乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白表達及其臨床意義

張雪云，王曉武，王豐梅

(青海大學附屬醫院乳腺甲狀腺外科，青海 西寧 810001)

乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白表達及其臨床意義

張雪云，王曉武，王豐梅

(青海大學附屬醫院乳腺甲狀腺外科，青海 西寧 810001)

目的研究乳腺癌組織中果蠅zeste基因增強子同源物2(EZH2)及p53蛋白的表達及臨床意義。方法選擇從2016年1～10月在青海大學附屬醫院診治的乳腺癌患者40例納入本次研究，將40例患者術區所取的乳腺癌組織記為觀察組，另取同期在醫院治療的40例纖維瘤患者的手術切除組織記為對照組，比較乳腺不同組織中EZH2及p53蛋白的表達，分析乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的表達與其病理情況的關系，以及乳腺癌組織中EZH2與p5蛋白表達的相關性。結果乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的陽性率分別為52.50%、47.50%，均明顯高于纖維瘤組織的20.00%和15.00%，差異均有統計學意義(P＜0.05)。乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的陽性表達與有淋巴結轉移及分子亞型為Basal-like型有關，差異均有統計學意義(P＜0.05)；根據Spearman法對相關性分析后發現，乳腺癌組織中EZH2與p5蛋白的陽性表達之間呈正相關(r=0.66，P＜0.05)。結論乳腺癌組織中的EZH2及p53蛋白均存在較強的陽性表達，且兩者之間的表達呈正相關。

乳腺癌組織；EZH2；p53蛋白；表達；作用機制

伴隨醫學科技的迅猛發展，當前臨床對于乳腺癌的診斷及治療均獲得了長足的進步。乳腺癌患者的病情也逐漸傾向于憑借病理組織學和免疫組織化學，以及分子遺傳學等指標的綜合評判以進行診斷[1]。但是，目前，關于腫瘤復發和轉移，以及耐藥等問題依舊是制約著乳腺癌診治的難題，強化對于乳腺癌在分子水平表達方面的研究十分必要。EZH2是調控基因，p53屬于抑癌基因，兩者均為近年來較為突出的基因研究熱點[2]。為更好地掌握乳腺癌組織在蛋白水平的表達情況，并了解疾病的發生和發展機制，從而找到相關指標靶點，本文通過分析EZH2及p53蛋白在乳腺癌組織當中的表達意義和作用機制，旨在為臨床治療提供理論依據，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇從2016年1～10月在青海大學附屬醫院診治的乳腺癌患者40例納入本次研究，均為女性，年齡29～78歲，平均(54.32±2.19)歲。 納入標準：(1)所有患者均符合乳腺癌的診斷標準，并由術后病理學的檢測證實；(2)年齡≥29歲；(3)預計生存時間＞3個月。排除標準：(1)其他類的惡性腫瘤；(2)病歷資料缺失者；(3)無手術指征者。將40例患者術區所取的乳腺癌組織記為觀察組，另取同期在醫院治療的40例纖維瘤患者的手術切除組織記為對照組，兩組患者的基線資料差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表1。本研究經醫院倫理委員會批準。

表1 兩組患者一般資料的比較(例，x±s)

表1 兩組患者一般資料的比較(例，x±s)

組別 例數 年齡(歲) 淋巴結轉移 組織學類型 分子亞型腫瘤分期Ⅰ期HER-2(+)≥60 22 20 40 40觀察組對照組Z/t值P值＜60 18 20腫瘤直徑(cm)≤2 19 22＞2 21 18 2.017 0.109平均年齡53.97±2.18 54.28±2.20 0.633 0.529Ⅱ期11Ⅲ期20無19有ILC 21 21 IDC 19 LuminalA 10 Luminal B 14 Basal-like 13 1.249 0.187 9---------------------------3------

1.2 研究方法 檢測涉及的免疫組化染色方式選擇MaxVision法，其中兔抗人EZH2型多克隆抗體和通用兩步法試劑盒及p53等試劑盒均購于上海勁馬+上海恒遠公司。將兩組組織制成石蠟切片后，給予抗原修復，利用過氧化物酶相關阻斷劑在室溫下孵育約10 min。使一抗在4℃下過夜，將二抗在室溫下孵育約15 min。再用DAB顯色5 min，經蘇木精染色約2 min，全部過程應用磷酸鹽緩沖液(PBS)進行沖洗，以PBS代替一抗用于陰性對照。

1.3 結果評判 EZH2蛋白以顯微鏡下的高倍視野中細胞核呈黃色亦或是棕黃色顆粒記為陽性，對每張切片均觀察5個視野。通過半定量評分法進行統計：(1)未著色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分。(2)對陽性細胞的百分比進行計分，陰性記為0分，陽性細胞的數目＜25%記為1分，25%～50%記為2分，50%～75%記為3分，＞75%記為4分。使(1)和(2)相乘，結果＞3分記為陽性。p53則將細胞核中有棕黃色顆粒記為陽性，取5個高倍視野，其中陽性細胞的比例＜10%記為陰性，≥10%記為陽性。

1.4 觀察指標 比較乳腺不同組織中EZH2及p53蛋白的表達，分析乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的表達與其病理情況的關系，以及乳腺癌組織中EZH2與P5蛋白表達的相關性。

1.5 統計學方法 應用SPSS21.0軟件進行數據分析，計數資料采用χ2檢驗，等級資料的比較選擇秩和檢驗，計算Z值；計量資料以均數±標準差(±s)表示，采用t檢驗，相關性分析使用Spearman法進行評價，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 乳腺不同組織中EZH2及p53蛋白的表達比較 乳腺癌組織中EZH2陽性定位在細胞核，陽性率為52.50%，p53蛋白也定位在細胞核，陽性率為47.50%，均明顯高于纖維瘤組織的20.00%和15.00%，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2、圖1和圖2。

表2 乳腺不同組織中EZH2及p53蛋白的表達比較[例(%)]

圖1 EZH2陽性免疫組化圖（HE染色，×400）

圖2 P53陽性免疫組化圖（HE染色，×400）

2.2 乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的表達與其病理情況的關系 乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的陽性表達與有淋巴結轉移及分子亞型為Basal-like型有關，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

2.3 乳腺癌組織中EZH2與p5蛋白表達的相關性 根據Spearman法對相關性分析后發現，乳腺癌組織中EZH2與p5蛋白的陽性表達之間呈正相關，見表4。

表3 乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的表達與其病理情況的關系（例，±s）

表3 乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的表達與其病理情況的關系（例，±s）

病理情況年齡(歲)＜60≥60腫瘤直徑(cm)≤2＞2腫瘤分期ⅠⅡ期Ⅲ期淋巴結轉移例數EZH2陽性 χ2值p53陽性 χ2值0.123 P值0.7260.082 P值0.775 18 22 10(55.56)11(50.00)9(50.00)10(45.45)0.3820.5360.4220.516 19 21 9(47.37)12(57.14)8(42.11)11(52.38)2.5060.1132.5060.113 9 11 20 6(66.67)7(63.64)8(40.00)6(66.67)6(54.55)7(35.00)19.5580.0006.5130.011無有19 21 3(15.79)18(85.71)5(26.32)14(66.67)組織學類型ILC IDC分子亞型LuminalA型Luminal B型HER-2(+)型Basal-like型0.3820.5360.0000.987 21 19 12(57.14)9(47.37)10(47.62)9(47.37)6.5830.0006.2740.000 10 14 3 13 2(20.00)4(28.57)1(33.33)12(92.31)3(30.00)4(28.57)1(33.33)11(84.62)

表4 乳腺癌組織中EZH2與p53蛋白表達的相關性分析

3 討 論

近年來的統計數據顯示，全球每年因乳腺癌死亡的患者大約為46萬，在所有因惡性腫瘤致死病例中占比約14%，對患者的生命安全造成了極大的威脅[3]。在我國，乳腺癌的發病率長期位居女性惡性腫瘤排行的首位，且有著逐漸上升的相關趨勢。目前臨床上關于引起乳腺癌的主要作用機制仍未明晰，但經基因組學實驗研究結果顯示，諸多原癌基因和抑癌基因，以及與之相關的蛋白質在編碼上也產生了變化[4]。因此，監測上述基因在乳腺癌組織當中的表達，對于輔助臨床診治具有不容忽視的作用。

本研究結果顯示，乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的陽性率均分別著高于纖維瘤組織，這符合Jiang等[5]和程維剛等[6]的報道結果，提示EZH2及p53蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達明顯上升。究其原因，主要是與兩者的表達機制有關。具體而言，EZH2基因是在1996年時由Hobert通過酵母雙雜交手段分析原癌基因——Vav蛋白的產物時首次發現的，其屬于組蛋白發生甲基化時的一種重要工具酶，是PcG基因家族的成員[7]。其主要定位在人染色體7q35中，長度為40 kb，已被認為是候選癌基因。p53基因屬于人類腫瘤當中的一類最易突變的重要抑癌基因，其包括野生型以及突變型等亞型，與乳腺癌的關系比較緊密。簡言之，EZH2可參與針對細胞周期所進行的調控過程中，其陽性表達可使細胞迅速進至S期，致使轉錄機制在一定程度上失調，從而加速細胞增殖，對腫瘤的生長具有一定的促進作用[8-9]。EZH2基因處在pRB-E2F信號通路下游，屬于下游靶基因。通常pRB在去磷酸化之后可同E2F相結合而產生pRB-E2F復合物，從而抑制了基因轉錄。本文EZH2蛋白在乳腺癌組織當中的陽性表達可能是因為pRB-E2F通路的異常而導致的。p53基因在突變之后可能致使p53編碼蛋白具有的正常功能基本喪失，同時也失去了抑制細胞周期的正常運行以及觸發細胞凋亡的作用機制[10-11]。因此，p53蛋白在高表達時往往預示著乳腺癌組織存在較強增殖能力。本文根據Spearman法對相關性分析后發現，乳腺癌組織中EZH2與p53蛋白的陽性表達之間呈正相關，這表明了EZH2與p53蛋白的表達之間存在著協同關聯。分析原因，筆者認為主要是因為野生型的p53在激活之后，能夠通過與EZH2的啟動子相結合，進而抑制EZH2的表達，而當p53基因在突變之后逐漸喪失相關抑制作用，從而使EZH2的表達上升。這也說明了EZH2蛋白在乳腺癌組織當中的表達可能受到p53的調控[12-13]。

此外，本文還發現，乳腺癌組織中EZH2及p53蛋白的陽性表達與有淋巴結轉移及分子亞型為Basal-like型有關，這提示發生淋巴結轉移，以及分子亞型是Basal-like型的患者具有更高的EZH2及p53蛋白的陽性表達率[14-15]。原因可能在與此類患者的病情相對較重或者分子亞型與調控蛋白的關系更為緊密等因素有關，與研究報道結論相符[16-18]。

綜上所述，乳腺癌組織中的EZH2及p53蛋白均存在較強的陽性表達，且兩者之間的表達呈正相關，值得臨床重視。

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Expression and clinical significance of EZH2 and p53 protein in breast cancer.

ZHANG Xue-yun,WANG Xiao-wu,
WANG Feng-mei.Department of Breast and Thyroid Surgery,the Affiliated Hospital of Qinghai University,Xining 810001,Qinghai,CHINA

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of enhancer of zeste homolog 2(EZH2)and p53 protein in breast cancer.MethodsA total of 40 patients with breast cancer,who admitted to Qinghai University Affiliated Hospital from January 2016 to October 2016,were enrolled in this study.The breast cancer tissues collected from 40 patients were selected as the observation group,and another 40 patients with tumor resection in the same period were treated as the control group.EZH2 and p53 protein expression in different tissues of breast were compared,and the relationship between the expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues and the pathological changes,and the relationship between the expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues were analyzed.ResultsThe positive rates of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues were 52.50%and 47.50%,respectively,which were significantly higher than 20.00%and 15.00%in fibroma tissue(all P＜0.05).The positive expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues was correlated with lymph node metastasis and molecular subtypes of Basal-like(all P＜0.05).According to the correlation analysis of Spearman,it was found that there was a positive correlation between the positive expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues(r=0.66,P＜0.05).ConclusionThe expression of EZH2 and p53 protein in breast cancer tissues is positive,and the expression of the two proteins is positively correlated with each other.

Breast cancer;Enhancer of zeste homolog 2(EZH2);p53 protein;Expression;Mechanism

R737.9

A

1003—6350（2017）20—3303—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.012

青海大學附屬醫院中青年科研基金一般項目（編號：ASRF-2015-YB-09）

張雪云。E-mail：406979540@qq.com

2017-02-25)