會（CNAS）利用能力驗證結(jié)果評價實驗室的技術(shù)能力，作為與現(xiàn)場評審構(gòu)成互為補充的能力評價的重要方式。能力驗證結(jié)果是CNAS判定申請認可和獲準認可實驗室是否維持其技術(shù)能力的重要依據(jù)之一＼[1＼]。

BAX Q7以DNA 為基礎(chǔ)用于病原微生物檢測和食品質(zhì)量控制，使用實時熒光定量PCR 技術(shù)檢測病原微生物，采用杜邦開發(fā)的高特異性引物，目標病原微生物獨特的基因信號可以快速被檢測。

2實驗部分

2.1檢驗依據(jù)

GB 4789.40-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》＼[2＼]和食藥總局能力驗證作業(yè)指導書。

2.2儀器和試劑

儀器：電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；高壓滅菌鍋（日本RAYAMAHI）；電子天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；均質(zhì)器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；超純水機（美國Millipore）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市榮華儀器制造有限公司）；BAX Q7（美國 DUPONT）。

試劑：緩沖蛋白胨水（BPW）、改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素（mLST-Vm）、阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）、生化鑒定試劑盒均購自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司。BAX Q7試劑盒購自DUPONT。

2.3樣品

樣品：阪崎腸桿菌能力驗證樣品共10瓶，瓶號為CODE 1～10。共10袋奶粉樣品，編號為CODE1～10。每個相同編號的阪崎腸桿菌樣品和奶粉樣品作為1件樣品進行檢測。樣品由中國食品藥品檢定研究院提供。

2.4檢測過程

2.4.1前增菌和增菌

根據(jù)組織方作業(yè)指導書要求，樣品前處理按照作業(yè)指導書進行，在生物安全柜內(nèi)將阪崎腸桿菌樣品的西林瓶打開，取900mL滅菌BPW增菌液加入到無菌均質(zhì)袋中，并將西林瓶內(nèi)小球加入到BPW增菌液中，充分溶解。然后再將與西林瓶相同編碼的奶粉樣品加入到上述BPW增菌液中，充分勻質(zhì)混勻。依此方法，分別對10件樣品進行處理。同時按照GB 4789.40-2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗》做陽性對照實驗。上述增菌液36℃培養(yǎng)18 h。用培養(yǎng)過后的增菌液上BAX Q7初篩，系統(tǒng)內(nèi)部質(zhì)控峰會在75～80 ℃之間出現(xiàn)一個峰值證明實驗有效，阪崎腸桿菌則會在85～90 ℃之間出現(xiàn)峰值，峰值越大，說明樣品陽性越強。儀器系統(tǒng)界面顯示CODE 2、CODE 6、CODE 9為陽性，其余樣品為陰性。結(jié)果見圖1～11。從增菌液中移取1 mL轉(zhuǎn)種于10 mL改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬古霉素（mLST-Vm），44 ℃培養(yǎng)24 h。

2.4.2分離

輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養(yǎng)物，各取增菌培養(yǎng)物1環(huán)，分別劃線接種于兩個阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板，36℃培養(yǎng)24 h。結(jié)果見表1。挑取1～5個可疑菌落，劃線接種于TSA平板。25 ℃培養(yǎng)48 h。

2.4.3鑒定

自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進行生化鑒定。結(jié)果見表2。

3結(jié)果

通過以上實驗得到編號CODE 2、CODE 6、CODE 9樣品檢出阪崎腸桿菌，其余7個樣品均未檢出阪崎腸桿菌。

4討論

能力驗證結(jié)果可用于實驗室內(nèi)部質(zhì)量管理、檢測人員的技術(shù)能力考核、建立新的檢測方法、檢測儀器設(shè)備的驗證和核查、有助于提高實驗室技術(shù)能力。同時參加能力驗證也有助于提升客戶對實驗室出具準確可靠的檢測結(jié)果能力的可信程度，利于實驗室提升市場影響力＼[3＼]。該實驗室參加的此次能力驗證結(jié)果為滿意。

目前，國際上對食品安全檢測技術(shù)呈現(xiàn)兩個方向：一是傳統(tǒng)實驗室檢測向著設(shè)備日趨精密、檢測限量逐步降低方向發(fā)展；二是現(xiàn)場檢測技術(shù)向著技術(shù)速測化、裝備便攜化的方向發(fā)展＼[4＼]。對實驗的檢測技術(shù)要求更快、更準確。本次實驗采用了BAX Q7快速篩選和傳統(tǒng)的手工操作兩種方法，檢測結(jié)果一致。但應用BAX Q7時應該注意可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果，因為樣品可能在儲藏、運輸和再加工等環(huán)節(jié)中由于環(huán)節(jié)的變化導致菌體死亡，而菌體的核酸仍存在樣品中，所以人工培育為陰性，而應用BAX Q7檢測時出現(xiàn)陽性結(jié)果＼[5＼]。這時傳統(tǒng)的手工操作也同樣不可或缺。

通過此次能力驗證筆者認為實驗過程中應注意培養(yǎng)基的配置，因為阪崎腸桿菌培養(yǎng)的增菌液需要900 mL，普通的250 mL三角瓶不能適用，而采用了1000 mL的大容量三角瓶，所以要注意培養(yǎng)基配制過程中的滅菌效果。操作過程中由于樣品多，注意避免樣品之間交叉污染，在整個實驗過程中要注意生物安全，防止操作人員被污染，實驗結(jié)束后也應盡快對培養(yǎng)物進行無害化處理，避免污染環(huán)境＼[6＼]。endprint

此次通過兩種方式檢測的比對，BAX Q7操作簡單，所需時間短，在大批量的檢測任務中初篩，結(jié)合傳統(tǒng)手工操作，能夠更快更好地完成檢測任務。

參考文獻：

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唐中奎.論實驗室管理與能力驗證活動＼[J＼].現(xiàn)代測量與實驗室管理，2012，13（6） ：39～41.

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＼[6＼]顏瑛，羅玉彬，王文娟，等.食品能力驗證中沙門氏菌的分離和鑒定＼[J＼]. 食品安全質(zhì)量檢測學報，2015，6（9）：3497～3503.

Proficiency Testing Results and Analysis of Enterobacter sakazakii in food

Zhou Lu， Ma Rong

（Baoying Quality Supervision and Testing Center for Organic Food， Baoying 225800， China）

Abstract： ＼[Objective＼] To strengthen the detection capability of Enterobacter sakazakii in food and improve the competition ability of laboratory，the laboratory participated in proficiency testing on Enterobacter sakazakii detection in food by China food and Drug Administration.＼[Method＼] BAX Q7 was used for 10 samples rapid screening.The isolated suspicious colonies were identified by the method of GB 4789.40-2010 National Food Safety Standard Microbiological Examination： Enterobacter sakazakii. ＼[Result＼] Enterobacter sakazakii was detected in sample CODE 2， CODE 6 and CODE 9 while the remaining 7 samples were not detected Enterobacter sakazakii.＼[Conclusion＼] The proficiency testing was successfully completed with satisfactory results.

Key words： proficiency testing； Enterobacter sakazakii； BAX Q7endprint