青錢柳組織培養技術的研究進展概述

方利娟+黃宇+丁文彬+黃+穎+覃淋琳

摘 要：青錢柳具有極高的藥用價值和保健作用，是國家重點保護的瀕危植物之一。該文從對青錢柳外植體的選擇、處理以及不同階段培養基的選擇等方面對近幾年青錢柳植物的組織培養研究進展進行了概述。

關鍵詞：青錢柳；組織培養；研究進展

中圖分類號 S792 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2017）19-0026-2

Research Advances and Prospects of Tissue Culture Propagation Techniques for Cyclocarya paliurus

Fang Lijuan et al.

（Baise University，Baise 533000，China）

Abstract：Cyclocarya paliurus is a Chinese native plant with very high pharmaceutical value and healthcar function.On the basis of discussing and processing about the explants，culture media proper to the tissue culture of Cyclocarya paliurus in recent years were summarized.

Kay words： Cyclocarya paliurus；Tissue culture；Research progress

青錢柳（Cyclocarya paliurus）又稱為山麻柳、山化樹等，系雙子葉植物綱原始花被亞綱胡桃目胡桃科青錢柳屬植物[1]。果實為堅果，扁球形，中部周圍有革質狀翅如銅錢，所以得名搖錢樹，為我國特有的單種屬珍稀樹種，是國家重點保護的瀕危植物之一，其樹葉、樹皮、樹根均可入藥。

我國從20世紀70年代末開始漸漸地有了對青錢柳的研究，近年來，青錢柳的藥用、觀賞價值被廣泛的研究、開發與利用。但是青錢柳天然資源稀缺，其僅僅分布在華東、華南海拔500～2500m的一些溪谷、森林或保護區內[2]。青錢柳內含有多種對人體有效的物質，若是只從植株提取有效成分，不僅得到的提取物少，不利于植物的生長，甚至會造成物種的滅絕，而細胞培養可以大批量地生產有效的次級代謝產物，供人們利用。另外，因其種皮內有較強的抑制物，種子繁殖下，播種后需要一年或者更長時間才能萌發[3-4]，而組織培養可以保持品種的優良特性、生長快、短期內獲得大量后代，是解決青錢柳供不應求的最佳方法。

1 外植體的選擇季節

吳群英[5]等在春夏秋3個季節的不同時間采集青錢柳的新苗、帶節莖段和嫩葉作為實驗材料，探究了在不同季節采集的外植體產生愈傷組織、出芽和生根特性，結果發現：春季取的外植體更容易誘導出愈傷組織和新芽，出芽率和形成愈傷組織能力分別達到29.17%、20.83%。王紀[6]等從春夏秋冬4個季節中采取青錢柳的莖段，經過相同的消毒滅菌處理后發現，4月份的尖端誘導率高達31.82%，污染率最低為11.36%。因此，青錢柳的組培最適合在春季采摘。

2 外植體的處理方式

2.1 種子 采集的種子風干后，利用物理密度差原理，篩選較為飽滿的種子。首先用70%的乙醇溶液浸泡1min。然后用0.2%的HgCl2浸泡20min，無菌水沖洗5遍。準備接種前，用70%的酒精浸泡1min，0.2%的HgCl2溶液浸泡20min。最后用無菌水沖洗5次。這種處理方法的萌發率在71.1%以上，污染率在1.75%以下[7]。

2.2 嫩葉 用洗潔精溶液浸洗30min，將葉面的灰塵和部分菌體用軟毛刷刷干凈，但是不能破壞嫩葉。再用子自來水連續沖1h，瀝干水后將葉片剪成似1cm×1cm的正方形左右大小，在盡可能無微生物的環境中進行操作。用75%的酒精浸泡2～3s，然后置于0.1%的HgCl2浸泡5min，最后用無菌水洗4次，每次1min左右，倒出水分后將其夾入無菌接種盤中，用手術刀將與液體接觸的邊緣切去小部分。接種后用雙層錫箔紙封口[8]。用以上方法，有30%左右能誘導出愈傷組織，且污染率為零。

2.3 莖段 用洗潔精溶液浸洗30min，將莖段的灰塵和部分菌體用軟毛刷刷干凈，但是不能破壞腋芽。再流水沖洗1h，瀝干水后將葉片剪成1.5～2cm，莖段需含1～2個不定芽，在超凈工作臺上操作。用75%的酒精浸泡2～3s，然后置于0.1%的HgCl2浸泡14min，最后用無菌水沖洗4次每次在1min左右，倒出水分后將其夾入無菌接種盤中，用手術刀將與液體接觸的兩端邊緣切去小部分。誘導率可達83.33%，污染率接近于0[8]。

3 培養基的選擇

用不同量的化學物質配制的培養基對來源不一致的植體有不一樣的效果。來源不一致的外植體在相同的培養基培養中所發生的反應也會不同。所以誘導外植體時要根據我們的目的，來對培養基進行選擇。

3.1 誘導成苗 王紀[6]等以青錢柳浙江、貴州、云南3個種源的離體胚作為外植體，經過消毒處理后，將其置于WPM、MS、DKW這3種基本培養基中進行接種，然后置于特定的環境中培養，實驗后經過數據的記錄與統計發現培養基配方為WPM附加3.0%蔗糖和0.6%瓊脂。更為適合離體胚發育成苗，經過數據的記錄與整理發現成苗的概率有80%。

3.2 誘導成芽 吳群英[4]等以B5為基本培養基，研究不同激素組合對嫩芽、莖段、和嫩葉進行誘導出芽，結果發現只有莖段誘導出芽，最佳組合為B5+3%蔗糖+0.7%瓊脂+0.01mol/L NAA+0.1mol/L IBA誘導率最高為29.17%。胡冬南[9]等以一年生莖段為研究材料，莖段經過處理后，將其分別接種于以MS、1/2MS、改良MS（氯化鈣和硫酸鎂的量為MS的3/4，其余的量與MS培養基一致）、DKW、endprint

1/2DKW、和改良DKW這幾種配方配制成等量的培養基，同時這6種培養基均加了0.5mg/L的反式玉米素和0.1mg/L NAA。經過試驗觀察發現第3種培養基培養的莖段萌芽率最高，且可達90.9%。

3.3 誘導成愈傷組織 王紀[7]等培養了無菌苗后用其莖段、嫩葉作為外植體，經過前處理后將其接種于MS、WPM、和改良的DKW這3種培養基中，置于指定環境總誘導成愈傷組織。對激素6-BA和IBA不同濃度進行研究，研究結果培養基組合MS+5.0mol/L 6-BA+2.0mol/LIBA對莖段的誘導率最高可達100%，誘導出來的愈傷組織量最多而且沒有褐化的現象。吳群英[4]等將嫩芽、莖段、嫩葉經過預處理后接種于以B5為基本培養基的培養基中進行培養，結果發現組合B5+5.0mol/L BA+0.1mol/L NAA+0.1mol/L IBA對嫩葉的誘導率最高，誘導率為93.33%。不同的外植體，應選擇合適的配方進行培養，這樣更容易誘導出愈傷組織。

3.4 增殖培養基 王紀[10]等對青錢柳的莖段、幼嫩的頂芽或側芽進行培養出來的愈傷組織進行增殖處理。將愈傷組織分別接種在MS、WPM和前人改良的DKW為基本培養基中，其中分別加入不同量的6-BA和IBA。經研究發現葉片愈傷組織增殖效果最好的培養基配方為MS+1.0mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA，增長率可達1400%。謝寅峰[11]等對從江蘇鎮江采集的三年生青錢柳嫩葉作為外植體進行誘導愈傷組織，再對愈傷組織進行增殖培養，結果發現組分為：MS+20.0g/L蔗糖+0.2mg/L KT+0.2mg/L

2，4-D最適合葉片愈傷組織的增殖，增長率可達到1024.51%。

參考文獻

[1]胡冬南，蔣艷，吳少福，等.青錢柳組織培養的初步研究[J].江西農業大學學報，2005，27（1）：39-41.

[2]中國科學院中國植物志編寫委員會.中國植物志（21卷）[M].北京：科學出版社，1979.

[3]楊萬霞，方升佐.青錢柳種子綜合處理過程中內源激素的動態變化[J].南京林業大學學報自然科學版，2008，32（5）：85-88.

[4]雷土榮，方水強，鐘建軍，等.青錢柳綜合利用及播種育苗造林技術[J].安徽農學通報（下半月刊），2010（08）：94，150.

[5]吳群英，徐慶，李麗亞，等.青錢柳不同外植體組織培養及褐變防止的研究[J].時珍國醫國藥，2008（08）：1872-1874.

[6]王紀，楊靜，楊萬霞，等.取樣時間和消毒方法對青錢柳莖段腋芽誘導的影響[J].安徽農業科學，2016（34）：154-156.

[7]王紀.青錢柳組織培養及次生代謝物調控的初步研究[D].南京：南京林業大學，2009.

[8]程茂高，喬卿梅，魏志華.青錢柳愈傷組織培養條件研究的優化[J].鄭州牧業工程高等專科學校學報，2009（01）：12-14.

[9]胡冬南，上官新晨，劉亮英，等.青錢柳莖段離體培養研究[J].湖北農業科學，2009，48（6）：1300-1303.

[10]Wang J.A Preliminary Study on Callus Induction and Proliferation of Cylocarya paliurus[J].Journal of Anhui Agricultural Sciences，2012.

[11]謝寅峰，張志敏，張穎穎，等.青錢柳愈傷組織增殖[J].東北林業大學學報，2012，40（6）：16-18.

（責編：張宏民）endprint