三七藥材霉變菌的分離培養(yǎng)及鑒定

王炳艷++孫玉琴++楊莉++朱琳++趙愛(ài)++高明海++王朝梁

摘要 為研究三七藥材在貯藏期間的霉變問(wèn)題，對(duì)收集到的12份霉變?nèi)哌M(jìn)行分離、純化、鑒定。結(jié)果表明，從霉變?nèi)呱戏蛛x出14種霉菌種類，其霉菌菌落營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌落生長(zhǎng)速度有差異；通過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定為黃曲霉柱頭變種、肇慶曲霉、多育曲霉、溜曲霉、兩形頭曲霉、毒曲霉、合陽(yáng)曲霉、寄生曲霉、粒落曲霉、聚多曲霉、炭黑曲霉、日本曲霉原變種、米曲霉舒展變種和塔賓曲霉等。

關(guān)鍵詞 三七；霉變菌；分離；鑒定

中圖分類號(hào) S567.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）20-0066-02

Isolation and Identification of Mold in Panax notoginseng

WANG Bing-yan 1 SUN Yu-qin 1 YANG Li 1 ZHU Lin 1 ZHAO Ai 1 GAO Ming-hai 2 WANG Chao-liang 1 *

（1 Sanqi Research Institute，Wenshan University，Wenshan Yunnan 663000； 2 Wenshan Huaxin Sanqi Co.，LTD）

Abstract In order to in study the mildew of Panax notoginseng in the storage stage，12 samples were separated，purified and identified. The results showed that 14 kinds of mold were separated，the optimum temperature for all colonies growth was 25 ℃，there are differences in growth rate among different kinds of colonies. Based on the morphology identification，the species of mold in Panax notoginseng were Aspergillus flavus var. columnaris，A. zhaoqingensis，A. proliferans，A. tamarii，A. janus，A. toxicarius，A. heyangensis，A. parasiticus，A. granulosus，A. sydowii，A. carbonarius，A. japonicas var. japonicas，A. oryzae var. effuses and A. tubingensis.

Key words Panax notoginseng；mold；isolation；identification

三七為五加科人參屬植物，以干燥根及根莖入藥[1]。近年來(lái)，隨著三七產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，其種植面積和產(chǎn)量均占全國(guó)的98%以上，是云南獨(dú)具特色的生物資源[2]。長(zhǎng)期以來(lái)，由于貯藏設(shè)施落后，管理粗放，絕大多數(shù)都分散在民宅貯藏，導(dǎo)致三七藥材在貯藏期間常常遭受多種霉菌的侵害而發(fā)生霉變。

現(xiàn)階段由于三七藥材的貯藏規(guī)模和貯藏?cái)?shù)量越來(lái)越大，為深入探索三七藥材貯藏期引起的霉變和防止霉變措施已成為當(dāng)前亟需解決的課題。目前，國(guó)內(nèi)研究絕大多數(shù)都集中在栽培技術(shù)及初加工等方面，而對(duì)三七藥材貯藏期的霉變研究相對(duì)比較滯后，尚未有這方面的報(bào)道。

為此，在三七產(chǎn)區(qū)收集了12份霉變?nèi)哌M(jìn)行分離培養(yǎng)及鑒定，以期為三七藥材的科學(xué)合理貯藏及防止霉變提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料：采自于主產(chǎn)區(qū)貯藏在農(nóng)戶、三七交易市場(chǎng)、企業(yè)倉(cāng)庫(kù)內(nèi)發(fā)生霉變的三七藥材。

供試培養(yǎng)基：供試基礎(chǔ)培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）和沙氏培養(yǎng)基。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 霉變?nèi)咚趾繙y(cè)定。按GB/T14769的方法測(cè)定水分。

1.2.2 霉變菌的分離培養(yǎng)及菌落形態(tài)觀察。無(wú)菌條件下用解剖針挑取三七藥材上的少許霉菌接種到培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱中25 ℃恒溫培養(yǎng)，2～3 d霉菌長(zhǎng)出菌落后，挑取菌落邊緣的少許菌絲移入培養(yǎng)基上分離純化菌種，觀察記錄霉變菌落的生長(zhǎng)及形態(tài)。

1.2.3 霉變菌的鑒定。根據(jù)霉變菌落、分生孢子梗和分生孢子形態(tài)觀察結(jié)果，參考《常見(jiàn)與常用真菌》[2]和《真菌鑒定手冊(cè)》[3]等文獻(xiàn)資料進(jìn)行霉變菌鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 三七藥材貯藏中霉變發(fā)生情況

對(duì)三七交易市場(chǎng)、企業(yè)倉(cāng)庫(kù)、民宅等區(qū)域進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明，所有區(qū)域內(nèi)的三七藥材在貯藏期間均有少量不同程度的霉變發(fā)生；通過(guò)對(duì)霉變?nèi)咚趾繙y(cè)定，其三七藥材內(nèi)的水分含量均超過(guò)15%，有的水分含量甚至超過(guò)30%，超過(guò)了國(guó)家藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。說(shuō)明水分含量過(guò)高是導(dǎo)致三七藥材產(chǎn)生霉變的主要因素之一。

2.2 霉變菌的分離培養(yǎng)及菌落形態(tài)觀察

室內(nèi)分離培養(yǎng)及菌落形態(tài)觀察結(jié)果表明，霉變菌落營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌生長(zhǎng)速度有差異。黃曲霉柱頭變種菌落在查氏瓊脂上12 d直徑57～65 mm；肇慶曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑60 mm，12～14 d直徑65 mm；多育曲霉菌落在查氏瓊脂上10～14 d直徑9～15 mm；溜曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑37～55 mm，10～14 d直徑50～60 mm；兩形頭曲霉菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)較慢，7 d直徑10～12 mm，12～14 d直徑25 mm；毒曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑50～60 mm，12～14 d直徑55～65 mm；合陽(yáng)曲霉菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)較慢，7 d直徑12～17 mm，12～14 d直徑27～30 mm，粒落曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑30 mm，10～14 d直徑45～48 mm；聚多曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑約22 mm，10～12 d直徑25～40 mm；炭黑曲霉菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速，7 d直徑40～60 mm；日本曲霉原變種菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速，10 d直徑60～70 mm，少數(shù)菌株在50 mm以下；米曲霉舒展變種菌落在查氏瓊脂上7 d直徑30～35 mm，10～12 d長(zhǎng)滿全皿；塔賓曲霉菌落在查氏瓊脂上生長(zhǎng)迅速，7 d直徑50～75 mm。endprint

2.3 引起三七霉變的霉菌種類

依據(jù)霉變菌落、分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)觀察結(jié)果，現(xiàn)已鑒定出引起三七霉變的菌種有黃曲霉柱頭變種（Aspergillus flavus Link var.clumnaris）、肇慶曲霉 （Aspergillus zhaoqingensis）、多育曲霉（Aspergillus proliferans）、溜曲霉（Aspergillus tamarii）、兩形頭曲霉（Aspergillus）、毒曲霉（As-pergillus toxicarius）、合陽(yáng)曲霉（Aspergillus heyangensis）、寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）、粒落曲霉（Aspergillus granulo-sus）、聚多曲霉（Aspergillus sydowii）、炭黑曲霉（Aspergillus carbonarius）、日本曲霉原變種（Aspergillus japonicus Saito var.japonicus、米曲霉舒展變種（Aspergillus oryzae var. effuses）和塔賓曲霉（Aspergillus tubingensis）等14種主要霉變菌種類。由此表明，引起三七藥材霉變的霉變菌種是多種多樣的，只要有霉菌寄生的條件就能夠引起三七產(chǎn)生霉變。

3 結(jié)論與討論

中藥材發(fā)霉的原因有多種，大多數(shù)是由于中藥材未能充分干燥，含水量超出貯藏標(biāo)準(zhǔn)或者中藥材在貯藏過(guò)程中吸收外界水分導(dǎo)致受潮，從而引起中藥材發(fā)霉[4]。三七藥材傳統(tǒng)貯藏大多是采用塑料編制袋或麻袋盛裝后，置于室內(nèi)常溫條件下進(jìn)行貯藏，該種貯藏方式極容易引起霉變或蟲害的發(fā)生。研究表明，三七藥材在貯藏過(guò)程中水分含量大于15%就會(huì)引起發(fā)霉，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生腐爛變質(zhì)，水分含量過(guò)高是導(dǎo)致三七藥材產(chǎn)生霉變的主要因素之一。因此，三七藥材貯藏時(shí)其水分含量一定要控制在14%以下，保證其充分干燥，這樣才不利于霉菌的生長(zhǎng)和繁殖，三七藥材才能夠長(zhǎng)時(shí)間貯藏。

霉菌廣泛存在于自然界中，特別是空氣和土壤中，由于空氣中有大量的霉菌孢子，散落在藥材的表面，在遇到適宜的條件如溫度25 ℃、濕度（空氣相對(duì)濕度在85%以上或藥材含水量超過(guò)15%）及足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等條件，即萌發(fā)成菌絲（發(fā)霉），并產(chǎn)生酵素將藥材中的蛋白質(zhì)、糖類、脂肪、膠質(zhì)等成分分解，致使藥材霉壞變質(zhì)[5]。通過(guò)對(duì)霉變菌進(jìn)行分離、純化、鑒定。結(jié)果表明，從霉變?nèi)呱戏蛛x出14種霉菌種類，其霉菌菌落營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌落生長(zhǎng)速度有差異。說(shuō)明引起三七藥材霉變的霉變菌種是多種多樣的，只要有霉菌寄生的條件就能夠引起三七產(chǎn)生霉變。

三七采挖后，水分含量較高，若不及時(shí)晾干，堆捂就會(huì)造成三七霉變腐爛[6-9]，由于三七藥材貯藏期間霉變的研究尚屬空白，本研究主要開(kāi)展了三七霉變菌的分離培養(yǎng)及鑒定，對(duì)引起三七霉變的主要優(yōu)勢(shì)霉變菌和霉變的機(jī)理、不同霉變菌對(duì)三七有效成分的影響及防止霉變的方法等有待進(jìn)一步研究[10-11]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：10.

[2] 崔秀明，雷紹武.三七GAP栽培技術(shù)[M].昆明：云南科技出版社，2002：72.

[2] 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所.常見(jiàn)與常用真菌[M].北京：科學(xué)出版社，1973.

[3] 魏景超.真菌鑒定手冊(cè)[M].上海：上海科學(xué)出版社，1979：9.

[4] 張翠利，李琨，付麗娜，等.中藥材的儲(chǔ)存與有效成分之間關(guān)系的研究現(xiàn)狀[J].廣州化工，2015，43（20）：18-20.

[5] 孫婕，梁志剛.引進(jìn)中藥材霉變的環(huán)境因子[J].中草藥，2006，37（增刊1）：362-363.

[6] 孫玉琴，高明海，朱云飛，等.烤房快速干燥對(duì)三七品質(zhì)的影響研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（3）：317-319.

[7] 孫歡，劉勝蘭，胡綱，等.當(dāng)歸藥材霉變前后質(zhì)量變化研究[J].藥物研究，2016，25（1）：44-46.

[8] 于莉，吳曉毅，廖永紅，等.貯藏過(guò)程中影響中藥材質(zhì)量的相關(guān)因素分析[J].中南藥學(xué)，2015，13（5）：547-550.

[9] 吳啟南，錢大瑋.中藥材貯藏過(guò)程的質(zhì)量變化機(jī)制探討[J].中國(guó)中藥雜志，2010，35（14）：1904-1908.

[10] 盧萍紅.中藥材蟲蛀霉變的原因與對(duì)策[J].傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，19（24）：68.

[11] 劉秋桃，孔維軍，楊美華，等.儲(chǔ)藏過(guò)程在易霉變中藥材的科學(xué)養(yǎng)護(hù)技術(shù)評(píng)述[J].中國(guó)中藥，2014，40（7）：1223-1229.endprint