免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B

劉春森，羅 爽，王彥斐，彭 強(qiáng)，王 雄

免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B

劉春森1，羅 爽2，王彥斐3，彭 強(qiáng)3，*王 雄3

（1.四川省南充市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，四川南充 637000；2.四川省瀘州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，四川，瀘州 646000；3.北京中檢維康生物技術(shù)有限公司，北京 100004）

建立了免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B的分析方法，該方法的檢出限為500 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于10%，回收率為70%～110%，具有簡便快速、靈敏準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可以用于對(duì)辣椒中羅丹明B進(jìn)行快速定量篩查檢測。

快速定量檢測；辣椒；羅丹明B；免疫層析

0 引言

羅丹明B（Rhodamine B） 又稱玫瑰紅B、蕊香紅B、若丹明B或堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，是一種具有鮮桃紅色的人工合成的染料，曾經(jīng)用作食品添加劑，但后來試驗(yàn)證明羅丹明B會(huì)致癌，在合成過程中會(huì)產(chǎn)生有毒的雜質(zhì)，如苯酚、苯胺、醚等，已證明羅丹明B對(duì)動(dòng)物具有致癌性，且可透過人體皮膚，引起頭痛、嘔吐、四肢酸痛等癥狀，現(xiàn)在已不允許用于食品染色[1-2]。羅丹明B是一種堿性工業(yè)染料，因其具有色澤鮮艷、著色穩(wěn)定、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，常被一些不法商家非法用作食品著色劑（以辣椒制品為主），嚴(yán)重危害了消費(fèi)者的健康[3]。因此，建立快速可靠的檢測方法非常重要。

目前，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍采用非極性有機(jī)溶劑的方法將羅丹明B從食品中溶解并萃取出，再將萃取液過中性氧化鋁固相萃取小柱吸，以達(dá)到吸附羅丹明B的效果，但非極性有機(jī)溶劑在洗脫油脂樣品或食品內(nèi)源性干擾物，然后再用極性溶劑將其從固相萃取柱上洗脫并收集，然后用儀器進(jìn)行定性定量檢測。此方法不僅需要精密昂貴的儀器，且操作過程復(fù)雜、時(shí)間較長，無法實(shí)現(xiàn)在小型實(shí)驗(yàn)室及現(xiàn)場檢測。試驗(yàn)建立并驗(yàn)證了免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B的分析方法。

1 試劑儀器與檢測方法

1.1 試劑

iCheck羅丹明B定量快檢卡，研發(fā)組成由包被有膠體金偶聯(lián)的羅丹明B抗體的微孔、噴涂有羅丹明B抗原檢測線和羊抗鼠二抗的質(zhì)控線和稀釋緩沖液組成；乙醇（色譜純），美國JT BEKER公司提供；玻璃纖維濾紙，美國VICAM公司提供；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取0.1 mg固體羅丹明B固體標(biāo)準(zhǔn)品溶液，于10 mL容量瓶中，加入少量色譜級(jí)甲醇溶液后，用甲醇定容至10 mL。除特別注明外，以上試劑均為分析級(jí)試劑，實(shí)驗(yàn)室用水均為純凈水。

辣椒樣品，不同地區(qū)采購的不同種類的辣椒，分別收集四川、湖南、新疆、北京4個(gè)地區(qū)的紅辣椒。

1.2 儀器

iCheckⅢ型食品安全定量快檢儀，北京中檢維康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

1.3 檢測方法

1.3.1 樣品的提取

提取1.0 g粉碎后辣椒樣品于50 mL離心管中，加入10mL提取液乙醇，用多功能旋轉(zhuǎn)混合器提取10 min（或者人工用手劇烈振蕩3 min），用中速定性濾紙過濾，收集濾液即為待檢樣品。

1.3.2 快速定量檢測步驟

吸取120 μL稀釋緩沖液加入金標(biāo)抗體微孔中，再加入30 μL濾液樣品，用移液器吸打5次混勻，取100 μL加入到快檢卡樣品孔中。于37±2℃下溫育反應(yīng)10 min后，立即將快檢卡放入定量快檢儀中讀數(shù)，結(jié)果即為樣品的實(shí)際濃度。該方法的檢出限為 500 μg/kg，檢測范圍為 500～5 000 μg/kg。注意：若讀值為5 000 μg/kg或大于5 000 μg/kg時(shí)，需要將樣品濾液用樣品提取液乙醇進(jìn)行一定比例的稀釋，此結(jié)果需要乘以稀釋因子。

2 結(jié)果與討論

在不同種類的空白樣品中添加羅丹明B的含量為 500，1 000，2 000，5 000 μg/kg質(zhì)量濃度水平，然后按照膠體金法快速定量檢測。

膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的四川辣椒試驗(yàn)結(jié)果見表1，膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的湖南辣椒試驗(yàn)結(jié)果見表2，膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的新疆辣椒試驗(yàn)結(jié)果見表3，膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的北京辣椒試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表1 膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的四川辣椒試驗(yàn)結(jié)果

從表1～表4中回收率和精密度數(shù)據(jù)可以看出，該方法檢測羅丹明B的回收率均在70%～120%，室內(nèi)4水平加標(biāo)和5個(gè)平行性試驗(yàn)變異系數(shù)在20%以內(nèi)。

3 結(jié)論

免疫層析法快速定量檢測辣椒中羅丹明B，檢出限為10 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于10%，回收率為

表2 膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的湖南辣椒試驗(yàn)結(jié)果

表3 膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的新疆辣椒試驗(yàn)結(jié)果

表4 膠體金法快速定量法準(zhǔn)確性和重復(fù)性的北京辣椒試驗(yàn)結(jié)果

70%～110%，變異系數(shù)小于10%，分析一個(gè)樣品的時(shí)間為20 min內(nèi)。該方法具有簡便快速、準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，可以用于對(duì)辣椒中羅丹明B進(jìn)行快速定量篩查檢測。

[1]盧士英，鄒明強(qiáng)．食品中常見的非食用色素的危害與檢測 [J]．中國儀器儀表，2009（8）：45-50.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部．食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單（第一批） [S]．2008：12．

[3]林長虹，胡書玉，黃達(dá)鍇，等．辣椒及其制品中羅丹明B的超高效液相色譜熒光檢測 [J]．廣東化工，2011（4）：140-141.◇

Rapid Detemination of Rhodamine B in Chili by Immunchlomatography

LIU Chunsen1，LUO Shuang2，WANG Yanfei3，PENG Qiang3，*WANG Xiong3
（1.Sichuan Nanchong Quality and Technical Supervision，Nanchong，Sichuan 637000，China；2.Sichuan Luzhou Quality and Technical Supervision，Luzhou，Sichuan 646000，China；3.Beijing Clovertech Co.，Ltd.，Beijing 100004，China）

Rapid determination Rhodamine B in chili by immunochromatography was developed.The limit of determination was 500 μg/kg，the relative standard deviations was below 10%.Recoveries of Rhodamine B spiked to samples were between 70%～110%.This method wassimple and rapid，sensitive and accurate，and reproducible.It could be uced to peper the Rhodamen B for rapid quantitative scueening tests.

Rhodamine B；rapid detemination；chili；immunochlomatography

TS207.3

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.10.045

1671-9646（2017） 10b-0056-02

2017-08-01

劉春森（1982— ），男，大專，助理工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測技術(shù)。

*通訊作者：王 雄（1963— ），男，博士，高級(jí)工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩珯z測與超微量分析化學(xué)。